Second-harmonic imaging microscopy
இரண்டாவது-ஹார்மோனிக் இமேஜிங் நுண்ணோக்கி (ஷிம்) இரண்டாவது-ஹார்மோனிக் தலைமுறை (எஸ். எச். ஜி) எனப்படும் நேரியல் அல்லாத ஒளியியல் விளைவை அடிப்படையாகக் கொண்டது. செல் மற்றும் திசு அமைப்பு மற்றும் செயல்பாட்டைக் காட்சிப்படுத்துவதற்கான ஒரு சாத்தியமான நுண்ணோக்கி இமேஜிங் மாறுபட்ட பொறிமுறையாக ஷிம் நிறுவப்பட்டுள்ளது. இரண்டாவது-ஹார்மோனிக் நுண்ணோக்கி சம்பவ ஒளியிலிருந்து இரண்டாவது-ஹார்மோனிக் ஒளியை உருவாக்கும் ஒரு மாதிரியின் திறனில் உள்ள மாறுபாடுகளிலிருந்து முரண்பாடுகளைப் பெறுகிறது, அதே நேரத்தில் ஒரு வழக்கமான ஒளியியல் நுண்ணோக்கி ஒளியியல் அடர்த்தி, பாதை நீளம் அல்லது ஒளிவிலகல் குறியீட்டில் உள்ள மாறுபாடுகளைக் கண்டறிவதன் மூலம் அதன் மாறுபாட்டைப் பெறுகிறது. எஸ். எச். ஜி. க்கு மையச் சமச்சீர் அல்லாத மூலக்கூறு கட்டமைப்பைக் கொண்ட ஒரு பொருளின் வழியாகச் செல்லும் தீவிரமான லேசர் ஒளி தேவைப்படுகிறது, இது உள்ளார்ந்த அல்லது வெளிப்புறமாக தூண்டப்படுகிறது, எடுத்துக்காட்டாக ஒரு மின்சார புலத்தால். ஒரு எஸ். எச். ஜி பொருளிலிருந்து வெளிப்படும் இரண்டாவது-ஹார்மோனிக் ஒளி, பொருளுக்குள் நுழையும் ஒளியின் அலைநீளத்தில் (அதிர்வெண் இரட்டிப்பாகும்) சரியாக பாதி ஆகும். இரண்டு-ஃபோட்டான்-உற்சாகமான ஃப்ளோரசன்ஸ் (TPEF) ஒரு இரண்டு ஃபோட்டான் செயல்முறையாக இருந்தாலும், TPEF உற்சாகமான நிலையை தளர்த்தும் போது சில ஆற்றலை இழக்கிறது, அதே நேரத்தில் SHG ஆற்றல் சேமிப்பாகும். பொதுவாக, லித்தியம் நியோபேட் (LiNbO3), பொட்டாசியம் டைட்டனைல் பாஸ்பேட் (KTP = KTiOபீஓ4) மற்றும் லித்தியம் ட்ரைபோரேட் (LBO = LiB3O5) போன்ற SHG ஒளியை உற்பத்தி செய்ய ஒரு கனிம படிகத்தைப் பயன்படுத்தப்படுகிறது. எஸ். எச். ஜி. க்கு ஒரு பொருள் குறிப்பிட்ட மூலக்கூறு நோக்குநிலையைக் கொண்டிருக்க வேண்டும் என்றாலும், சம்பவ ஒளி அதிர்வெண் இரட்டிப்பாக இருக்க வேண்டும், சில உயிரியல் பொருட்கள் அதிக துருவமுனைப்பாக இருக்கலாம், மேலும் நியாயமான வரிசைப்படுத்தப்பட்ட, பெரிய சென்ட்ரோசிம்மெட்ரிக் அல்லாத கட்டமைப்புகளாக ஒருங்கிணைக்கப்படலாம். கொலாஜன், மைக்ரோட்யூபூல்கள் மற்றும் தசை மயோசின் போன்ற சில உயிரியல் பொருட்கள் எஸ். எச். ஜி சமிக்ஞைகளை உருவாக்க முடியும் என்றாலும், நீர் கூட வரிசைப்படுத்தப்பட்டு சில நிபந்தனைகளின் கீழ் இரண்டாவது-ஹார்மோனிக் சமிக்ஞையை உருவாக்க