«Hvordan konstruerte lentivirale vektorer og live-celleavbildning hjelper til med å forstå tidlige omprogrammeringshendelser»
Gitt en oppgave, forklarer du i enkle trinn hva oppgaven spør om, eventuelle retningslinjer den gir og hvordan du bruker disse retningslinjene for å finne svaret. Detaljerte instruksjoner: I denne oppgaven får du et sammendrag av artikkelen. Din oppgave er å generere tittel for denne artikkelen. Foretrukne titler er under tretti ord.
Problem: Induserte pluripotente stamceller (iPSCs) kan avledes fra somatiske celler ved genoverføring av omprogrammeringstranskripsjonsfaktorer. Ekspresjonsnivåer av disse faktorene påvirker sterkt den totale effekten til å danne iPSC-kolonier, men ytterligere bidrag fra stokastiske celle-iboende faktorer har blitt foreslått. Her presenterer vi konstruerte fargekodede lentivirale vektorer der kodonoptimaliserte omprogrammeringsfaktorer uttrykkes sammen av en sterk retroviral promoter som raskt blir dempet i iPSC, og avbildet konverteringen av fibroblaster til iPSC. Vi kombinerte fluorescensmikroskopi med langsiktig enkeltcellesporing, og brukte levende celleavbildning for å analysere fremveksten og sammensetningen av tidlige iPSC-klynger. Ved å bruke våre konstruerte lentivirale vektorer demonstrerer vi at vektordemping vanligvis skjer før eller samtidig med induksjon av en Oct4-eGFP-pluripotensmarkør. Rundt 7 dager etter transduksjon (pt) uttrykte en subfraksjon av celler i klonale kolonier Oct4-eGFP og ekspanderte raskt. Cellesporing av enkeltcelle-avledede iPSC-kolonier støttet konseptet om at stokastiske epigenetiske endringer er nødvendige for omprogrammering. Vi fant også at iPSC-kolonier kan dukke opp som en genetisk mosaikk som stammer fra forskjellige klynger. Forbedret vektordesign med kontinuerlig cellesporing skaper dermed et kraftig system for å utforske den subtile dynamikken i biologiske prosesser som tidlige omprogrammeringshendelser.
Løsning: