De tweede stap van glycolyse omvat de omzetting van glucose-6-fosfaat in fructose-6-fosfaat (F6P). Deze reactie vindt plaats met behulp van het enzym fosfoglucose-isomerase (PI). Zoals de naam van het enzym suggereert, omvat deze reactie een isomerisatiereactie. Figuur %: Stap 2.