b'\n_START_ARTICLE_\nEspectroscopia mediante resonancia magn\xc3\xa9tica nuclear de prote\xc3\xadnas\n_START_PARAGRAPH_\nLa espectroscopia mediante resonancia magn\xc3\xa9tica nuclear de prote\xc3\xadnas (usualmente llamada RMN de prote\xc3\xadnas) es un campo de la biolog\xc3\xada estructural en el cual se utiliza espectroscopia RMN para obtener informaci\xc3\xb3n sobre la estructura y din\xc3\xa1mica de las prote\xc3\xadnas. El campo fue desarrollado por Kurt W\xc3\xbcthrich, entre otros, qui\xc3\xa9n comparti\xc3\xb3 el premio Nobel de qu\xc3\xadmica en 2002. Las t\xc3\xa9cnicas de RMN se utilizan en forma rutinaria en el \xc3\xa1mbito acad\xc3\xa9mico y en la industria de biotecnolog\xc3\xada. La determinaci\xc3\xb3n de la estructura de las prote\xc3\xadnas mediante espectroscopia RMN por lo general consiste en varias fases sucesivas, cada una de ellas utilizando un conjunto de t\xc3\xa9cnicas altamente especializadas. La muestra es preparada, se asignan las resonancias, se generan las restricciones y se calcula y valida la estructura.\n_START_SECTION_\nAsignaci\xc3\xb3n de resonancias\n_START_PARAGRAPH_\nPara analizar los datos de resonancia magn\xc3\xa9tica es necesario obtener la asignaci\xc3\xb3n de las resonancias de la prote\xc3\xadna, es decir, descubrir qu\xc3\xa9 desplazamiento qu\xc3\xadmico corresponde a cada n\xc3\xbacleo at\xc3\xb3mico. Para lograrlo, se han dearrollado distintos tipos de experimentos, dependiendo de si la prote\xc3\xadna est\xc3\xa1 isot\xc3\xb3picamente etiquetada o no, pues muchos de los experimentos de asignaci\xc3\xb3n dependen del carbono-13 y el nitr\xc3\xb3geno-15.\n_START_SECTION_\nGeneraci\xc3\xb3n de restricciones\n_START_PARAGRAPH_\nPara realizar c\xc3\xa1lculos de estructura es necesario generar una serie de par\xc3\xa1metros experimentalmente determinados.\n_START_SECTION_\nRestricciones de distancia\n_START_PARAGRAPH_\nUn "pico de cruce" en un experimento NOESY indica proximidad espacial entre los dos n\xc3\xbacleos. Cada pico puede convertirse, por tanto, en una distancia m\xc3\xa1xima entre los n\xc3\xbacleos, normalmente entre 1,8 y 6 amstrongs. La intensidad del pico es proporcional a la distancia elevada a -6, de modo que la distancia se determina de acuerdo a la intensidad del pico._NEWLINE_La asignaci\xc3\xb3n de picos puede realizarse manualmente, pero resulta mucho m\xc3\xa1s efectivo automatizar esta tarea mediante programas computacionales como CYANA\xe2\x80\x8b y ARIA/CNS.\xe2\x80\x8b\n_START_SECTION_\nRestricciones de orientaci\xc3\xb3n\n_START_PARAGRAPH_\nLas mol\xc3\xa9culas del analito en una muestra pueden ordenarse parcialmente en relaci\xc3\xb3n al campo magn\xc3\xa9tico del espectr\xc3\xb3metro mediante la manipulaci\xc3\xb3n de las condiciones de la muestra. Las t\xc3\xa9cnicas m\xc3\xa1s comunes incluyen la adici\xc3\xb3n de bacteri\xc3\xb3fagos o bicelas o la preparaci\xc3\xb3n de la muestra en un gel de poliacrilamida. Esto genera un entorno local que favorece ciertas orientaciones de mol\xc3\xa9culas no esf\xc3\xa9ricas. Normalmente, en la RMN en soluci\xc3\xb3n el acoplamiento dipolar entre n\xc3\xbacleos se promedia, debido al r\xc3\xa1pido tumbling de la mol\xc3\xa9cula. El acoplamiento dipolar suele utilizarse en la RMN de estado s\xc3\xb3lido y proporciona informaci\xc3\xb3n sobre la orientaci\xc3\xb3n relativa de los vectores de enlace en relaci\xc3\xb3n a un marco de referencia global. T\xc3\xadpicamente, la orientaci\xc3\xb3n del vector N-H se determina en un experimento tipo HSQC.\xe2\x80\x8b\n_START_SECTION_\nC\xc3\xa1lculo de la estructura\n_START_PARAGRAPH_\nLas restricciones determinadas experimentalmente pueden ser utilizadas como input para el proceso de c\xc3\xa1lculo de la estructura tridimensional. Los programas computacionales, como CYANA o XPLOR-NIH,\xe2\x80\x8b tratan de satisfacer tantas restricciones como sea posible, adem\xc3\xa1s de propiedades generales de las prote\xc3\xadnas como la longitud de los enlaces y los \xc3\xa1ngulos. Los algoritmos convierten las restricciones experimentales y las propiedades generales de las prote\xc3\xadnas en t\xc3\xa9rminos energ\xc3\xa9ticos, y tratan de minimizar la energ\xc3\xada. Este proceso resulta en un conjunto de estructuras que convergen si los datos son suficientes para dictar un plegamiento determinado.\n_START_SECTION_\nDin\xc3\xa1mica\n_START_PARAGRAPH_\nLa RMN puede ofrecer informaci\xc3\xb3n sobre la din\xc3\xa1mica de varias partes de la prote\xc3\xadna, adem\xc3\xa1s de sobre la estructura. Esto implica medir tiempos de relajaci\xc3\xb3n como T\xe2\x82\x81 y T\xe2\x82\x82 para determinar par\xc3\xa1metros de orden, tiempos de correlaci\xc3\xb3n y tasas de intercambio qu\xc3\xadmico. La relajaci\xc3\xb3n (RMN) es una consecuencia de los campos magn\xc3\xa9ticos locales que fluct\xc3\xbaan en una mol\xc3\xa9cula, generados por movimientos moleculares. De este modo, las medidas de los tiempos de relajaci\xc3\xb3n pueden aportar informaci\xc3\xb3n de los movimientos dentro de una mol\xc3\xa9cula a nivel at\xc3\xb3mico. En los estudios RMN de din\xc3\xa1mica molecular, el is\xc3\xb3topo nitr\xc3\xb3geno-15 es el n\xc3\xbacleo preferido, porque sus tiempos de relajaci\xc3\xb3n son relativamente simples para relacionarlos con los movimientos moleculares que, sin embargo, requieren marcar isot\xc3\xb3picamente la prote\xc3\xadna. Los tiempos de relajaci\xc3\xb3n T\xe2\x82\x81 y T\xe2\x82\x82 pueden medirse utilizando varios tipos de experimentos basados en HSQC. Los tipos de movimientos que pueden ser detectados son aquellos que ocurren en una escala de tiempo de entre 10 picosegundos y 10 nanosegundos. Adem\xc3\xa1s, pueden estudiarse movimientos m\xc3\xa1s lentos que tienen lugar en un rango temporal de entre 10 microsegundos y 100 milisegundos. No obstante, puesto que los \xc3\xa1tomos de nitr\xc3\xb3geno se encuentran principalmente en el esqueleto de la prote\xc3\xadna, los resultados reflejan principalmente los movimientos del esqueleto, que es la parte m\xc3\xa1s r\xc3\xadgida de la prote\xc3\xadna. Por lo tanto, los resultados obtenidos por la medida de relajaci\xc3\xb3n del nitr\xc3\xb3geno-15 pueden no ser representativos de la prote\xc3\xadna entera. De ah\xc3\xad que, recientemente, se hayan desarrollado t\xc3\xa9cnicas que utilizan medidas de relajaci\xc3\xb3n de carbono-13 y deuterio, lo que permite estudios sistem\xc3\xa1ticos de los movimientos de las cadenas laterales de amino\xc3\xa1cidos.'