b'\n_START_ARTICLE_\nPolimorfismo de conformaci\xc3\xb3n de cadena simple\n_START_PARAGRAPH_\nEl Polimorfismo de Conformaci\xc3\xb3n de Cadena Simple o SSCP, de sus siglas en Ingl\xc3\xa9s (Single Stranded Conformational Polymorphism) es una t\xc3\xa9cnica de rastreo de mutaciones usada en el diagn\xc3\xb3stico molecular basada en la migraci\xc3\xb3n electrofor\xc3\xa9tica del ADN._NEWLINE_Se calcula que esta t\xc3\xa9cnica detecta del 35 al 100% de las posibles mutaciones, pero debe haber al menos 30% de alelos mutantes. Es \xc3\xbatil para detectar enfermedades hereditarias; sin embargo, es m\xc3\xa1s complicado para detectar enfermedades som\xc3\xa1ticas como el c\xc3\xa1ncer.\n_START_SECTION_\nIntroducci\xc3\xb3n\n_START_PARAGRAPH_\nEl Polimorfismo de Conformaci\xc3\xb3n de Cadena Simple (SSCP) es una t\xc3\xa9cnica de rastreo de mutaciones basada en el distinto comportamiento electrofor\xc3\xa9tico que presentan las mol\xc3\xa9culas monocatenarias de ADN seg\xc3\xban su secuencia en un gel de poliacrilamida no desnaturalizante. Al ser una t\xc3\xa9cnica de rastreo o barrido es \xc3\xbatil para determinar de forma r\xc3\xa1pida la presencia de mutaci\xc3\xb3n, pero no aporta informaci\xc3\xb3n acerca de la mutaci\xc3\xb3n concreta que presenta el ADN._NEWLINE_Una mol\xc3\xa9cula de ADN monocatenaria tiende siempre a formar estructuras secundarias debido a apareamientos internos entre sus bases, puesto que "prefiere" estar en forma de doble cadena que como cadena simple. Como consecuencia de dichos apareamientos, se forman unas estructuras tridimensionales de diferente conformaci\xc3\xb3n, dependiendo de la secuencia concreta de la hebra. Dichas estructuras reciben el nombre de "conformers". Seg\xc3\xban la forma adquirida por la mol\xc3\xa9cula, \xc3\xa9sta migrar\xc3\xa1 con mayor o menor facilidad a trav\xc3\xa9s de un gel de electroforesis, pudiendo llegar a distinguirse de esta manera dos hebras de ADN cuyas secuencias sean muy parecidas._NEWLINE_El m\xc3\xa9todo tiene una gran potencia, pues la sustituci\xc3\xb3n de una \xc3\xbanica base es capaz de hacer que la mol\xc3\xa9cula adquiera una conformaci\xc3\xb3n tridimensional totalmente distinta.\n_START_SECTION_\nProcedimiento experimental\n_START_PARAGRAPH_\nLos fragmentos de ADN a analizar por esta t\xc3\xa9cnica deben tener una tama\xc3\xb1o medio de unas 400 pares de bases, de manera que el primer paso es amplificar por PCR la regi\xc3\xb3n del gen de inter\xc3\xa9s que queremos estudiar. A continuaci\xc3\xb3n, el producto de la PCR se desnaturaliza calent\xc3\xa1ndolo a 94\xc2\xbaC y se enfr\xc3\xada r\xc3\xa1pidamente en hielo. El cambio de temperatura debe ser brusco para que las mol\xc3\xa9culas de cadena simple no vuelvan a hibridar entre s\xc3\xad, sino consigo mismas. Un cambio de una sola base en la secuencia puede hacer que cambie la conformaci\xc3\xb3n. Finalmente, los fragmentos reasociados se someten a electroforesis no desnaturalizante en gel de acrilamida, pudi\xc3\xa9ndose detectar tanto en geles de poliacrilamida como mediante electroforesis capilar con control de la temperatura. Para la visualizaci\xc3\xb3n no se puede emplear bromuro de etidio, ya que es un agente intercalante. Por ello, se suele te\xc3\xb1ir el gel con tinci\xc3\xb3n de plata._NEWLINE_En el caso de que no exista mutaci\xc3\xb3n, en el gel se detectar\xc3\xa1n \xc3\xbanicamente las bandas correspondientes al homod\xc3\xbaplex (formado por la reasociaci\xc3\xb3n parcial de dos hebras de ADN complementarias que se han vuelto a unir durante la electroforesis), as\xc3\xad como las cadenas monocatenarias que se han replegado adquiriendo una conformaci\xc3\xb3n tridimensional concreta. Si, por el contrario, existe una mutaci\xc3\xb3n, aparecer\xc3\xa1n bandas nuevas debido al plegamiento de las cadenas mutadas, que ser\xc3\xa1 distinto al de las cadenas nativas. _NEWLINE_Como se ha dicho antes, esta t\xc3\xa9cnica no permite identificar la mutaci\xc3\xb3n concreta; para ello es necesario secuenciar los productos de la PCR y compararlo con la secuencia normal. Sin embargo, la utilidad de esta t\xc3\xa9cnica deriva de que permite de una manera r\xc3\xa1pida y sencilla descartar la presencia de mutaciones._NEWLINE_A pesar de su sencillez, no est\xc3\xa1 exento de ciertas desventajas, entre las que destacan el car\xc3\xa1cter imprevisible del comportamiento electrofor\xc3\xa9tico de las cadenas simples, el cual se ve influenciado por las condiciones en la que tiene lugar la migraci\xc3\xb3n (temperatura, etc.). La segunda gran desventaja es que a medida que aumenta el tama\xc3\xb1o de la mol\xc3\xa9cula a analizar, \xc3\xa9sta se vuelve insensible a determinados cambios, adoptando siempre la misma conformaci\xc3\xb3n tridimensional a pesar de haberse producido un cambio en su secuencia. Adem\xc3\xa1s, la desnaturalizaci\xc3\xb3n completa es dif\xc3\xadcil de conseguir y muchas veces aparecen bandas en el gel correspondientes a doble cadena.\n_START_SECTION_\nAplicaciones en Biolog\xc3\xada Molecular\n_START_PARAGRAPH_\nLa t\xc3\xa9cnica SSCP se ha usado para descubrir nuevos polimorfismos en el ADN, pero actualmente est\xc3\xa1 siendo reemplazada por las nuevas t\xc3\xa9cnicas de secuenciaci\xc3\xb3n directa del ADN, dado que son m\xc3\xa1s eficientes y precisas. _NEWLINE_Hoy en d\xc3\xada, la t\xc3\xa9cnica SSCP es m\xc3\xa1s usada como m\xc3\xa9todo de diagn\xc3\xb3stico en Biolog\xc3\xada Molecular, ya que puede ser utilizada para genotipar. Es decir, permite detectar determinados alelos tanto en homocigosis como en heterocigosis, gracias a que cada alelo, debido a su diferencia en la secuencia gen\xc3\xa9tica, migrar\xc3\xa1 con distinta movilidad durante la electroforesis. Esto implica una notable utilidad en el diagn\xc3\xb3stico de ciertas enfermedades gen\xc3\xa9ticas._NEWLINE_Tambi\xc3\xa9n es ampliamente usada en Virolog\xc3\xada para detectar variaciones entre diferentes cepas de virus. Dichas cepas son distintas debido a mutaciones, lo que dar\xc3\xa1 a lugar a que adopten distintas conformaciones y por tanto, sean diferenciables mediante un gel SSCP.\xe2\x80\x8b'