Heloisa G. Bertagnon2 3 *
Jessyca B. Bellinazzi2
Mariana M. Coneglian3
Adriano F. Mendes3
2 Departamento de Clínica Médica, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade de São Paulo (USP), Avenida Prof. Dr. Orlando Marques de Paiva 87, Cidade Universitária, São Paulo, SP 05508-270, Brasil.
3 Departamento de Medicina Veterinária, Universidade Estadual do Centro-Oeste (Unicentro), Campus Cedeteg, Avenida Prof. Dr. Simeão Camargo Varella de Sá 3, Guarapuava, PR 85040-080, Brasil.
TERMOS DE INDEXAÇÃO: Dor; orquiectomia; garrotes; escala análogo visual; parâmetros fisiológicos; padrões comportamentais; expressão facial; bovinos; castração; cortisol; cirurgia
INDEX TERMS: Pain; orchiectomy; bulls; visual analogue scale; physiological parameters; behavioral patterns; facial expression; cattle; castration; cortisol; surgery
O mercado consumidor de carne bovina é cada vez mais exigente o que gera uma série de sistemas e técnicas de manejo animal, que tem como intuito principal aumentar o lucro imediato do produtor, ignorando por vezes vários aspectos relacionados ao bem-estar do animal, como dor e estresse (Costa & Cromberg 1997).
A castração de bezerros machos, por exemplo, é rotineiramente usada com a justificativa de facilitar o manejo destes animais e melhorar a qualidade da carne, entretanto há indícios de que sua execução gera dor nos animais mesmo quando protocolos analgésicos são utilizados (Ting et al. 2003, Thüer et al. 2007).
Estes processos dolorosos acarretam alterações fisiológicas manifestadas por aumento sérico de aldosterona, cortisol e catecolaminas (Fantoni & Mastrocinque 2002), que aumentam o consumo de substratos pelos tecidos, resultando em perda de peso, alteração da imunidade, predisposição de animais a doenças, atraso no crescimento e prejuízos reprodutivos principalmente (Molony et al. 1995, Bellinazzi et al. 2013). Deste modo faz-se necessário não só a busca por alternativas viáveis para atenuar esse problema sem consequências econômicas, como também o desenvolvimento de estratégias para a identificação precoce da dor. No entanto os modelos animais para aferição de dor acabam sendo subjetivos, especialmente nos ruminantes, que têm comportamento relativamente tranquilo e os sinais de estresse e dor podem não ser claros (Millman 2013).
O reconhecimento da dor e seu alívio é crítico para o bem-estar animal, e apesar de alguns progressos nesta área, ainda não há um teste ouro para avaliação de dor em ruminantes (Marti et al. 2010, Millman 2013, Müller 2015). Experimentos de analgesia pós-castração costumam utilizar como indicadores de dor os parâmetros fisiológicos de cortisol sérico e frequências cardíaca e respiratória (Molony et al. 1995, Fitzpatrick et al. 2006), no entanto estes parâmetros podem ser afetados pela simples manipulação do animal não refletindo necessariamente dor no pós cirúrgico (Becker et al. 2012).
Alguns pesquisadores desenvolveram protocolos baseados em comportamentos e postura do animal para evidenciar dor após castração, levando em conta vocalização, alteração de postura, e atividades de pisoteio, lambedura, hipofagia e perda de peso (Robertson et al. 1994, Ting et al. 2003, Thüer et al. 2007, Marti et al. 2010), todavia a natureza linfática do animal desqualifica a avaliação de alguns destes comportamentos como a vocalização (Lay et al. 1992). Além disso, a perda de peso avalia mais a dor crônica que a dor aguda (Ting et al. 2003).
