ReP USP - Detalhe do registro: Geração química de oxigênio-18 molecular no estado singlete, 18O2 (1´DELTA´g), e estudos de lesões em DNA
Autor USP: MARTINEZ, GLAUCIA REGINA - IQ
Subjects: OXIGÊNIO; OXIDAÇÃO (PROCESSOS;METABOLISMO); DNA (DANOS)
Abstract: O oxigênio molecular eletronicamente excitado ao estado singlete 1´DELTA´g, (1O2) é bastante reativo frente a moléculas orgânicas com alta densidade eletrônica. As reações do 1O2 com o ácido desoxirribonucleico (DNA) tem sido estudadas extensivamente, uma vez que, provocam lesões que tem sido relacionadas com diversos processos citotóxicos e patológicos. Esse trabalho visou estudar os mecanismos pelos quais ocorrem os processos de oxidação de bases do DNA por 1O2. Para isso, um parâmetro essencial foi a identificação dos produtos de oxidação gerados na reação dessa biomolécula com 1O2. Foi desenvolvida uma fonte de 1O2, com carater não-iônico, preparada com oxigênio-18 molecular e a N,N´-di(2,3-dibidroxipropil)-3,3'-(1,4-naftilideno) dipropanamida (DHPN18O2). A fonte e capaz de gerar 1O2 isotopicamente marcado ('ANTPOT.18'['ANTPOT.1'O 'IND.2']). A incubação de DNA de timo de bezerro e células de fibroblastos com os endoperoxidos hidrofílicos do 3,3'-(1,4-naftilideno)dipropanoato de sódio (NDPO2) e da N,N´-di(2,3-dihidroxipropil)-3,3'-(1,4-naftilideno)dipropanamida (DHPNO2), como fontes puras de 1O2, mostrou que a 8-oxo-7,8-dihidro-2'-desoxiguanosina (8-oxodGuo) e a lesão majoritária. Quando o DHPNO2 foi usado, níveis mais altos de 8-oxodGuo foram detectados devido ao seu maior rendimento de formação de 1O2 e por ser capaz de penetrar em células. O uso do DHPN18O2 na incubação de células demonstrou que o 1O2 lesadiretamente o DNA nuclear e forma 8-oxodGuo com oxigênio-18 incorporado. A identificação dos principais produtos de oxidação da 8-oxodGuo por 1O2 ou 18[1O2] foi feita usando análises de HPLC e espectrometria de massas em tandem com ionização por electrospray. Dessa forma, a imidazolona, oxazolona e os diastereoisomeros da espiroiminodihidantoina marcados com oxigênio-18 foram detectados. Além disso, foi caracterizado um nucleosídeo modificado que exibe as características da guanidinohidantoina ) oxidada. O uso de EAS para captação de 1O2 em sistemas aquosos e detecção do produto EASO2 por HPLC e espectrometria de massas possibilitou mostrar que a decomposição espontânea de ONOO- não gerava 1O2. O trabalho desenvolvido contribuiu na elucidação de algumas propostas fundamentais para esclarecer os mecanismos que envolvem a geração do 1O2 e sua interação com o DNA. A compreensão desses processos e importante para desvendar fenômenos biológicos importantes como envelhecimento e câncer