முடியும், இது எஸ். எச் நுண்ணோக்கியை எந்த லேபிளிங் மூலக்கூறுகளும் இல்லாமல் மேற்பரப்பு திறன்களைப் படமாக்க அனுமதிக்கிறது. எஸ். எச். ஜி முறை முக்கியமாக கட்டம் பொருந்தும் நிபந்தனையால் தீர்மானிக்கப்படுகிறது. ஒரு எஸ். எச். ஜி இமேஜிங் அமைப்பிற்கான ஒரு பொதுவான அமைப்பில் லேசர் ஸ்கேனிங் நுண்ணோக்கி இருக்கும், இதில் டைட்டானியம் சபையர் பயன்முறை-பூட்டப்பட்ட லேசர் கிளர்ச்சி ஆதாரமாக இருக்கும். எஸ். எச். ஜி சமிக்ஞை முன்னோக்கி திசையில் பரப்பப்படுகிறது. இருப்பினும், சில சோதனைகள் எஸ். எச். ஜி உற்பத்தி செய்யப்பட்ட சமிக்ஞையின் அலைநீளத்தில் பத்தில் ஒரு பங்கின் வரிசையில் உள்ள பொருள்கள் கிட்டத்தட்ட சமமான முன்னோக்கி மற்றும் பின்தங்கிய சமிக்ஞைகளை உருவாக்கும் என்பதைக் காட்டுகின்றன. நன்மைகள் நேரடி செல் மற்றும் திசு இமேஜிங்கிற்கு ஷிம் பல நன்மைகளை வழங்குகிறது. ஃப்ளோரசன்ஸ் மைக்ரோஸ்கோபி போன்ற பிற நுட்பங்களைப் போல மூலக்கூறுகளின் கிளர்ச்சியை எஸ். எச். ஜி உள்ளடக்குவதில்லை, எனவே மூலக்கூறுகள் ஃபோட்டோடாக்ஸிசிட்டி அல்லது ஃபோட்டோப்லீச்சிங்கின் விளைவுகளை அனுபவிக்கக்கூடாது. மேலும், பல உயிரியல் கட்டமைப்புகள் வலுவான எஸ். எச். ஜி சமிக்ஞைகளை உற்பத்தி செய்வதால், வெளிப்புற ஆய்வுகளுடன் மூலக்கூறுகளை பெயரிடுவது தேவையில்லை, இது ஒரு உயிரியல் அமைப்பு செயல்படும் முறையையும் மாற்றும். சம்பவ ஒளிக்கு அருகிலுள்ள அகச்சிவப்பு அலைநீளங்களைப் பயன்படுத்துவதன் மூலம், ஷிம் தடிமனான திசுக்களில் ஆழமாக இமேஜிங் செய்வதன் மூலம் மாதிரிகளின் முப்பரிமாண படங்களை உருவாக்கும் திறனைக் கொண்டுள்ளது. இரண்டு-ஃபோட்டான் ஃப்ளோரசன்ஸ் (2PEF) இரண்டு-ஃபோட்டான் ஃப்ளோரசன்ஸ் (2PEF) உடன் வேறுபாடு மற்றும் நிரப்பு என்பது SHG இலிருந்து மிகவும் மாறுபட்ட செயல்முறையாகும்ஃ இது எலக்ட்ரான்களை அதிக ஆற்றல் நிலைகளுக்கு கிளர்ச்சி செய்வதையும், அதைத் தொடர்ந்து ஃபோட்டான் உமிழ்வின் மூலம் கிளர்ச்சியை குறைப்பதையும் உள்ளடக்கியது (SHG ஐப் போலல்லாமல், இது 2-ஃபோட்டான் செயல்முறையாகவும் இருந்தாலும்). எனவே, 2PEF என்பது ஒரு ஒத்திசைவற்ற செயல்முறையாகும், இது இட ரீதியாக (உமிழப்படும் ஐசோட்ரோபிக்) மற்றும் தற்காலிகமாக (பரந்த, மாதிரி-சார்ந்த ஸ்பெக்ட்ரம்). இது எஸ். எச். ஜி போலல்லாமல், சில கட்டமைப்புகளுக்கு குறிப்பிட்டதாக இல்லை. எனவே திசுக்களில் எலாஸ்டின் போன்ற தன்னியக்க ஃப்ளோரசன்ஸை