Mas quem são os inimigos de Mickey? Primeiro Pietro Gambadilegno , seu inimigo número um. Mais do que um ladrão profissional, ele é um "bandido", já que em suas aventuras desempenhou vários papéis, desde o clássico ladrão, passando pelo gangster, passando pelo falsificador, passando pelo caçador de cachorros, ou mesmo pelo chefe de polícia (ver cartum de 1936, Dia de mudança).
Com sua estatura imponente, seu tamanho maciço e sua arrogância, Gambadilegno tem uma personalidade que assusta a todos, exceto Mickey, sempre pronto para ridicularizá-lo ao pegá-lo "em flagrante" em algum empreendimento sombrio. Em sua estreia, Gambadilegno na verdade tinha uma perna de pau, mas em uma história de 1942 "Mickey e o Lenhador" afirma tê-la substituído por uma prótese. Agora ele anda e corre como se nada tivesse acontecido. Desde 1960, Gambadilegno é acompanhado por uma figura feminina chamada Trudy, semelhante a ele em tamanho e semelhante na alma do golpe. Ela é caracterizada por um forte ciúme do parceiro. Outro personagem muito misterioso e intrigante que dá às histórias do Mickey Mouse a característica do gênero amarelo - detetive e Mancha negra, um bandido brilhante que usa uma folha preta e assina suas mensagens com uma mancha de tinta preta. Faz sua primeira aparição em 1939 com a história da obra-prima " Mickey e o mistério do Black Spot". É um tipo de Diabolik, capaz de inventar engenhosos dispositivos para roubar objetos preciosos. Ao contrário de Gambadilegno, ele tem uma mente muito fina que coloca a intuição de Mickey à prova.Outros companheiros de aventuras
Outros personagens muito importantes devem ser lembrados, como o chefe de polícia de Topolínia, Comissário Basettoni e seu fiel ajudante Acelerador, que confia cegamente em Mickey Mouse quando se trata de resolver casos muito complexos. Então há gancho, o anverso de uma pega falante amigo de Mickey Mouse, muito esperta e inteligente, protagonista de lindas histórias escritas por Romano Scarpa dos anos 60 em diante (seu amigo juntou-se a Gancio Gross) O sucesso de Mickey e seus amigos também se deve ao fato de que em todos esses anos muitos dos personagens da Disney se modernizaram na forma de se vestir e suas aventuras se adaptaram aos tempos. Esse segredo faz dele ainda hoje um dos quadrinhos mais lidos do mundo.