Bolsa 05/60630-1 - Células-tronco, Diferenciação celular - BV FAPESP
Análise da expressão gênica de marcadores neurais em culturas de células-tronco adultas e possível aplicação da terapia celular para AVC em modelos "stroke prone" SHR
Processo: 05/60630-1
Assunto(s): Células-tronco Diferenciação celular Medula óssea Proteínas reguladoras de apoptose Reação em cadeia da polimerase via transcriptase reversa (RT-PCR) Ratos endogâmicos SHR
Quando cultivadas em uma placa de cultura, as células-tronco (CT) se diferenciam espontaneamente em uma miscelânea de tecidos. Com a utilização de fatores de expressão apropriados, podemos levá-las a se transformar em tipos específicos de células, sendo que alguns tecidos aparecem com mais facilidade do que outros. As CT mais estudadas do organismo adulto são as hematopoiéticas retiradas da medula óssea. Neste estudo, nós utilizaremos a técnica de Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction (RT-PCR)" convenciona! e em tempo real a fim de se determinar alguns dos genes mais importantes para as primeiras etapas de diferenciação de CT adultas, enfatizando-se as células neuronais. Isto porque nosso modelo para terapia com CT é a linhagem de ratos Stroke prone SHR, que desenvolve tão severa hipertensão que, em geral, sofre um acidente vascular cerebral, quando se encontra próximo de um ano de idade. Na tentativa de induzir as CT a neurônios, utilizaremos fatores como "sonic hedgehog" e o ácido retinóico. Nos ensaios de RT-PCR iniciais, utilizaremos "primers" específicos para simplificação dos genes associados às primeiras etapas da diferenciação, como alguns fatores de crescimento, OCT4 e G3PDH como controle. Já no transplante das CT para os animais, terão maior importância os genes associados com a morte celular, como os apoteóticos bax, bcl2 e hsp 70. Após transplante, acompanharemos morfológica e molecularmente no cérebroo, o efeito das CT na prevenção e recuperação desta doença. (AU)