உருவாக்கும் சில மூலக்கூறுகளை வெளிப்படுத்த மல்டிபோட்டான் இமேஜிங்கில் எஸ். எச். ஜி உடன் இணைக்கப்படலாம் (அதே நேரத்தில் எஸ். எச். ஜி கொலாஜன் அல்லது மயோசினை வெளிப்படுத்துகிறது). எஸ். எச். ஜி இமேஜிங்கிற்கு பயன்படுத்தப்படுவதற்கு முன்பு, எஸ். எச். ஜியின் முதல் செயல்விளக்கம் 1961 ஆம் ஆண்டில் மிச்சிகன் பல்கலைக்கழகத்தில் பி. ஏ. ஃபிராங்கன், ஜி. வெய்ன்ரிச், சி. டபிள்யூ. பீட்டர்ஸ் மற்றும் ஏ. இ. ஹில் ஆகியோரால் ஒரு குவார்ட்ஸ் மாதிரியைப் பயன்படுத்தி நிகழ்த்தப்பட்டது. 1968 ஆம் ஆண்டில், இடைமுகங்களிலிருந்து எஸ். எச். ஜி ப்ளூம்பெர்கனால் கண்டுபிடிக்கப்பட்டது, அதன் பின்னர் மேற்பரப்புகளை வகைப்படுத்துவதற்கும் இடைமுக இயக்கவியலை ஆராய்வதற்கும் ஒரு கருவியாக பயன்படுத்தப்படுகிறது. 1971 ஆம் ஆண்டில், ஃபைன் மற்றும் ஹான்சென் உயிரியல் திசு மாதிரிகளிலிருந்து எஸ். எச். ஜி இன் முதல் அவதானிப்பைப் புகாரளித்தனர். 1974 ஆம் ஆண்டில், ஹெல்வர்த் மற்றும் கிறிஸ்டென்சன் ஆகியோர் பாலிக்ரிஸ்டலின் ZnSe இலிருந்து SHG சமிக்ஞைகளைப் படம்பிடிக்குவதன் மூலம் SHG மற்றும் நுண்ணோக்கியின் ஒருங்கிணைப்பை முதன்முதலில் தெரிவித்தனர். 1977 ஆம் ஆண்டில், கொலின் ஷெப்பர்ட் பல்வேறு எஸ். எச். ஜி படிகங்களை ஒரு ஸ்கேனிங் ஆப்டிகல் நுண்ணோக்கி மூலம் படம்பிடித்தார். எலி வால் தசைநாணில் உள்ள கொலாஜன் இழைகளின் நோக்குநிலையை ஆய்வு செய்வதற்காக 1986 ஆம் ஆண்டில் ஃபிராயண்ட் மற்றும் டாய்ச் ஆகியோரால் முதல் உயிரியல் இமேஜிங் சோதனைகள் செய்யப்பட்டன. 1993 ஆம் ஆண்டில், மின்சார புலங்களில் ஸ்டைரில் சாயங்களின் இரண்டாவது ஹார்மோனிக் பதிலை லூயிஸ் ஆய்வு செய்தார். உயிருள்ள உயிரணுக்களை இமேஜிங் செய்வதற்கான வேலையையும் அவர் காட்டினார். 2006 ஆம் ஆண்டில், கோரோ மிசுதானி குழு ஒரு ஸ்கேன் செய்யப்படாத எஸ். எச். ஜி நுண்ணோக்கியை உருவாக்கியது, இது பெரிய மாதிரிகளைக் கவனிப்பதற்குத் தேவையான நேரத்தை கணிசமாகக் குறைக்கிறது, இரண்டு ஃபோட்டான்கள் அகல-புல நுண்ணோக்கி 1996 இல் வெளியிடப்பட்டிருந்தாலும், எஸ். எச். ஜி-ஐக் கண்டறிய பயன்படுத்தப்பட்டிருக்கலாம். தாவர மாவுச்சத்து, பெரு மூலக்கூறு, சிலந்தி பட்டு மற்றும் பலவற்றைக் கண்காணிக்க ஸ்கேன் செய்யாத எஸ். எச். ஜி நுண்ணோக்கி பயன்படுத்தப்பட்டது. 2010 ஆம் ஆண்டில் விவோ இமேஜிங்கில் முழு விலங்குகளுக்கும் எஸ். எச். ஜி விரிவுபடுத்தப்பட்டது. 