Structured Illumination Light Sheet Microscopy
ಸ್ಟ್ರಕ್ಚರ್ಡ್ ಇಲ್ಯೂಮಿನೇಷನ್ ಲೈಟ್ ಶೀಟ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ (ಎಸ್. ಐ-ಎಲ್. ಎಸ್. ಎಂ) ಎಂಬುದು ಎಲ್ಲಾ ಮೂರು ಆಯಾಮಗಳಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚಿನ ತಾತ್ಕಾಲಿಕ ಮತ್ತು ಪ್ರಾದೇಶಿಕ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ನೊಂದಿಗೆ ವಾಲ್ಯೂಮೆಟ್ರಿಕ್ ಇಮೇಜಿಂಗ್ ಅನ್ನು ಸಾಧಿಸಲು ಬಳಸುವ ಆಪ್ಟಿಕಲ್ ಇಮೇಜಿಂಗ್ ತಂತ್ರವಾಗಿದೆ. ಇದು ತುಲನಾತ್ಮಕವಾಗಿ ದಪ್ಪ ಮಾದರಿಗಳಾದ್ಯಂತ ಪ್ರಾದೇಶಿಕ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಅನ್ನು ನಿರ್ವಹಿಸುವ ಬೆಳಕಿನ ಹಾಳೆಯ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕದ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವನ್ನು ರಚನಾತ್ಮಕ ಬೆಳಕಿನ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕದ ಹೆಚ್ಚಿನ ಅಕ್ಷೀಯ ಮತ್ತು ಪ್ರಾದೇಶಿಕ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳೊಂದಿಗೆ ಸಂಯೋಜಿಸುತ್ತದೆ. ಎಸ್ಐ-ಎಲ್ಎಸ್ಎಂ ನೂರಾರು ಮೈಕ್ರೋಮೀಟರ್ ದಪ್ಪದ ಜೈವಿಕ ಮಾದರಿಗಳಲ್ಲಿ 100 ಎನ್ಎಂಗಿಂತ ಕಡಿಮೆ ಪಾರ್ಶ್ವದ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಅನ್ನು ಸಾಧಿಸಬಹುದು. ಎಸ್. ಐ.-ಎಲ್. ಎಸ್. ಎಂ. ಅನ್ನು ಹೆಚ್ಚಾಗಿ ಜೀವಕೋಶ ಸಂಸ್ಕೃತಿಗಳಂತಹ ಜೀವಂತ ಜೈವಿಕ ಮಾದರಿಗಳ ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಚಿತ್ರಣಕ್ಕಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಇದು ರೇಖಾಂಶದ ಅಧ್ಯಯನಗಳಿಗೆ ವಿಶೇಷವಾಗಿ ಉಪಯುಕ್ತವಾಗಿದೆ, ಅಲ್ಲಿ ಮಾದರಿಯನ್ನು ಹಾನಿಗೊಳಗಾಗದಂತೆ ಹೆಚ್ಚಿನ ಪ್ರಮಾಣದ ಚಿತ್ರಣವನ್ನು ದೀರ್ಘಕಾಲದವರೆಗೆ ನಿರ್ವಹಿಸಬೇಕು. 3ಡಿ ಮಾದರಿಗಳ ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಚಿತ್ರಣಕ್ಕೆ ಹೆಚ್ಚು ಬಳಸಲಾಗುವ ಎರಡು ವಿಧಾನಗಳು-ಕಾನ್ಫೋಕಲ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ ಮತ್ತು ವೈಡ್ಫೀಲ್ಡ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ-ಇವೆರಡೂ ಈ ರೀತಿಯ ಅನ್ವಯಕ್ಕೆ ಗಮನಾರ್ಹ ನ್ಯೂನತೆಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿವೆ. ವೈಡ್ಫೀಲ್ಡ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿಯಲ್ಲಿ, ಆಸಕ್ತಿಯ ಸಮತಲದಿಂದ ಇನ್-ಫೋಕಸ್ ಬೆಳಕು ಮತ್ತು ಉಳಿದ ಮಾದರಿಗಳಿಂದ ಔಟ್-ಆಫ್-ಫೋಕಸ್ ಬೆಳಕು ಎರಡನ್ನೂ ಒಟ್ಟಿಗೆ ಪಡೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ, ಇದು "ಕಾಣೆಯಾದ ಕೋನ್ ಸಮಸ್ಯೆಯನ್ನು" ಸೃಷ್ಟಿಸುತ್ತದೆ, ಇದು ಹೆಚ್ಚಿನ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಚಿತ್ರಣವನ್ನು ಕಷ್ಟಕರವಾಗಿಸುತ್ತದೆ. ಕಾನ್ಫೋಕಲ್ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕವು ಕೇಂದ್ರೀಕರಿಸದ ಬೆಳಕನ್ನು ತಡೆಯಲು ಪಿನ್ ಹೋಲ್ ಅನ್ನು ಬಳಸುವ ಮೂಲಕ ಈ ಸಮಸ್ಯೆಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಾಗಿ ಪರಿಹರಿಸುತ್ತದೆಯಾದರೂ, ಈ ತಂತ್ರವು ಅನಿವಾರ್ಯವಾಗಿ ಉಪಯುಕ್ತ ಸಂಕೇತವನ್ನು ನಿರ್ಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ, ಇದು ಸಂಕೇತವು ಈಗಾಗಲೇ ತುಂಬಾ ದುರ್ಬಲವಾಗಿದ್ದಾಗ ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಚಿತ್ರಣದಲ್ಲಿ ವಿಶೇಷವಾಗಿ ಹಾನಿಕಾರಕವಾಗಿದೆ. ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, ವೈಡ್ಫೀಲ್ಡ್ ಮತ್ತು ಕಾನ್ಫೋಕಲ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ ಎರಡೂ ಚಿತ್ರಣದ ಉದ್ದಕ್ಕೂ ಮಾದರಿಯ ಸಂಪೂರ್ಣತೆಯನ್ನು ಬೆಳಗಿಸುತ್ತವೆ, ಇದು ಕೆಲವು ಮಾದರಿಗಳಲ್ಲಿ ಫೋಟೊಬ್ಲೆಚಿಂಗ್ ಮತ್ತು ಫೋಟೊಟಾಕ್ಸಿಸಿಟಿಯ ಸಮಸ್ಯೆಗಳಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ. ಲೈಟ್-ಫೀಲ್ಡ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ ಮಾತ್ರ ಈ ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಮಸ್ಯೆಗಳನ್ನು ಪರಿಹರಿಸಬಹುದಾದರೂ, ಅದರ ಸಾಧಿಸಿದ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಇನ್ನೂ ಮೂಲಭೂತವಾಗಿ ಬೆಳಕಿನ ವಿವರ್ತನೆಯಿಂದ ಸೀಮಿತವಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಇದು ಸೂಪರ್-ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಅನ್ನು ಸಾಧಿಸಲು ಸಾಧ್ಯವಾಗುವುದಿಲ್ಲ. ಚಿತ್ರಿಸಲಾಗುತ್ತಿರುವ ಪರಿಮಾಣದ ಒಂದೇ ಸಮತಲವನ್ನು ಬೆಳಗಿಸಲು ಏಕರೂಪದ ಬೆಳಕಿನ ಹಾಳೆಯ ಬದಲು ಮಾದರಿಯನ್ನು ಬಳಸುವ ಮೂಲಕ ಎಸ್. ಐ-ಎಲ್. ಎಸ್. ಎಂ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸುತ್ತದೆ. ಈ ರೀತಿಯಲ್ಲಿ, ಇದು ಸಂರಚಿತ ಬೆಳಕಿನ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕದ ಹೆಚ್ಚಿನ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಅನ್ನು ಸಾಧಿಸುವಾಗ ಬೆಳಕಿನ-ಹಾಳೆಯ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕದ ಅನೇಕ ಪ್ರಯೋಜನಗಳನ್ನು ನಿರ್ವಹಿಸುತ್ತದೆ. ಹಿನ್ನೆಲೆ ಮತ್ತು ಸಿದ್ಧಾಂತ ಎಸ್. ಐ.-ಎಲ್. ಎಸ್. ಎಂ. ಹಿಂದಿನ ಸಿದ್ಧಾಂತವನ್ನು ರಚನಾತ್ಮಕ ಬೆಳಕು ಮತ್ತು ಬೆಳಕಿನ ಹಾಳೆಯ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕದ ಪ್ರತ್ಯೇಕ ಬೆಳವಣಿಗೆಯನ್ನು ಪರಿಗಣಿಸುವ ಮೂಲಕ ಉತ್ತಮವಾಗಿ ಅರ್ಥೈಸಿಕೊಳ್ಳಲಾಗುತ್ತದೆ. ಸ್ಟ್ರಕ್ಚರ್ಡ್ ಇಲ್ಯೂಮಿನೇಷನ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ ಸ್ಟ್ರಕ್ಚರ್ಡ್ ಇಲ್ಯೂಮಿನೇಷನ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ (SIM) ಎಂಬುದು ಸೂಪರ್-ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿಯ ಒಂದು ವಿಧಾನವಾಗಿದ್ದು, ಇದನ್ನು ಒಂದೇ ಮಾದರಿಯ ಅನೇಕ ಚಿತ್ರಗಳನ್ನು ವಿವಿಧ ಮಾದರಿಗಳ ಬೆಳಕಿನಲ್ಲಿ ಪಡೆಯುವ ಮೂಲಕ ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ನಂತರ ಈ ಚಿತ್ರಗಳನ್ನು ಗಣನೆಯಿಂದ ಸಂಯೋಜಿಸಿ ವಿವರ್ತನೆಯ ಸೀಮಿತ ಪಾರ್ಶ್ವ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ಗಿಂತ 2x ಸುಧಾರಣೆಯೊಂದಿಗೆ ಒಂದೇ ಪುನರ್ನಿರ್ಮಾಣವನ್ನು ಸಾಧಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಈ ಸಿದ್ಧಾಂತವನ್ನು ಮೊದಲ ಬಾರಿಗೆ 1995 ರಲ್ಲಿ ಜಾನ್ ಎಮ್. ಗುಯೆರಾ ಅವರು ಮಂಡಿಸಿದರು ಮತ್ತು ಜಾರಿಗೆ ತಂದರು, ಇದರಲ್ಲಿ 50 ಎನ್ಎಂ ರೇಖೆಗಳು ಮತ್ತು ಸ್ಥಳಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಸಿಲಿಕಾನ್ ಗ್ರೇಟಿಂಗ್ ಅನ್ನು 650 ಎನ್ಎಂ ತರಂಗಾಂತರದ (ಗಾಳಿಯಲ್ಲಿ) ಪ್ರಕಾಶದೊಂದಿಗೆ ಪರಿಹರಿಸಲಾಯಿತು. "ಸ್ಟ್ರಕ್ಚರ್ಡ್ ಇಲ್ಯೂಮಿನೇಷನ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ" ಎಂಬ ಹೆಸರನ್ನು 2000ರಲ್ಲಿ ಎಂ. ಜಿ. ಎಲ್. ಅವರು ಸೃಷ್ಟಿಸಿದರು. ಗುಸ್ಟಾಫ್ಸನ್. ಸಿಮ್ "ಮೋಯಿರ್ ಎಫೆಕ್ಟ್" ನ ಲಾಭವನ್ನು ಪಡೆಯುತ್ತದೆ, ಇದು ಎರಡು ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಗುಣಾಕಾರವಾಗಿ ಮೇಲ್ವಿಚಾರಣೆ ಮಾಡಿದಾಗ ಸಂಭವಿಸುತ್ತದೆ. ಸೂಪರ್ಇಂಪೊಸಿಷನ್ "ಮೋಯಿರ್ ಫ್ರಿಂಜಸ್" ಕಾಣಿಸಿಕೊಳ್ಳಲು ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ, ಇದು ಎರಡೂ ಮೂಲ ಮಾದರಿಗಳಿಗಿಂತ ಕೋರ್ಸ್ ಆಗಿರುತ್ತದೆ ಆದರೆ ಇನ್ನೂ ಹೆಚ್ಚಿನ ಆವರ್ತನ ಮಾದರಿಗಳ ಬಗ್ಗೆ ಮಾಹಿತಿಯನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತದೆ, ಅದು ಇಲ್ಲದಿದ್ದರೆ ಗೋಚರಿಸುವುದಿಲ್ಲ. ಸಿಮ್ ಹಿಂದಿನ ಸಿದ್ಧಾಂತವನ್ನು ಫೋರಿಯರ್ ಅಥವಾ ಫ್ರೀಕ್ವೆನ್ಸಿ ಡೊಮೇನ್ನಲ್ಲಿ ಉತ್ತಮವಾಗಿ ಅರ್ಥೈಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ, ಚಿತ್ರಣ ವ್ಯವಸ್ಥೆಗಳು ವಿವರ್ತನೆಯ ಮಿತಿಗಿಂತ ಕೆಳಗಿರುವ ಆವರ್ತನಗಳನ್ನು ಮಾತ್ರ ಪರಿಹರಿಸಬಲ್ಲವು. ಹೀಗಾಗಿ, ಫೋರಿಯರ್ ಡೊಮೇನ್ನಲ್ಲಿ, ಚಿತ್ರಿಸಿದ ಮಾದರಿಯ ಎಲ್ಲಾ ದಾಖಲಿತ ಆವರ್ತನಗಳು ಸ್ಥಿರ ತ್ರಿಜ್ಯದ ವೃತ್ತದೊಳಗೆ ವಾಸಿಸುತ್ತವೆ. ಈ ಮಿತಿಯನ್ನು ಮೀರಿದ ಯಾವುದೇ ಆವರ್ತನಗಳನ್ನು ಪರಿಹರಿಸಲಾಗುವುದಿಲ್ಲ. ಆದಾಗ್ಯೂ, ಮಾದರಿಯ ಬೆಳಕಿನೊಂದಿಗೆ ಮಾದರಿಯನ್ನು ಚಿತ್ರಿಸುವ ಮೂಲಕ ಆವರ್ತನ ವರ್ಣಪಟಲವನ್ನು ಬದಲಾಯಿಸಬಹುದು. ಹೆಚ್ಚಾಗಿ, ಮಾದರಿಯು 1ಡಿ ಸೈನುಸಾಯ್ಡಲ್ ಗ್ರೇಡಿಯಂಟ್ ಆಗಿದೆ, ಉದಾಹರಣೆಗೆ ಮೇಲಿನ ಚಿತ್ರದಲ್ಲಿ ಮೊಯಿರೇ ಅಂಚುಗಳನ್ನು ರಚಿಸಲು ಬಳಸುವ ಮಾದರಿ. ಸೈನುಸಾಯ್ಡ್ನ ಫೋರಿಯರ್ ರೂಪಾಂತರವು ಸ್ಥಳಾಂತರಗೊಂಡ ಡೆಲ್ಟಾ ಕಾರ್ಯವಾಗಿರುವುದರಿಂದ, ಈ ಮಾದರಿಯ ರೂಪಾಂತರವು ಮೂರು ಡೆಲ್ಟಾ ಕಾರ್ಯಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುತ್ತದೆಃ ಒಂದು ಶೂನ್ಯ ಆವರ್ತನದಲ್ಲಿ ಮತ್ತು ಎರಡು ಸೈನುಸಾಯ್ಡ್ನ ಧನಾತ್ಮಕ ಮತ್ತು ಋಣಾತ್ಮಕ ಆವರ್ತನ ಘಟಕಗಳಿಗೆ ಅನುಗುಣವಾಗಿರುತ್ತವೆ (ಕೆಳಗಿನ ಚಿತ್ರವನ್ನು ನೋಡಿ). ಈ ಮಾದರಿಯನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಗುರಿಯನ್ನು ಬೆಳಗಿಸಿದಾಗ, ಗುರಿ ಮತ್ತು ಬೆಳಕಿನ ಮಾದರಿಯನ್ನು ಗುಣಾಕಾರವಾಗಿ ಅತಿಯಾಗಿ ವಿಧಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಅಂದರೆ ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ ಬರುವ ಚಿತ್ರದ ಫೋರಿಯರ್ ರೂಪಾಂತರವು ಗುರಿಯ ವೈಯಕ್ತಿಕ ರೂಪಾಂತರಗಳು ಮತ್ತು ಬೆಳಕಿನ ಮಾದರಿಯ ಕನ್ವಲ್ಯೂಷನ್ ಆಗಿದೆ. ಯಾವುದೇ ಕಾರ್ಯವನ್ನು ಡೆಲ್ಟಾ ಕಾರ್ಯದೊಂದಿಗೆ ಸಂಯೋಜಿಸುವುದು ಮೂಲ ಕಾರ್ಯದ ಕೇಂದ್ರವನ್ನು ಡೆಲ್ಟಾ ಕಾರ್ಯದ ಸ್ಥಳಕ್ಕೆ ಬದಲಾಯಿಸುವ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತದೆ. ಹೀಗಾಗಿ, ಈ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಯಲ್ಲಿ, ಗುರಿಯ ಆವರ್ತನ ವರ್ಣಪಟಲವನ್ನು ಬದಲಾಯಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಈ ಹಿಂದೆ ಪರಿಹರಿಸಲು ತುಂಬಾ ಹೆಚ್ಚಾಗಿದ್ದ ಆವರ್ತನಗಳು ಈಗ ಪರಿಹರಿಸಬಹುದಾದ ಆವರ್ತನಗಳ ವೃತ್ತದೊಳಗೆ ಇರುತ್ತವೆ. ಇದರ ಫಲಿತಾಂಶವೇನೆಂದರೆ, SIMನೊಂದಿಗೆ ಒಂದೇ ಚಿತ್ರವನ್ನು ಪಡೆದುಕೊಳ್ಳಲು, ಫೋರಿಯರ್ ಡೊಮೇನ್ನ ಮೂರು ಪ್ರತ್ಯೇಕ ಪ್ರದೇಶಗಳಿಂದ ಆವರ್ತನ ಘಟಕಗಳನ್ನು (ಕೇಂದ್ರ ಮತ್ತು ಧನಾತ್ಮಕ ಮತ್ತು ಋಣಾತ್ಮಕ ಬದಲಾವಣೆಗಳಿಗೆ ಅನುಗುಣವಾದ) ಒಟ್ಟಾಗಿ ಸೆರೆಹಿಡಿಯಲಾಗುತ್ತದೆ. ಅಂತಿಮವಾಗಿ, ಪ್ರಾದೇಶಿಕ ಡೊಮೇನ್ನಲ್ಲಿನ ತಿರುಗುವಿಕೆಯು ಫೋರಿಯರ್ ಡೊಮೇನ್ನಲ್ಲಿ ಅದೇ ತಿರುಗುವಿಕೆಗೆ ಕಾರಣವಾಗುವುದರಿಂದ, ಬೆಳಕಿನ ಮಾದರಿಯನ್ನು ತಿರುಗಿಸುವ ಮೂಲಕ ಪೂರ್ಣ 360° ಗಿಂತ ಹೆಚ್ಚಿನ ಆವರ್ತನಗಳನ್ನು ಸೆರೆಹಿಡಿಯಬಹುದು. ಬಿ) ಕೆಳಗಿನ ಚಿತ್ರವು 4 ಪ್ರತ್ಯೇಕ ಚಿತ್ರಗಳನ್ನು ಪಡೆಯುವ ಮೂಲಕ ಮತ್ತು ಪ್ರತಿ ಸ್ವಾಧೀನದ ನಡುವೆ 45° ಬೆಳಕಿನ ಮಾದರಿಯನ್ನು ತಿರುಗಿಸುವ ಮೂಲಕ ಯಾವ ಆವರ್ತನ ಘಟಕಗಳನ್ನು ಸೆರೆಹಿಡಿಯಲಾಗುತ್ತದೆ ಎಂಬುದನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ. ಎಲ್ಲಾ ಚಿತ್ರಗಳನ್ನು ಸೆರೆಹಿಡಿದ ನಂತರ, ಒಂದೇ ಅಂತಿಮ ಚಿತ್ರವನ್ನು ಗಣನೆಗೆ ಪುನರ್ನಿರ್ಮಿಸಬಹುದು. ಈ ತಂತ್ರವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು, ವಿವರ್ತನೆಯ ಮಿತಿಯನ್ನು ಮೀರಿ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಅನ್ನು 2x ವರೆಗೆ ಸುಧಾರಿಸಬಹುದು. ಬೆಳಕಿನ ಮಾದರಿಯು ಇನ್ನೂ ವಿವರ್ತನೆಯನ್ನು ಸೀಮಿತಗೊಳಿಸಿರುವುದರಿಂದ ಈ 2x ಮಿತಿಯನ್ನು ವಿಧಿಸಲಾಗಿದೆ. 2ಡಿ ಸಿಮ್ ಹಿಂದಿನ ಪರಿಕಲ್ಪನೆಗಳನ್ನು 3ಡಿ ವಾಲ್ಯೂಮೆಟ್ರಿಕ್ ಇಮೇಜಿಂಗ್ಗೆ ವಿಸ್ತರಿಸಬಹುದು. ಪ್ರಚೋದನೆಯ ಬೆಳಕಿನ ಮೂರು ಪರಸ್ಪರ ಸುಸಂಬದ್ಧ ಕಿರಣಗಳನ್ನು ಬಳಸುವ ಮೂಲಕ, ಚಿತ್ರಿಸಿದ ಮಾದರಿಯಲ್ಲಿ ಅನೇಕ ಆವರ್ತನ ಘಟಕಗಳೊಂದಿಗೆ ಹಸ್ತಕ್ಷೇಪದ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ರಚಿಸಬಹುದು. ಇದು ಅಂತಿಮವಾಗಿ ಎಲ್ಲಾ ಮೂರು ಅಕ್ಷಗಳ ಉದ್ದಕ್ಕೂ 2x ಸುಧಾರಿತ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ನೊಂದಿಗೆ 3D ಪುನರ್ನಿರ್ಮಾಣಗಳನ್ನು ಮಾಡಲು ಸಾಧ್ಯವಾಗಿಸುತ್ತದೆ. ಆದಾಗ್ಯೂ, ಜೈವಿಕ ಅಂಗಾಂಶಗಳ ಬಲವಾದ ಚದುರುವಿಕೆಯ ಗುಣಾಂಕದಿಂದಾಗಿ, ಈ ಸೈದ್ಧಾಂತಿಕ ನಿರ್ಣಯವನ್ನು ಸುಮಾರು 10 ಯು. ಎಂ. ಗಿಂತ ತೆಳುವಾದ ಮಾದರಿಗಳಲ್ಲಿ ಮಾತ್ರ ಸಾಧಿಸಬಹುದು. ಅದಕ್ಕೂ ಮೀರಿ, ಚದುರುವಿಕೆಯು ಹೆಚ್ಚಿನ ಹಿನ್ನೆಲೆ ಸಂಕೇತಕ್ಕೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ, ಇದು ನಿಖರವಾದ ಪುನರ್ನಿರ್ಮಾಣವನ್ನು ಅಸಾಧ್ಯವಾಗಿಸುತ್ತದೆ. ಲೈಟ್ ಶೀಟ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ (ಎಲ್ಎಸ್ಎಂ) ಅನ್ನು ಭೌತಿಕ ವಿಭಾಗ ಅಥವಾ ತೆರವುಗೊಳಿಸುವ ಅಗತ್ಯವಿಲ್ಲದೇ ದಪ್ಪ ಜೈವಿಕ ಮಾದರಿಗಳ ಸೂಕ್ಷ್ಮ ಆಪ್ಟಿಕಲ್ ವಿಭಾಗವನ್ನು ಅನುಮತಿಸಲು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಲಾಗಿದೆ, ಇದು ಸಮಯ ತೆಗೆದುಕೊಳ್ಳುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಇನ್-ವಿವೋ ಇಮೇಜಿಂಗ್ಗೆ ಹಾನಿಕಾರಕವಾಗಿದೆ. ಹೆಚ್ಚಿನ ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಚಿತ್ರಣ ತಂತ್ರಗಳು ಜೋಡಿಸಲಾದ ಬೆಳಕು ಮತ್ತು ಪತ್ತೆ ಅಕ್ಷಗಳನ್ನು ಬಳಸುತ್ತವೆಯಾದರೂ, ಎಲ್ಎಸ್ಎಂ ಆರ್ಥೋಗೋನಲ್ ಅಕ್ಷಗಳನ್ನು ಬಳಸುತ್ತದೆ. ಮಾದರಿಯನ್ನು ಬದಿಯಿಂದ ಬೆಳಗಿಸಲು ಕೇಂದ್ರೀಕೃತ ಬೆಳಕಿನ ಹಾಳೆಯನ್ನು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಆದರೆ ಮೇಲಿನಿಂದ ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಸಂಕೇತವನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲಾಗುತ್ತದೆ. ಇವೆರಡೂ ವೈಡ್ಫೀಲ್ಡ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿಯ "ಕೋನ್ ಸಮಸ್ಯೆ" ಯನ್ನು ಸಕ್ರಿಯವಾಗಿ ಚಿತ್ರಿಸದ ವಿಮಾನಗಳಿಂದ ಕೇಂದ್ರೀಕರಿಸದ ಕೊಡುಗೆಗಳನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕುವ ಮೂಲಕ ನಿವಾರಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಚಿತ್ರಣದ ಉದ್ದಕ್ಕೂ ಸಂಪೂರ್ಣ ಮಾದರಿಯು ಪ್ರಕಾಶಿಸುವುದಿಲ್ಲವಾದ್ದರಿಂದ ಫೋಟೋಬ್ಲೀಚಿಂಗ್ನ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ. ಇದಲ್ಲದೆ, ಮಾದರಿಯನ್ನು ಬದಿಯಿಂದ ಬೆಳಗಿಸಲಾಗಿರುವುದರಿಂದ, ಬೆಳಕಿನ ಬೆಳಕಿನ ಕೇಂದ್ರವು ಆಳ-ಅವಲಂಬಿತವಾಗಿಲ್ಲ, ಇದು ಜೈವಿಕ ಮಾದರಿಗಳ ಗಾತ್ರದ ಚಿತ್ರಣವನ್ನು ಹೆಚ್ಚು ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯವಾಗಿಸುತ್ತದೆ. ಎಲ್ಎಸ್ಎಂನಲ್ಲಿ ಚಾಲ್ತಿಯಲ್ಲಿರುವ ಒಂದು ಪ್ರಮುಖ ಸವಾಲೆಂದರೆ ಬೆಳಕಿನ ಹಾಳೆಯನ್ನು ರೂಪಿಸುವುದು. ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ, ಆಪ್ಟಿಕಲ್ ಅಕ್ಷದಲ್ಲಿ ಬೆಳಕಿನ ಹಾಳೆಯ ದಪ್ಪ (ಇದು ಹೆಚ್ಚಾಗಿ ಅಕ್ಷೀಯ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಅನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸುತ್ತದೆ) ಮತ್ತು ಬೆಳಕಿನ ಹಾಳೆಯು ಸಾಕಷ್ಟು ದಪ್ಪವನ್ನು ನಿರ್ವಹಿಸುವ ಕ್ಷೇತ್ರ-ವೀಕ್ಷಣೆಯ ನಡುವೆ ವಿನಿಮಯವಿದೆ. ಎಸ್. ಐ.-ಎಲ್. ಎಸ್. ಎಂ. ನಿಂದ ಸೇರಿಸಲಾದ ಪರಿಹಾರದಿಂದ ಈ ಸಮಸ್ಯೆಯನ್ನು ಭಾಗಶಃ ಪರಿಹರಿಸಬಹುದು. ಎಸ್. ಐ-ಎಲ್. ಎಸ್. ಎಂ ತಂತ್ರಗಳನ್ನು ಎರಡು ಮುಖ್ಯ ವರ್ಗಗಳಾಗಿ ವಿಂಗಡಿಸಬಹುದು. ಆಪ್ಟಿಕಲ್ ಸೆಕ್ಷನಿಂಗ್ ಎಸ್. ಐ-ಎಲ್. ಎಸ್. ಎಂ ಅತ್ಯಂತ ಸಾಮಾನ್ಯ ವಿಧಾನವಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಕೇಂದ್ರೀಕರಿಸದ ಹಿನ್ನೆಲೆ ಸಂಕೇತದ ಪ್ರಭಾವವನ್ನು ಮತ್ತಷ್ಟು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುವ ಮೂಲಕ ಅಕ್ಷೀಯ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಅನ್ನು ಸುಧಾರಿಸುತ್ತದೆ. ಸೂಪರ್-ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಎಸ್. ಐ.-ಎಲ್. ಎಸ್. ಎಂ. 3ಡಿ ಮಾದರಿಗಳಲ್ಲಿ ಸೂಪರ್-ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಸಾಧಿಸಲು 2ಡಿ ಸಿಮ್ನ ಬೆಳಕು ಮತ್ತು ಪುನರ್ನಿರ್ಮಾಣ ತಂತ್ರಗಳನ್ನು ಬಳಸುತ್ತದೆ. ಆಪ್ಟಿಕಲ್ ಸೆಕ್ಷನಿಂಗ್ ಎಸ್. ಐ.-ಎಲ್. ಎಸ್. ಎಂ. ಆಪ್ಟಿಕಲ್ ಸೆಕ್ಷನಿಂಗ್ ಎಸ್. ಐ.-ಎಲ್. ಎಸ್. ಎಂ. (ಓ. ಎಸ್.-ಎಸ್. ಐ.-ಎಲ್. ಎಸ್. ಎಂ.) ಅನ್ನು ಮೊದಲ ಬಾರಿಗೆ 1997ರ ಒಂದು ಪ್ರಬಂಧದಲ್ಲಿ ಎಂ. ನೀಲ್ ಮತ್ತು ಇತರರು. ಸೂಪರ್-ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಅನ್ನು ಸಾಧಿಸುವ ಬದಲು, ಈ ತಂತ್ರವು ಪ್ರಕಾಶಮಾನ ಬೆಳಕಿನ ಹಾಳೆಯು ಹೆಚ್ಚು ಕೇಂದ್ರೀಕೃತವಾಗಿರುವ ಸ್ಥಳವನ್ನು ಹೊರತುಪಡಿಸಿ ಬೇರೆ ಪದರಗಳಿಂದ ಹಿನ್ನೆಲೆ ಮಬ್ಬನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕುವ ಮೂಲಕ ಅಕ್ಷೀಯ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಅನ್ನು ಸುಧಾರಿಸಲು ರಚನಾತ್ಮಕ ಬೆಳಕಿನ ಹಿಂದಿನ ವಿಚಾರಗಳನ್ನು ಬಳಸುತ್ತದೆ. ಇದನ್ನು ಸಾಧಿಸಲು ಹಲವಾರು ವಿಧಾನಗಳಿದ್ದರೂ, ಅತ್ಯಂತ ಸಾಮಾನ್ಯ ವಿಧಾನವನ್ನು "ಮೂರು-ಹಂತದ" ಸಿಮ್ ಎಂದು ಕರೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ, ಇದನ್ನು ಇಲ್ಲಿ ವಿವರಿಸಲಾಗುವುದು. ಗ್ರಿಡ್ ಬೆಳಕಿನ ಮಾದರಿಯೊಂದಿಗೆ ಗುರಿಯನ್ನು ಚಿತ್ರಿಸುವ ಮೂಲಕ ಪಡೆದ ಸಂಕೇತವನ್ನು ಈ ಕೆಳಗಿನ ಸಮೀಕರಣದಿಂದ ಪ್ರತಿನಿಧಿಸಬಹುದು ಎಂದು ನೀಲ್ ಕಾಗದದಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆಃ ಇಲ್ಲಿ, ಹಿನ್ನೆಲೆ ಸಂಕೇತವಾಗಿದೆ, ಮತ್ತು ಗ್ರಿಡ್ನ ಕೊಸೈನ್ ಮತ್ತು ಸೈನ್ ಘಟಕಗಳಿಂದ ಪ್ರಕಾಶಿಸಲ್ಪಟ್ಟ ಗುರಿಯ ಪ್ರದೇಶದಿಂದ ಬರುವ ಸಂಕೇತಗಳಾಗಿವೆ. ಆಸಕ್ತಿಯ ಸಮತಲದ ಇನ್-ಫೋಕಸ್ ಚಿತ್ರವನ್ನು ಸಮೀಕರಣವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಪುನರ್ನಿರ್ಮಿಸಬಹುದು ಎಂದು ಸಹ ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆಃ ಗ್ರಿಡ್ ಬೆಳಕಿನ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ಮೂರು ಪ್ರತ್ಯೇಕ ಚಿತ್ರಗಳನ್ನು ಪಡೆಯುವ ಮೂಲಕ ಇದನ್ನು ಸಾಧಿಸಬಹುದು, ಪ್ರತಿ ಸ್ವಾಧೀನದ ನಡುವೆ ಗ್ರಿಡ್ ಅನ್ನು 60° ತಿರುಗಿಸಬಹುದು. ಬಯಸಿದ 2ಡಿ ಚಿತ್ರವನ್ನು ನಂತರ ಸಮೀಕರಣವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಪುನರ್ನಿರ್ಮಿಸಬಹುದುಃ ಇದು ಗ್ರಿಡ್ ಬೆಳಕಿನ ಮಾದರಿಯ ಅತ್ಯಂತ ಕೇಂದ್ರೀಕೃತ ಪ್ರದೇಶದಿಂದ ಮಾತ್ರ ಮಾಹಿತಿಯನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ 2ಡಿ ಚಿತ್ರವನ್ನು ರಚಿಸುತ್ತದೆ. ಈ ಮಾದರಿಯನ್ನು ಬೆಳಕಿನ ಹಾಳೆಯನ್ನು ಬಳಸಿ ರಚಿಸಿದರೆ, ಮಾದರಿಯ ಪೂರ್ಣ 3ಡಿ ಪುನರ್ನಿರ್ಮಾಣವನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸಲು ಹಾಳೆಯನ್ನು ಅಕ್ಷೀಯ ದಿಕ್ಕಿನಲ್ಲಿ ಸ್ಕ್ಯಾನ್ ಮಾಡಬಹುದು. ಹಿನ್ನೆಲೆ ಸಂಕೇತವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಲು ಈ ವಿಧಾನವನ್ನು ಬಳಸುವ ಪ್ರಾಥಮಿಕ ನ್ಯೂನತೆಯೆಂದರೆ, ಇದು ಅಂತಿಮವಾಗಿ ಎರಡು ಚಿತ್ರಗಳ ನಡುವೆ ಹಂಚಿಕೊಂಡ ಹಿನ್ನೆಲೆ ಸಂಕೇತವನ್ನು ಕಳೆಯುವುದರ ಮೇಲೆ ಅವಲಂಬಿತವಾಗಿದೆ. ಕೆಲವು ಇನ್-ಫೋಕಸ್ ಸಿಗ್ನಲ್ಗಳನ್ನು ಅನಿವಾರ್ಯವಾಗಿ ಹಿನ್ನೆಲೆ ಮಬ್ಬಿನ ಪಕ್ಕದಲ್ಲಿ ಕಳೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ. ಇದು ಸಿಗ್ನಲ್ನ ಒಟ್ಟಾರೆ ಕಡಿತಕ್ಕೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ, ಇದು ಕಡಿಮೆ-ಸಿಗ್ನಲ್ ಫ್ಲೋರೊಸೆಂಟ್ ಇಮೇಜಿಂಗ್ನಲ್ಲಿ ಹಾನಿಕಾರಕವಾಗಿದೆ. ಅದೇನೇ ಇದ್ದರೂ, ಈ ತಂತ್ರವು ಎಸ್. ಐ.