b'\n_START_ARTICLE_\nELISA\n_START_PARAGRAPH_\nLa t\xc3\xa9cnica ELISA (acr\xc3\xb3nimo del ingl\xc3\xa9s Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay: \xe2\x80\x98ensayo por inmunoabsorci\xc3\xb3n ligado a enzimas\xe2\x80\x99) es una t\xc3\xa9cnica de inmunoensayo en la cual un ant\xc3\xadgeno inmovilizado se detecta mediante un anticuerpo enlazado a una enzima capaz de generar un producto detectable, como cambio de color o alg\xc3\xban otro tipo; en ocasiones, con el fin de reducir los costos del ensayo, nos encontramos con que existe un anticuerpo primario que reconoce al ant\xc3\xadgeno y que a su vez es reconocido por un anticuerpo secundario que lleva enlazado la enzima anteriormente mencionada. La aparici\xc3\xb3n de colorantes permite medir indirectamente mediante espectrofotometr\xc3\xada el ant\xc3\xadgeno en la muestra._NEWLINE_Se usa en muchos laboratorios para determinar si un anticuerpo particular est\xc3\xa1 presente en la muestra de sangre de un paciente. Aunque el procedimiento es rutinario y sencillo, involucra a un gran n\xc3\xbamero de variables, tales como selecci\xc3\xb3n de reactivo, temperatura, medici\xc3\xb3n de volumen y tiempo, que si no se ajustan correctamente, puede afectar los pasos sucesivos y el resultado de la prueba.\n_START_SECTION_\nDispositivos empleados en ELISA\n_START_PARAGRAPH_\nSe han ensayado numerosas fases s\xc3\xb3lidas, desde los tubos de cristal de los or\xc3\xadgenes hasta las actuales microplacas de 96\xc2\xa0pocillos de pl\xc3\xa1stico tratado, para aumentar su capacidad de adsorci\xc3\xb3n (en su superficie) de mol\xc3\xa9culas, y con fondos de pocillo \xc3\xb3pticamente claros que permitan realizar las medidas de densidad \xc3\xb3ptica en instrumentos espec\xc3\xadficos, espectrofot\xc3\xb3metros de lectura de placas que han recibido el nombre de lectores ELISA. Actualmente se est\xc3\xa1n desarrollando dispositivos de mayor capacidad \xe2\x80\x94por ejemplo, con 384 y 1536 pocillos\xe2\x80\x94, adecuados para los sistemas de screening masivo de los sistemas robotizados (HTS, High-throughput system)._NEWLINE_Los lectores ELISA son espectrofot\xc3\xb3metros capaces de realizar lecturas seriadas de cada uno de los pocillos de la placa ELISA. A diferencia de un espectrofot\xc3\xb3metro convencional, con capacidad de leer todas las longitudes de onda del ultravioleta y el visible de manera continua, los lectores de ELISA disponen de sistemas de filtros que solo permiten la lectura de una o pocas longitudes de onda; son la que se corresponden con las necesarias para determinar la densidad \xc3\xb3ptica de los crom\xc3\xb3genos m\xc3\xa1s com\xc3\xbanmente utilizados.\n_START_SECTION_\nQuimioluminiscencia\n_START_PARAGRAPH_\nDurante determinadas reacciones qu\xc3\xadmicas, la luz generada por este fen\xc3\xb3meno constituye una alternativa conveniente y muy sensible para las mediciones de absorbancia en ELISA. Los tipos de ELISA que recurren a la quimioluminiscencia utilizan un sustrato que genera luz, en lugar del sustrato crom\xc3\xb3geno de las reacciones ELISA ordinarias. Tales son los casos de la oxidaci\xc3\xb3n del compuesto luminol por per\xc3\xb3xido de hidr\xc3\xb3geno y la enzima peroxidasa de r\xc3\xa1bano (HRP), que producen luz. La luz que se genera en dichas reacciones puede detectarse gracias a su capacidad de sensibilizar una pel\xc3\xadcula fotogr\xc3\xa1fica. La medici\xc3\xb3n cuantitativa de la emisi\xc3\xb3n de luz puede hacerse mediante el uso de un lumin\xc3\xb3metro._NEWLINE_La ventaja de las pruebas de quimioluminiscencia sobre las crom\xc3\xb3genas es la mejor\xc3\xada de la sensibilidad. En general, el l\xc3\xadmite de detecci\xc3\xb3n puede aumentarse al menos diez veces si se cambia un sustrato crom\xc3\xb3geno por uno que emita luz, y m\xc3\xa1s de doscientas veces cuando se adicionan agentes potenciadores.\n_START_SECTION_\nPrueba ELISPOT\n_START_PARAGRAPH_\nUna variante de la prueba ELISA, llamada ELISPOT, es capaz de detectar cuantitativamente el n\xc3\xbamero de c\xc3\xa9lulas en una poblaci\xc3\xb3n productora de anticuerpos espec\xc3\xadficos contra un ant\xc3\xadgeno determinado o un ant\xc3\xadgeno contra el que se dispone de un anticuerpo espec\xc3\xadfico. Aqu\xc3\xad, dichas placas se recubren con el ant\xc3\xadgeno reconocido por el anticuerpo de inter\xc3\xa9s o con el anticuerpo espec\xc3\xadfico para el ant\xc3\xadgeno cuya producci\xc3\xb3n se valora. Seguidamente, se a\xc3\xb1ade a las placas recubiertas una suspensi\xc3\xb3n de la poblaci\xc3\xb3n celular que se investiga e incuba. Las c\xc3\xa9lulas se disponen en la superficie de la placa, y las mol\xc3\xa9culas secretadas reactivas a las mol\xc3\xa9culas de captura son unidas en la cercan\xc3\xada de las c\xc3\xa9lulas secretoras, produci\xc3\xa9ndose un anillo de complejos ant\xc3\xadgeno-anticuerpo alrededor de cada c\xc3\xa9lula que sintetiza la mol\xc3\xa9cula de inter\xc3\xa9s. Despu\xc3\xa9s, la placa se lava y un anticuerpo unido a enzima espec\xc3\xadfico para el ant\xc3\xadgeno secretado, o para la especie de anticuerpo secretado, se a\xc3\xb1ade y deja que se unan. El posterior revelado del ensayo mediante adici\xc3\xb3n de un sustrato crom\xc3\xb3geno o emisor de luz adecuado indica la posici\xc3\xb3n de cada c\xc3\xa9lula productora de anticuerpo (o de ant\xc3\xadgeno) como un punto de color o luz.\xe2\x80\x8b'