2019 ஆம் ஆண்டில், பூச்சிக்கொல்லிகளின் செயல்திறனை மதிப்பிடுவதற்கான ஒரு வழியை வழங்குவதற்காக இலை மேற்பரப்புகளில் நேரடியாக தேர்ந்தெடுக்கப்பட்ட இமேஜிங் வேளாண் இரசாயனங்களைப் பயன்படுத்தும்போது எஸ். எச். ஜி பயன்பாடுகள் விரிவடைந்தன. அளவு அளவீடுகள் ஓரியண்டேஷனல் அனிசோட்ரோபி எஸ். எச். ஜி துருவமுனைப்பு அனிசோட்ரோபி திசுக்களில் புரதங்களின் அமைப்பின் நோக்குநிலை மற்றும் அளவை தீர்மானிக்க பயன்படுத்தப்படலாம், ஏனெனில் எஸ். எச். ஜி சமிக்ஞைகள் நன்கு வரையறுக்கப்பட்ட துருவமுனைப்புகளைக் கொண்டுள்ளன. அனிசோட்ரோபி சமன்பாட்டைப் பயன்படுத்துவதன் மூலம்ஃ மற்றும் இணையான மற்றும் செங்குத்தான திசைகளில் துருவமுனைப்புகளின் தீவிரங்களைப் பெறுவதன் மூலம். ஒரு உயர் மதிப்பு ஒரு ஐசோட்ரோபிக் நோக்குநிலையைக் குறிக்கிறது, அதே நேரத்தில் குறைந்த மதிப்பு ஒரு ஐசோட்ரோபிக் கட்டமைப்பைக் குறிக்கிறது. கேம்பக்னோலா மற்றும் லோவ் ஆகியோரால் செய்யப்பட்ட ஆய்வில், கொலாஜன் இழைகள் ஒரு மதிப்புடன் நன்கு சீரமைக்கப்பட்ட கட்டமைப்புகளை உருவாக்கியது கண்டறியப்பட்டது. பின்தங்கிய எஸ். எச். ஜி எஸ். எச். ஜி ஒரு ஒத்திசைவான செயல்முறையாக இருப்பதால் (இட ரீதியாகவும் தற்காலிகமாகவும்), இது கிளர்ச்சியின் திசை குறித்த தகவல்களை வைத்திருக்கிறது மற்றும் ஐசோட்ரோபிக் முறையில் வெளியிடப்படுவதில்லை. இது முக்கியமாக முன்னோக்கி திசையில் (கிளர்ச்சியைப் போலவே) வெளியிடப்படுகிறது, ஆனால் கட்டம்-பொருந்தும் நிலையைப் பொறுத்து பின்தங்கிய திசையிலும் வெளியிடப்படலாம். உண்மையில், சமிக்ஞையின் மாற்றம் குறைவதற்கு அப்பால் உள்ள ஒத்திசைவு நீளம்ஃ முன்னோக்கி, ஆனால் பின்தங்கியவர்களுக்கு>> ஆகும். எனவே, தடிமனான கட்டமைப்புகள் முன்னும் பின்னும் தோன்றும்ஃ எஸ். எச். ஜி மாற்றம் முதல் தோராயத்தில் நேரியல் அல்லாத மாற்றிகளின் எண்ணிக்கையின் சதுரத்தைப் பொறுத்தது என்பதால், தடிமனான கட்டமைப்புகளால் வெளியேற்றப்பட்டால் சமிக்ஞை அதிகமாக இருக்கும், இதனால் முன்னோக்கி திசையில் சமிக்ஞை பின்னோக்கி இருப்பதை விட அதிகமாக இருக்கும். இருப்பினும், திசு உருவாக்கப்பட்ட ஒளியை சிதறடிக்க முடியும், மேலும் எஸ். எச். ஜியின் ஒரு பகுதியை முன்னோக்கி பின்னோக்கி திசையில் பிரதிபலிக்க முடியும். பின்னர், முன்னோக்கி-மேல்-பின் விகிதம் F/B ஐக் கணக்கிட முடியும், மேலும் இது உலகளாவிய அளவு மற்றும் SHG மாற்றிகளின் (பொதுவாக கொலாஜன் ஃபைப்ரில்கள்) ஏற்பாட்டின் அளவீடு ஆகும். சிதறலின் விமானத்திற்கு வெளியே உள்ள கோணம் அதிகமாக இருந்தால், அதன் எஃப்/பி விகிதம் அதிகமாக இருக்கும் என்பதையும் காட்டலாம் (அத்தியாயம் பார்க்கவும். 2. 14). துருவமுனைப்பு-தீர்க்கப்பட்ட எஸ். எச். ஜி துருவ அளவீட்டின் நன்மைகள் 2002 ஆம் ஆண்டில் ஸ்டோலர் மற்றும் பலர் எஸ். எச். ஜி உடன் இணைக்கப்பட்டன. துருவ அளவீடு மூலக்கூறு மட்டத்தில் நோக்குநிலை மற்றும் வரிசையை அளவிட முடியும், மேலும் எஸ். எச். ஜி உடன் இணைந்து கொலாஜன் போன்ற சில கட்டமைப்புகளுக்கான குறிப்பிட்ட தன்மையுடன் அவ்வாறு செய்ய முடியும்ஃ துருவமுனைப்பு-தீர்க்கப்பட்ட எஸ். எச். ஜி நுண்ணோக்கி (பி-எஸ். எச். ஜி) எனவே எஸ். எச். ஜி நுண்ணோக்கியின் விரிவாக்கமாகும். p-SHG மற்றொரு அனிசோட்ரோபி அளவுருவை பின்வருமாறு வரையறுக்கிறதுஃ இது, r ஐப் போலவே, படம்பிடிக்கப்படும் கட்டமைப்பின் முக்கிய நோக்குநிலை மற்றும் கோளாறின் அளவீடு. இது பெரும்பாலும் நீண்ட உருளை இழைகளில் (கொலாஜன் போன்றவை) நிகழ்த்தப்படுவதால், இந்த அனிசோட்ரோபி பெரும்பாலும் சமமாக இருக்கும், அங்கு நேரியல் அல்லாத எளிதில் பாதிக்கப்படக்கூடிய டென்சர் மற்றும் எக்ஸ் இழையின் திசை (அல்லது கட்டமைப்பின் முக்கிய திசை), ஒய் ஆர்த்தோகனல் எக்ஸ் மற்றும் இசட் கிளர்ச்சி ஒளியின் பரப்புதல். படத்தின் XY தளத்தில் உள்ள இழைகளின் நோக்குநிலை φ ஐ FFT பகுப்பாய்வு மூலம் p-SHG இலிருந்து பிரித்தெடுத்து ஒரு வரைபடத்தில் வைக்கலாம். ஃபைப்ரோஸிஸ் அளவீட்டு கொலாஜன் (குறிப்பிட்ட வழக்கு, ஆனால் எஸ். எச். ஜி நுண்ணோக்கியில் பரவலாக ஆய்வு செய்யப்படுகிறது), பல்வேறு வடிவங்களில் இருக்கலாம்ஃ 28 வெவ்வேறு வகைகள், அவற்றில் 5 ஃபைப்ரில்லர் ஆகும். ஒரு திசுவில் உள்ள ஃபைப்ரில்லர் கொலாஜனின் அளவை தீர்மானிப்பதும் அளவிடுவதும், அதன் பரிணாமம் மற்றும் பிற கொலாஜன் அல்லாத பொருட்களுடனான உறவைக் காண முடியும். அந்த நோக்கத்திற்காக, எஸ். எச். ஜி அலைநீளத்தில் இருக்கும் சிறிய அளவிலான எஞ்சிய ஃப்ளோரசன்ஸ் அல்லது சத்தத்தை அகற்ற ஒரு எஸ். எச். ஜி நுண்ணோக்கி படத்தை சரிசெய்ய வேண்டும். அதன் பிறகு, படத்திற்குள் உள்ள கொலாஜனை அளவிட ஒரு முகமூடியைப் பயன்படுத்தலாம். மற்ற அளவீட்டு நுட்பங்களில், இது மிகவும் சிக்கலானதாக இருந்தபோதிலும் மிக உயர்ந்த குறிப்பிட்ட தன்மை, இனப்பெருக்கம் மற்றும் பொருந்தக்கூடிய தன்மையைக் கொண்ட ஒன்றாக இருக்கலாம். மற்றவை பின்னோக்கி பரவும் செயல் ஆற்றல்கள் மின்னழுத்தக் குறைப்பு இல்லாமல் டென்ட்ரிடிக் முள்ளெலும்புகளை ஆக்கிரமிக்கிறது என்பதை நிரூபிக்கவும் இது பயன்படுத்தப்படுகிறது, இது நீண்ட கால ஆற்றலில் எதிர்கால பணிக்கு ஒரு நல்ல அடிப்படையை நிறுவுகிறது. இங்கு அதன் பயன்பாடு என்னவென்றால், நிலையான இரண்டு-ஃபோட்டான் நுண்ணோக்கியுடன் அடைய முடியாத துல்லியத்துடன் சிறிய டென்ட்ரிடிக் முள்ளெலும்புகளில் உள்ள மின்னழுத்தத்தை துல்லியமாக அளவிட இது ஒரு வழியை வழங்கியது. இதற்கிடையில், ஊடுருவல் ஆழ வரம்புகளை கடந்து, இமேஜிங்-வழிகாட்டப்பட்ட ஒளி இயக்கவியல் சிகிச்சையை செயல்படுத்துவதற்காக எஸ். எச். ஜி அருகிலுள்ள அகச்சிவப்பு ஒளியை புலப்படும் ஒளியாக திறம்பட மாற்ற முடியும். எஸ். எச். ஜி நுண்ணோக்கி மற்றும் அதன் விரிவாக்கங்களைப் படம்பிடிக்கக்கூடிய பொருட்கள் பல்வேறு திசுக்களைப் படிக்கப் பயன்படுத்தப்படலாம்ஃ சில எடுத்துக்காட்டு படங்கள் கீழே உள்ள படத்தில் தெரிவிக்கப்பட்டுள்ளனஃ செல்களுக்கு வெளியே உள்ள மேட்ரிக்ஸுக்குள் உள்ள கொலாஜன் முக்கிய பயன்பாடாக உள்ளது. இது தசைநாண், தோல், எலும்பு, கார்னியா, பெருமுனை, ஃபாசியா, குருத்தெலும்பு, மாதவிடாய், முதுகெலும்புக்கிடையேயான வட்டுகள் ஆகியவற்றில் காணப்படுகிறது. மயோசின் எலும்பு தசை அல்லது இதய தசையிலும் படம்பிடிக்கப்படலாம். டி. எச். ஜி நுண்ணோக்கியுடன் இணைத்தல் மூன்றாம்-ஹார்மோனிக் தலைமுறை (டி. எச். ஜி) நுண்ணோக்கி எஸ். எச். ஜி நுண்ணோக்கிக்கு நிரப்பு, ஏனெனில் இது குறுக்கு இடைமுகங்களுக்கு உணர்திறன் கொண்டது, மேலும் 3 வது வரிசை நேரியல் அல்லாத எளிதில் பாதிக்கப்படக்கூடிய பயன்பாடுகளுக்கு புற்றுநோய் முன்னேற்றம், கட்டி தன்மை மேமோகிராஃபிக் அடர்த்தி கொலாஜன் அடர்த்தியுடன் தொடர்புடையது, இதனால் எஸ். எச். ஜி மார்பக புற்றுநோயை அடையாளம் காண பயன்படுத்தப்படலாம். எஸ். எச். ஜி பொதுவாக கோஹெரென்ட் ஆன்டி-ஸ்டோக்ஸ் ராமன் சிதறல் அல்லது டூ-ஃபோட்டான் கிளர்ச்சி நுண்ணோக்கி போன்ற பிற நேரியல் அல்லாத நுட்பங்களுடன் இணைக்கப்பட்டுள்ளது, இது மல்டிஃபோட்டான் நுண்ணோக்கி (அல்லது டோமோகிராஃபி) எனப்படும் வழக்கத்தின் ஒரு பகுதியாக, இது புற்றுநோயாக இருக்கலாம். மார்பக புற்றுநோய் முன்னோக்கி மற்றும் பின்தங்கிய எஸ். எச். ஜி படங்களின் ஒப்பீடு கொலாஜனின் நுண் அமைப்பு பற்றிய நுண்ணறிவை வழங்குகிறது, இது ஒரு