As expressões faciais são indicadores sensíveis de dor em humanos. O relaxamento ou tensão dos músculos da face estabelecem unidade de ação facial especificas indicativas de emoção (Ekman et al. 1980). Este mesmo modelo já foi extrapolado para alguns animais, como macacos e ovelhas (Tate et al. 2006), cães (Bloom & Friedman 2013) e cavalos (Dalla Costa et al. 2014). Recentemente Müller (2015) validou este modelo para avaliar a demonstração de dor em bovinos submetidos à marcação da face com ferro quente, porém não se sabe se este modelo pode ser utilizado para outros estímulos dolorosos, como a castração.
Existe ainda escalas análogo visuais, que elencam uma serie de comportamentos, posturas, parâmetros vitais e expressões faciais para graduar a dor no paciente (Chambers et al. 2003, Dalla Costa et al. 2014), porém não encontrou-se na literatura, uma escala elaborada para ruminantes.
Foram utilizados oito bezerros machos, da raça Holandesa preto e branca, sadios provenientes de propriedades criatórias próximas a São Paulo. Estes animais foram aclimatados por um período de três meses antecedendo o experimento em baias da FMVZ-USP, São Paulo-SP, ficando dois animais por baia. Simultaneamente, os dois bezerros de cada baia foram castrados cirurgicamente, às 8h00, quando completaram 200 (±5 dias) dias de vida e 250 (±50 kg) de peso vivo. A orquiectomia foi feita com o animal em decúbito lateral direito, derrubado pelo método italiano em colchão. Após assepsia e anestesia local infiltrativa com lidocaína sem vasoconstritor a 2%, o procedimento cirúrgico foi realizado utilizando-se a técnica aberta e com ligadura do funículo espermático de acordo com o preconizado por Anderson (2007). Os animais receberam duas doses de 3mg/kg de cetoprofeno intravenoso, sendo a primeira no pré-cirúrgico e a outra 24 horas depois. Após o procedimento, os animais retornavam a suas baias, onde tinham livre acesso à água e feno.
As analises comportamentais (Comp), foram mensuradas por meio da somatória das frequências de comportamento e da porcentagem do tempo dispendido em posturas antiálgicas, descritas no Quadro 1 baseado no modelo proposto por Thüer et al. (2007) e Marti et al. (2010) com modificações. A somatória destes índices foi transformada em escore de 4 pontos. Para estas análises, os animais foram filmados durante 10 minutos nos momentos propostos com uma câmera digital (Cybershot 1080, Sony) posicionada fora da baia do animal e três observadores diferentes, em modelo cego em relação aos momentos, registraram o comportamento dos mesmos.
Quadro 1. Análise de comportamento: descrição das posturas e comportamentos adotados pelos bezerros antes e após o procedimento cirúrgico durante o experimento, baseada no modelo proposto por Thüer et al. (2007) e Marti et al. (2010)
Nas análises de expressão facial (Face), imagens que permitiam claramente a visualização da cabeça e face de cada animal foram extraídas dos vídeos, sendo duas imagens por momento. Cada imagem foi tratada, permitindo visualizar apenas a cabeça do animal sem o corpo e fornecida para dois observadores cegos em relação ao momento analisado. Observou-se a presença ou não das cinco unidades de ação facial (UAF): Colocação das orelhas para trás, dilatação das narinas, elevação/contração da face medial das pálpebras, elevação/contração da face lateral das pálpebras e abertura da boca, de acordo com o sugerido por Müller (2015). Estas UAF foram transformadas em escore de 0 a 5 pontos, sendo atribuído 1 ponto a cada UAF apresentada.
Em relação às análises de Comp, Face e EA, houve acordo acima de 90% entre os observadores. Para as avaliações de Comp, notou-se que alguns comportamentos relacionados à dor como pisoteio e lambedura foram manifestados em vários momentos em 50% dos animais (4/8), apenas em um momento em 25% dos animas (2/8) e em nenhum momento em 25% dos animais (2/8). Não foi observado abaixamento de cabeça em nenhum animal em nenhum dos momentos analisados e alguns animais agitaram a cauda constantemente (25%- 2/8), enquanto outros (76%-6/8) não apresentaram este comportamento em nenhum momento. Pode-se observar que os animais manifestaram dor entre os momentos 1 a 24 horas, sendo o de maior intensidade às 6 horas, o qual diferenciou estatisticamente dos momentos -30, 24, 72 e 420 horas (P=0,0001), quando aplicada a escala baseada no modelo proposto por Thüer et al. (2007) e Marti et al. (2010).
Para as análises de expressão facial, notou-se certa dificuldade em identificar as unidades de ação facial relacionadas à elevação/contração da face medial e lateral das pálpebras e dilatação de narinas, conforme exposto no Quadro 4. Tal identificação era mais facilmente observada em imagens de perfil, no entanto a coloração do pelo escuro dificultou a visualização com detalhe destas áreas. Nenhum animal apresentou abertura de boca nos momentos avaliados. De maneira semelhante à Comp, pode-se observar que os animais manifestaram dor entre os momentos 1 a 24 horas, sendo o de maior intensidade às 6 horas, o qual diferenciou estatisticamente dos momentos -30, 72 e 420 horas (P=0,002), quando aplicada no modelo proposto por Müller (2015).
Procedimentos de orquiectomia são dolorosos e ainda não existe um consenso sobre qual protocolo analgésico ou cirúrgico é ideal (Becker et al. 2012). Tal fato implicou em ausência de grupo controle, pois preconizou respeitar os preceitos de éticas e de bem-estar evitando-se grupo sem analgesia. Além disso, o foco do trabalho não foi comparar diferentes técnicas cirúrgicas ou analgésicas, optando-se desta maneira utilizar o animal como controle dele mesmo, realizando-se um estudo longitudinal, no qual o momento basal (M-30) foi o momento de comparação entre os demais momentos.
Para as análises do cortisol sérico, encontra-se ampla variação de resultados nos trabalhos que utilizaram a mesma metodologia cirúrgica e analgésica que a presente pesquisa. Observou-se aumento do cortisol sérico desde a primeira meia hora pós cirúrgica (Ballou et al. 2013), entre 4 a 5 horas (Onda et al. 2012), às 72 horas (Ballou et al. 2013) ou não encontrou-se aumento após o procedimento (Stafford et al. 2002), sendo todos estes resultados diferentes da presente pesquisa, cujo aumento foi 12 horas após o procedimento.
O pico de cortisol sérico indica uma resposta nociceptiva, mediada por uma série de hormônios que ativam mecanismos compensatórios causando taquicardia e taquipneia (Molony et al. 1995, Fitzpatrick et al. 2006). Desta maneira era esperado que o aumento da frequência respiratória ocorresse cronologicamente ao aumento do cortisol sérico. Possivelmente isto não ocorreu uma vez que o cortisol pode ser influenciado pela simples manipulação do animal, como a coleta de sangue (Becker et al. 2012) e a magnitude de sua resposta é influenciada pelo temperamento do animal, o que aumenta a variabilidade de respostas entre cada individuo (Hulbert et al. 2011). A frequência respiratória foi aferida por inspeção, portanto sem a manipulação do animal, o que sugere que esta variável sofreu menos influência externa que o cortisol sérico (Becker et al. 2012).
Tal qual a frequência respiratória, a aplicação das escalas também foi feita sem a manipulação do animal. O fato de serem capturadas por filmagem, ainda permite o uso de recursos como pausar, retornar ou amentar o tamanho das imagens, garantindo maior confiabilidade e transparência aos critérios adotados, bem como identificar novos comportamentos dos que os inicialmente propostos (Millman 2013, Dalla Costa et al. 2014).
A escala de comportamento foi baseada em relatos da literatura que indicaram que a dor visceral e a dor somática causadas pela orquiectomia possam ser identificadas e graduadas por lambedura do local afetado, escoiceamento, pisoteio, agitação da cauda, abaixamento da cabeça e posturas antiálgicas (Thüer et al. 2007, Marti et al. 2010). Apesar de estes comportamentos serem classificados como uma medida robusta de identificação dolorosa (Millman 2013) observou-se que os bezerros demonstravam também outros comportamentos como taquipneia, graduações diferentes de posicionamento antiálgicos incluindo abdome tenso e posição de auto auscultação além de expressões faciais de dor, permitindo que se elaborasse uma escala análogo visual mais abrangente (Quadro 2).
Cabe ressaltar que alguns animais da presente pesquisa não demostraram em nenhum momento pisoteio, lambedura do local afetado, agitação da cauda ou abaixamento da cabeça. Estes resultados também foram descritos por Marti et al. (2010), que concluíram que os animais castrados como mesmo protocolo analgésico não sentiram dor pós cirúrgica.
Discordando de Marti et al. (2010) e Millman (2013), acredita-se que a escala de comportamento não foi tão robusta para identificar dor e por isso encontrou-se certa discrepância na identificação de maior graduação de dor entre as escalas de comportamento e a análogo visual.
Tanto a escala de comportamento como a escala de expressão facial identificaram maior graduação de dor 6 horas após o procedimento. E apesar das análises de expressão facial demostrarem ser uma boa forma de caracterizar e graduar dor em bovinos (Millman 2013, Müller 2015), a metodologia proposta não permitiu que as faces fossem analisadas com detalhes em todos os animais nos momentos propostos.
Tal metodologia foi sugerida por Dalla Costa et al. (2014), na qual fotos eram removidas dos vídeos, o que diminui-se o tempo dispendido para estas análises, já que as escalas de Comp e EA foram realizadas em vídeos de 10 minutos para cada animal, repetidos por 8 momentos. Assim o tempo dispendido para as análises de dor foi, portanto, de no mínimo 800 minutos, e para análise da expressão facial foi de aproximadamente 40 minutos.
Além disso, quando as fotos são capturadas imediatamente da face do animal, como a metodologia proposta por Müller (2015), existe interação do examinador com o animal, o que pode interferir no comportamento ou a expressão facial dos mesmos. Esta interferência do avaliador na expressão facial foi sugerida por Leach et al. (2012), ao explicar que animais classificados como presa tem a habilidade de mascarar sinais óbvios de dor para escapar do predador.
Além disso, ambas as metodologias relatam que a coloração do pelo do animal interferiu na qualidade da imagem dificultando a análise das expressões faciais (Dalla Costa et al. 2014, Müller 2015), tal qual no presente trabalho.
Notou-se também que os animais não vocalizaram nos momentos pós-cirúrgicos, o que não pontuou escore de abertura da boca no presente estudo. Diferente dos achados de Müller (2015), que considerou esta unidade de ação facial (UAF) importante em seu estudo. Tal diferença se deve ao fato de que no trabalho de Müller (2015), as observações eram feitas imediatamente no momento da aplicação do estimulo doloroso. Desta maneira considerou-se que esta UAF não se aplica ao presente estudo. Apesar das vantagens relatadas em relação à metodologia proposta para caracterizar Face, verificamos que as fotos não foram capazes de substituir os vídeos, não apenas devido à perda de qualidade da imagem, mas também porque houve momentos nos vídeos em que as expressões faciais eram mais evidentes. Ainda notou-se a elevação/contração das faces medias e laterais das pálpebras nem sempre eram bem observadas e foi o principal ponto de discordância entre os observadores. Já a rigidez de pescoço e/ou de masseter era bem observada nos vídeos e são UAF importante para avaliação de dor em equinos (Dalla Costa et al. 2014).
Por isso a identificação de dor baseada em interpretação de múltiplas respostas, como os itens elencados para montar a escala análogo visual, aumenta a acurácia e a reprodutibilidade do teste (Thüer et al. 2007, Müller 2015).
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