1Programa de Pós-Graduação em Clínica Cirúrgica do Departamento de Cirurgia da Universidade Federal do Paraná - UFPR
A regeneração hepática é um evento que envolve várias células e uma complexa interação entre citocinas e fatores de crescimento. Higgins e Anderson1 publicaram os primeiros estudos sobre regeneração hepática em 1931, quando notaram uma marcante capacidade do fígado do rato se regenerar após hepatectomia parcial. Esse modelo de hepatectomia com ressecção de aproximadamente 70% da massa hepática tem sido largamente utilizado para investigação da regeneração hepática2. O processo regenerativo hepático em ratos assemelha-se ao processo de regeneração do fígado humano, o que justifica seu amplo uso em várias áreas da pesquisa biomédica atual3.
A regeneração hepática é um componente essencial no mecanismo de proteção orgânica contra a perda de tecido hepático funcionante, seja por agressão química, viral, perda traumática ou por hepatectomia parcial. Na ausência desse processo regenerativo, a morbidade e a mortalidade estão frequentemente aumentadas4.
O fígado apresenta a característica de ajustar-se ao tamanho proporcional requerido pelo receptor através da capacidade regenerativa, a qual é crucial para o sucesso do transplante hepático intervivos, e naqueles em que o órgão implantado é menor que o tamanho ideal para o organismo receptor5.
O fenômeno da regeneração hepática é amplo, complexo e ainda não completamente conhecido6 - 9. As interferências de medicamentos, do metabolismo intrínseco do organismo e de doenças também é motivo de estudo para a compreensão desta complexa rede de fatores estimuladores e inibidores da regeneração hepática.
O sirolimo é um novo fármaco, potente imunossupressor e atualmente proposto como terapêutica após transplantes hepáticos para controlar a rejeição do órgão. O mecanismo de ação é bloquear a resposta imune interferindo na produção de linfócitos. Liga-se a um complexo protêico intracelular denominado FKBP12 que é postulado como uma via de resposta ao estímulo regenerativo10 - 14. Esta interferência na proliferação celular pode ocasionar alterações no fenômeno de regeneração hepática. Portanto decidimos avaliar se o processo de regeneração hepática, após a ressecção de 70% do fígado de ratos, sob a influência do imunossupressor sirolimo pode determinar novas informações pertinentes à prática clínica.
Os ratos foram submetidos à clássica hepatectomia parcial de 70% com ressecção dos lobos lateral esquerdo e mediano após a ligadura do pedículo vascular por uma pequena incisão na linha mediana da parede abdominal1.
A regeneração hepática foi avaliada pela fórmula proposta por Kwon15 - % de regeneração = (S x PH x 70) / (PS x R), onde: S= peso em gramas do fígado ressecado no sacrifício; PH= peso do rato na hepatectomia; PS= peso do rato no sacrifício; e R= peso do fígado ressecado na hepatectomia experimental - que fornece um valor percentual de regeneração baseado nos pesos corporal e do fígado dos ratos nos períodos da hepatectomia e da morte.
A multiplicação celular foi avaliada pela contagem de células através de figuras de mitose pela coloração de hematoxilina-eosina e através da imunoistoquímica onde foram utilizados os marcadores de proliferação celular PCNA e o Ki6716 - 21.
Ao comparar os valores percentuais da regeneração pela fórmula de Kwon entre cada grupo, observa-se aumento significativo da taxa de regeneração nos grupos controle (GC24h X GC7d) e estudo (GE24h X GE7d) ao longo do tempo. O grupo controle 24 horas (GC24h) apresentou 60,72% e o grupo controle sete dias (GC7d) 83,61% (p=0,0001), enquanto o grupo de estudo 24 horas (GE24h) apresentou 59,32% e o grupo de estudo sete dias (GE7d) 81,76% (p=0,0001). A fase G2 (a mitose) acontece em 22-24 horas após a ressecção hepática, atingindo um pico em 32 a 34 horas após a operação, além disso, ciclos adicionais de síntese do DNA podem ser detectados dias após a hepatectomia parcial, justificando o aumento percentual da regeneração hepática pela fórmula de Kwon entre os grupos de estudo e controle22 - 25. Entretanto, quando comparados os grupos 24 horas (GC24h X GE24h) e os grupos sete dias (GC7d X GE7d) não houve diferença estatisticamente significativa (p=0,65 e 0,70, respectivamente). Estes dados sugerem não haver influencia do sirolimo no processo regenerativo quando utilizamos como parâmetro a fórmula de Kwon.
Na análise do PCNA utilizando-se os dados entre os subgrupos no mesmo período (GC24h X GE24h e GC7d X GE7d) e entre os grupos controle e estudo (GC24h X GC7d e GE24h X GE7d ) não houve diferença estatística significativa. Estes dados são semelhantes ao estudo realizado por Chavéz et al.26 que não demonstrou interferência na regeneração hepática pelo sirolimo. Quando se analisa os grupos controle, comparando-se GC24h X GC7d, verifica-se uma diminuição percentual nos hepatócitos positivos para PCNA com a evolução do período (p=0,30). Esta diminuição, mesmo que estatisticamente não significante, deve-se ao fato de que a maior proliferação dos hepatócitos ocorre próximo às primeiras 24 horas após a hepatectomia. Ao final dos sete dias, os núcleos não apresentam a cromatina organizada dentro de uma carioteca íntegra e o produto que é detectado pela imunoistoquímica se dispersa no citoplasma, impossibilitando sua positividade. Deve-se considerar que, no grupo de estudo, quando comparado o período de 24 horas com o de sete dias, foi encontrado um número percentual semelhante de hepatócitos corados pelo PCNA (p=0,97).
No estudo realizado por Palmes et al.27, com metodologia semelhante ao presente estudo, não foi verificada variação estatística no grupo de sete dias quando utilizado como parâmetro o Ki-67, no entanto, foi verificada variação estatística significativa na análise do fígado no segundo, terceiro e quarto dias. Este estímulo da proliferação celular no fígado, demonstrando um maior número de hepatócitos fora do período G0, pode estar relacionado com a inibição das células natural killer durante o processo regenerativo. Segundo Tamura et al.28, o FK506 (tacrolimo) poderia promover a regeneração hepática por inibir a atividade das células natural killer. A mesma hipótese poderia ser aplicada para o sirolimo, visto que apresenta estrutura molecular semelhante ao FK50629 - 31.