கட்டியின் தரம் மற்றும் கட்டத்துடன் தொடர்புடையது மற்றும் மார்பகத்தில் அதன் முன்னேற்றம். எஸ்எச்ஜி மற்றும் 2பிஇஎஃப் ஆகியவற்றின் ஒப்பீடு கட்டிகளில் கொலாஜன் நோக்குநிலையின் மாற்றத்தையும் காட்டலாம். எஸ். எச். ஜி நுண்ணோக்கி மார்பக புற்றுநோய் ஆராய்ச்சிக்கு நிறைய பங்களித்திருந்தாலும், இது மருத்துவமனைகளில் நம்பகமான நுட்பமாகவோ அல்லது பொதுவாக இந்த நோய்க்குறியீட்டைக் கண்டறியவோ இன்னும் நிறுவப்படவில்லை. கருப்பை புற்றுநோய் ஆரோக்கியமான கருப்பைகள் எஸ். எச். ஜியில் ஒரு சீரான எபிடெலியல் அடுக்கு மற்றும் அவற்றின் ஸ்ட்ரோமாவில் நன்கு ஒழுங்கமைக்கப்பட்ட கொலாஜன் ஆகியவற்றைக் கொண்டுள்ளன, அதேசமயம் அசாதாரணமானவை பெரிய செல்கள் மற்றும் மாற்றப்பட்ட கொலாஜன் கட்டமைப்பைக் கொண்ட எபிடெலியத்தைக் காட்டுகின்றன. ஆர் விகிதம் சாதாரண திசுக்களை விட புற்றுநோய்க்கு ஃபைப்ரில்களின் சீரமைப்பு சற்று அதிகமாக உள்ளது என்பதைக் காட்டவும் பயன்படுத்தப்படுகிறது. தோல் புற்றுநோய் எஸ். எச். ஜி, மீண்டும், 2 பி. இ. எஃப் உடன் இணைக்கப்பட்டு விகிதத்தைக் கணக்கிட பயன்படுத்தப்படுகிறதுஃ இங்கு எஸ். எச். ஜி (ரெஸ்ப்). tpef) என்பது SHG (ரெஸ்ப்) இல் உள்ள வரம்புக்குட்பட்ட பிக்சல்களின் எண்ணிக்கை ஆகும். 2PEF) படம், ஒரு உயர் MFSI அதாவது ஒரு தூய SHG படம் (ஃப்ளோரசன்ஸ் இல்லாமல்). மிக உயர்ந்த எம். எஃப். எஸ். ஐ புற்றுநோய் திசுக்களில் காணப்படுகிறது, இது சாதாரண திசுக்களிலிருந்து வேறுபடுவதற்கு ஒரு மாறுபட்ட முறையை வழங்குகிறது. கட்டிகளில் பின்தங்கிய டி. எச். ஜி அதிகமாக உள்ளது என்பதைக் காட்ட எஸ். எச். ஜி மூன்றாம் ஹார்மோனிக் தலைமுறையுடன் (டி. எச். ஜி) இணைக்கப்பட்டது. கணைய புற்றுநோயில் கொலாஜன் அல்ட்ரா உள்கட்டமைப்பில் ஏற்படும் மாற்றங்களை மல்டிஃபோட்டான் ஃப்ளோரசன்ஸ் மற்றும் துருவமுனைப்பு-தீர்க்கப்பட்ட ஷிம் மூலம் ஆராய முடியும். நுரையீரல், பெருங்குடல், உணவுக்குழாய் ஸ்ட்ரோமா மற்றும் கர்ப்பப்பை வாய் புற்றுநோய்கள் பற்றிய ஆய்வுக்காக பிற புற்றுநோய்கள் எஸ். எச். ஜி நுண்ணோக்கி தெரிவிக்கப்பட்டது. நோயியல் கண்டறிதல் அமைப்பில் ஏற்படும் மாற்றங்கள் அல்லது கொலாஜன் ஃபைப்ரில்களின் துருவமுனைப்பு ஆகியவை நோயியல் அறிகுறிகளாக இருக்கலாம். குறிப்பாக, கொலாஜன் இழைகளின் அனிசோட்ரோபிக் சீரமைப்பு தோலில் உள்ள நோயியல் வடுக்களிலிருந்து ஆரோக்கியமான சருமத்தின் பாகுபாட்டை அனுமதித்தது. மேலும், எலும்புப்புரை போன்ற