PDF 'Transformação Do Fungo Ocratoxigênico Aspergillus Westerdijkiae Mediada Por Agrobacterium Tumefaciens – Marcia Magalhaes Mata' [Domínio Público] - Livraria Pública
Transformação Do Fungo Ocratoxigênico Aspergillus Westerdijkiae Mediada Por Agrobacterium Tumefaciens – Marcia Magalhaes Mata
Aspergillus westerdijkiae é um produtor de ocratoxina A que tem sido freqüentemente encontrado em grãos de café. A ocratoxina A é conhecida por ter efeitos nefrotóxicos e potencial carcinogênico para espécies animais. Neste trabalho é reportada pela primeira vez a transformação genética de A. westerdijkiae mediada por Agrobacterium tumefaciens. Conídios foram transformados para resistência a higromicina B usando a linhagem AGL-1 de A. tumefaciens. A condição mais favorável de transformação permitiu a obtenção de 36 transformantes para cada 106 conídios alvo. Dentre 600 transformantes; um total de 30 (5%) mostraram variações morfológicas. Dois mutantes (T10 e TS18) com significativa redução da capacidade de produção de ocratoxina A foram obtidos. Ambos mostraram significativa redução na conidiogênese quando comparados à linhagem selvagem. As seqüências que flanqueiam os sítios de integração do T-DNA foram amplificadas pela técnica denominada Thermal Asymmetric Interlaced PCR (TAIL-PCR). A seqüência obtida a partir do mutante TS18 mostrou homologia com uma possível monooxygenase de A. fumigatus. Para o mutante T10 foi identificada uma seqüência homóloga a um fator de transcrição da família jumonji de A. fumigatus.