-ಎಲ್. ಎಸ್. ಎಂ. ನ ಅತ್ಯಂತ ಸಾಮಾನ್ಯ ಬಳಕೆಯಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಎಲ್. ಎಸ್. ಎಂ. ಮೇಲೆ ಮಾತ್ರ ಸುಧಾರಿತ ಅಕ್ಷೀಯ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಅನ್ನು ತೋರಿಸಿದೆ. ಸೂಪರ್-ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಎಸ್. ಐ.-ಎಲ್. ಎಸ್. ಎಂ. ಸೂಪರ್-ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಎಸ್. ಐ.-ಎಲ್. ಎಸ್. ಎಂ. (ಎಸ್. ಆರ್.-ಎಸ್. ಐ.-ಎಲ್. ಎಸ್. ಎಂ.) 2ಡಿ ಅಥವಾ 3ಡಿ ಸಿಮ್ನಿಂದ ತಂತ್ರಗಳನ್ನು ಬಳಸುತ್ತದೆ, ಬೆಳಕಿನ ಹಾಳೆಯನ್ನು ಬೆಳಕಿನ ಮೂಲವಾಗಿ ಬಳಸುವಾಗ ಸಿಮ್ನ ಪ್ರಾದೇಶಿಕ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಅನ್ನು ಸಾಧಿಸಲು ಆಳವಾದ ಸ್ವತಂತ್ರ ಚಿತ್ರಣ ಮತ್ತು ಎಲ್. ಎಸ್. ಎಂ. ನ ಕಡಿಮೆ ಫೋಟೊಬ್ಲೆಚಿಂಗ್ ಜೊತೆಗೆ. ಅತ್ಯಂತ ಸಾಮಾನ್ಯ ಅನ್ವಯದಲ್ಲಿ, 3ಡಿ ಗುರಿ ಮಾದರಿಯ ಒಂದೇ ಸಮತಲದಲ್ಲಿ 1ಡಿ ಸೈನುಸಾಯ್ಡಲ್ ಮಾದರಿಯನ್ನು ರಚಿಸಲು ಬೆಳಕಿನ ಹಾಳೆಯನ್ನು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಹೆಚ್ಚಿನ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ 2ಡಿ ಪುನರ್ನಿರ್ಮಾಣಕ್ಕೆ ಸಾಕಷ್ಟು ಚಿತ್ರಗಳನ್ನು ಪಡೆಯಲು ಮಾದರಿಯನ್ನು ಈ ಒಂದೇ ಸಮತಲದಲ್ಲಿ ಅನೇಕ ಬಾರಿ ತಿರುಗಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಅಕ್ಷೀಯ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ನಲ್ಲಿ ಬೆಳಕನ್ನು ಸ್ಕ್ಯಾನ್ ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಪೂರ್ಣ 3ಡಿ ಪುನರ್ನಿರ್ಮಾಣಕ್ಕೆ ಸಾಕಷ್ಟು 2ಡಿ ಚಿತ್ರಗಳು ಬರುವವರೆಗೆ ಈ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಪುನರಾವರ್ತಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ, ಈ ವಿಧಾನವು ಸುಧಾರಿತ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಅನ್ನು ಮಾತ್ರವಲ್ಲದೆ ಓಎಸ್-ಎಸ್ಐ-ಎಲ್ಎಸ್ಎಂ ಮೇಲೆ ಸುಧಾರಿತ ಎಸ್ಎನ್ಆರ್ ಅನ್ನು ಸಹ ಪ್ರದರ್ಶಿಸುತ್ತದೆ, ಏಕೆಂದರೆ ಪುನರ್ನಿರ್ಮಾಣದಲ್ಲಿ ಯಾವುದೇ ಮಾಹಿತಿಯನ್ನು ತಿರಸ್ಕರಿಸಲಾಗಿಲ್ಲ. ಇದಲ್ಲದೆ, ಎಸ್ಆರ್-ಎಸ್ಐ-ಎಲ್ಎಸ್ಎಂನ ಸೈದ್ಧಾಂತಿಕ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ 3ಡಿ ಸಿಮ್ಗಿಂತ ಸ್ವಲ್ಪ ಕಡಿಮೆಯಿದ್ದರೂ, ಎಲ್ಎಸ್ಎಂನ ಬೆಳಕಿನ ಗುಣಲಕ್ಷಣದ ಆಳ-ಸ್ವತಂತ್ರ ಕೇಂದ್ರೀಕರಣದಿಂದಾಗಿ ಈ ತಂತ್ರವು 3ಡಿ ಸಿಮ್ನ ಮೇಲೆ ಸುಧಾರಿತ ಕಾರ್ಯಕ್ಷಮತೆಯನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ. ಅಳವಡಿಕೆ ಎಸ್. ಐ.-ಎಲ್. ಎಸ್. ಎಂ. ನಲ್ಲಿ ಒಂದು ಪ್ರಮುಖ ಸವಾಲು ಎಂದರೆ ಬೆಳಕಿನ ಹಾಳೆಗಳಲ್ಲಿ ರಚನಾತ್ಮಕ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸುವ ದೈಹಿಕ ಸಾಮರ್ಥ್ಯ ಹೊಂದಿರುವ ಎಂಜಿನಿಯರಿಂಗ್ ವ್ಯವಸ್ಥೆಗಳು. ಇದನ್ನು ಸಾಧಿಸಲು ಮೂರು ಪ್ರಮುಖ ವಿಧಾನಗಳೆಂದರೆ ಇಂಟರ್ಫೆರಿಂಗ್ ಲೈಟ್ ಶೀಟ್ಗಳು, ಡಿಜಿಟಲ್ ಎಲ್ಎಸ್ಎಂ ಮತ್ತು ಸ್ಪೇಷಿಯಲ್ ಲೈಟ್ ಮಾಡ್ಯುಲೇಟರ್ಗಳನ್ನು ಬಳಸುವುದು. ಮಧ್ಯಪ್ರವೇಶಿಸುವ ಬೆಳಕಿನ ಹಾಳೆಗಳೊಂದಿಗೆ, ಎರಡು ಸುಸಂಬದ್ಧ ಪ್ರತಿ-ಪ್ರಸಾರ ಹಾಳೆಗಳನ್ನು ಮಾದರಿಯೊಳಗೆ ಕಳುಹಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಈ ಹಾಳೆಗಳ ನಡುವಿನ ಹಸ್ತಕ್ಷೇಪದ ಮಾದರಿಯು ಅಪೇಕ್ಷಿತ ಬೆಳಕಿನ ಮಾದರಿಯನ್ನು ಸೃಷ್ಟಿಸುತ್ತದೆ, ಇದನ್ನು ಹಾಳೆಗಳನ್ನು ತಿರುಗಿಸಲು ತಿರುಗುವ ಕನ್ನಡಿಗಳನ್ನು ಬಳಸಿ ತಿರುಗಿಸಬಹುದು ಮತ್ತು ಸ್ಕ್ಯಾನ್ ಮಾಡಬಹುದು. ಬೆಳಕಿನ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸಲು ಡಿಜಿಟಲ್ ಲೈಟ್-ಶೀಟ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿಯನ್ನು ಬಳಸುವ ಮೂಲಕ ಹೆಚ್ಚುವರಿ ನಮ್ಯತೆಯನ್ನು ಸೇರಿಸಬಹುದು. ಡಿಜಿಟಲ್ ಎಲ್ಎಸ್ಎಂನಲ್ಲಿ, ಮಾದರಿಯ ಮೂಲಕ ಲೇಸರ್ ಕಿರಣವನ್ನು ವೇಗವಾಗಿ ಸ್ಕ್ಯಾನ್ ಮಾಡುವ ಮೂಲಕ ಬೆಳಕಿನ ಹಾಳೆಯನ್ನು ರಚಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಇದು ಲೇಸರ್ ಸ್ಕ್ಯಾನ್ ಮಾಡುವಾಗ ಅದರ ತೀವ್ರತೆಯನ್ನು ಮಾರ್ಪಡಿಸುವ ಮೂಲಕ ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಬೆಳಕಿನ ಮಾದರಿಯ ಮೇಲೆ ಉತ್ತಮ ನಿಯಂತ್ರಣವನ್ನು ಅನುಮತಿಸುತ್ತದೆ. ಈ ತಂತ್ರವನ್ನು ಎಸ್. ಐ-ಎಲ್. ಎಸ್. ಎಂ ಜೊತೆಗೆ ಅನೇಕ ರೀತಿಯ ಲೈಟ್ ಶೀಟ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿಯ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ವ್ಯವಸ್ಥೆಗಳನ್ನು ರಚಿಸಲು ಬಳಸಲಾಗಿದೆ. ಅಂತಿಮವಾಗಿ, ಬೆಳಕಿನ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ವಿದ್ಯುನ್ಮಾನವಾಗಿ ನಿಯಂತ್ರಿಸಲು ಪ್ರಾದೇಶಿಕ ಬೆಳಕಿನ ಮಾಡ್ಯುಲೇಟರ್ಗಳನ್ನು ಬಳಸಬಹುದು, ಇದು ಮಾದರಿಗಳ ನಡುವೆ ಬಹಳ ಸೂಕ್ಷ್ಮವಾದ ನಿಯಂತ್ರಣ ಮತ್ತು ವೇಗವಾಗಿ ಬದಲಾಯಿಸಲು ಅನುವು ಮಾಡಿಕೊಡುವ ಪ್ರಯೋಜನವನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ. ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, ಎಸ್. ಐ.-ಎಲ್. ಎಸ್. ಎಂ. ಸುತ್ತಲಿನ ಇತ್ತೀಚಿನ ಹೆಚ್ಚಿನ ಕೆಲಸವು ಜೈವಿಕ ಅಂಗಾಂಶಗಳಲ್ಲಿನ ಆಳವಾದ ಚಿತ್ರಣಕ್ಕಾಗಿ ಇತರ ತಂತ್ರಗಳೊಂದಿಗೆ ವಿಧಾನವನ್ನು ಸಂಯೋಜಿಸುವುದರ ಮೇಲೆ ಕೇಂದ್ರೀಕರಿಸುತ್ತದೆ. ಉದಾಹರಣೆಗೆ, 2021 ರ ಕಾಗದವು ಎನ್ಐಆರ್-II ಪ್ರಕಾಶದೊಂದಿಗೆ ಎಸ್ಐ-ಎಲ್ಎಸ್ಎಂನ ಬಳಕೆಯನ್ನು ~ 750 ಯುಎಂನ ನುಗ್ಗುವ ಆಳದೊಂದಿಗೆ ~ 1.7x ಮೂಲಕ ಟ್ರಾನ್ಸ್ಕ್ರಾನಿಯಲ್ ಮೌಸ್ ಮೆದುಳಿನ ಚಿತ್ರಣದ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಅನ್ನು ಸುಧಾರಿಸಲು ಮತ್ತು ಸಿಗ್ನಲ್ ಟು ಬ್ಯಾಕ್ಗ್ರೌಂಡ್ ಅನುಪಾತದಲ್ಲಿ ಸುಮಾರು 16x ಸುಧಾರಣೆಯನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸಿತು. ಎಲ್ಎಸ್ಎಂನಲ್ಲಿ ಬೆಳಕಿನ ಹಾಳೆಗಳನ್ನು ರೂಪಿಸಲು ಸಿಮ್ ಅನ್ನು ಇತರ ತಂತ್ರಗಳೊಂದಿಗೆ ಸಂಯೋಜಿಸುವುದು, ಎಸ್ಐ-ಎಲ್ಎಸ್ಎಂ ಅನ್ನು ಎರಡು-ಫೋಟಾನ್ ಪ್ರಚೋದನೆಯೊಂದಿಗೆ ಸಂಯೋಜಿಸುವುದು ಅಥವಾ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಮಿತಿಗಳನ್ನು ಮತ್ತಷ್ಟು ಹೆಚ್ಚಿಸಲು ರೇಖಾತ್ಮಕವಲ್ಲದ ಪ್ರತಿದೀಪಕವನ್ನು ಬಳಸುವುದು ಇತರ ಭರವಸೆಯ ನಿರ್ದೇಶನಗಳಲ್ಲಿ ಸೇರಿವೆ. ಉಲ್ಲೇಖಗಳು ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ ಆಪ್ಟಿಕಲ್ ಇಮೇಜಿಂಗ್ ವಾಲ್ಯೂಮೆಟ್ರಿಕ್ ಉಪಕರಣಗಳು