குருத்தெலும்பு நோய்களில் உள்ள நோய்களை துருவமுனைப்பு-தீர்க்கப்பட்ட எஸ். எச். ஜி நுண்ணோக்கி மூலம் ஆராய முடியும். ஷிம் பின்னர் ஃபைப்ரோ-கார்டிலேஜ் (மாதவிடாய்) வரை நீட்டிக்கப்பட்டது. திசு பொறியியல் ஒரு குறிப்பிட்ட திசுவின் கட்டமைப்பை ஒரு நேரத்தில் ஒரு பொருள் மற்றும் நுண்ணோக்கியைப் பயன்படுத்தி பல்வேறு அளவுகளில் (மேக்ரோ முதல் மைக்ரோ வரை) வெளிப்படுத்த முடியும். உதாரணமாக, கொலாஜன் (வகை I) குறிப்பாக செல்களின் எக்ஸ்ட்ரா செல்லுலார் மேட்ரிக்ஸிலிருந்து (ஈ. சி. எம்) படம்பிடிக்கப்படுகிறது, அல்லது அது திசுக்களில் ஒரு சாரக்கட்டு அல்லது இணைப்புப் பொருளாக செயல்படும்போது. எஸ். எச். ஜி பட்டில் உள்ள ஃபைப்ரோயின், தசைகளில் உள்ள மயோசின் மற்றும் உயிர்ச்சேர்க்கை செய்யப்பட்ட செல்லுலோஸ் ஆகியவற்றையும் வெளிப்படுத்துகிறது. இந்த இமேஜிங் திறன் அனைத்தும் திசுவின் குறிப்பிட்ட புள்ளிகளை குறிவைப்பதன் மூலம் செயற்கை திசுக்களை வடிவமைக்கப் பயன்படுத்தப்படலாம்ஃ எஸ். எச். ஜி உண்மையில் சில நோக்குநிலைகளையும், பொருள் அளவு மற்றும் ஏற்பாட்டையும் அளவிட முடியும். மேலும், மாதிரி ஒப்பீட்டளவில் மெல்லியதாக இருக்கும்போது, எஸ். எச். ஜி மற்ற மல்டிஃபோட்டான் நுட்பங்களுடன் இணைந்து பொறிக்கப்பட்ட திசுக்களின் வளர்ச்சியைக் கண்காணிக்க உதவும். நிச்சயமாக, அவை இறுதியாக புனையப்பட்ட திசுக்களின் தரக் கட்டுப்பாட்டாகப் பயன்படுத்தப்படலாம். கண்ணின் மேற்பரப்பில் உள்ள கண் கார்னியாவின் அமைப்பு, போதுமான அடர்த்தியான கொலாஜனின் சுய-அமைப்பு பண்புகள் காரணமாக, கொலாஜனின் ஒட்டு பலகை போன்ற கட்டமைப்பால் ஆனது என்று கருதப்படுகிறது. ஆயினும்கூட, லேமெல்லாவில் உள்ள கொலாஜன் நோக்குநிலை இந்த திசுவில் இன்னும் விவாதத்தில் உள்ளது. கொலாஜனின் உருவவியல் மாற்றங்களை வெளிப்படுத்த கெராடோகோனஸ் கார்னியாவை எஸ். எச். ஜி மூலம் படம்பிடிக்கலாம். மூன்றாம்-ஹார்மோனிக் தலைமுறை (டி. எச். ஜி) நுண்ணோக்கி மேலும் கார்னியாவைப் படம்பிடிக்கப் பயன்படுத்தப்படுகிறது, இது இந்த திசுவில் உள்ள டி. எச். ஜி மற்றும் எஸ். எச். ஜி அதிகபட்சம் பெரும்பாலும் வெவ்வேறு இடங்களில் இருப்பதால் எஸ். எச். ஜி சமிக்ஞைக்கு நிரப்பு ஆகும். இரண்டாம்-ஹார்மோனிக் தலைமுறை நேரியல் அல்லாத ஒளியியல் இரண்டு-ஃபோட்டான் கிளர்ச்சி நுண்ணோக்கி ஆதாரங்கள் குறிப்புகள் நுண்ணோக்கி செல் இமேஜிங் ஆய்வக உபகரணங்கள் ஒளியியல் நுண்ணோக்கி