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31979L0796

Primeira Directiva 79/796/CEE da Comissão, de 26 de Julho de 1979, que fixa métodos de análise comunitários para o controlo de determinados açúcares destinados à alimentação humana

Jornal Oficial nº L 239 de 22/09/1979 p. 0024 - 0052 Edição especial finlandesa: Capítulo 13 Fascículo 10 p. 0080  Edição especial grega: Capítulo 13 Fascículo 8 p. 0222  Edição especial sueca: Capítulo 13 Fascículo 10 p. 0080  Edição especial espanhola: Capítulo 13 Fascículo 10 p. 0190  Edição especial portuguesa: Capítulo 13 Fascículo 10 p. 0190

PRIMEIRA DIRECTIVA DA COMISSÃO de 26 de Julho de 1979 que fixa métodos de análise comunitários para o controlo de determinados açúcares destinados à alimentação humana(79/796/CEE)  A COMISSÃO DAS COMUNIDADES EUROPEIAS,  Tendo em conta o Tratado que institui a Comunidade Económica Europeia,  Tendo em conta a Directiva 73/437/CEE do Conselho, de 11 de Dezembro de 1973, relativa à aproximação das legislações dos Estados-membros respeitantes a determinados açúcares destinados à alimentação humana (1) e, nomeadamente, o seu artigo 11o,  Considerando que o artigo 11o da referida directiva prevê que a composição de determinados açúcares será controlada de acordo com os métodos de análise comunitários;  Considerando que é conveniente adoptar uma primeira série de métodos em relações quais os estudos puderam ser concluídos;  Considerando que o método da determinação do tipo de cor para o açúcar ou açúcar branco bem como para o açúcar branco extra, o método do doseamento das cinzas condutimétricas no açúcar branco extra, no açúcar líquido, no açúcar líquido invertido e no  xarope de açúcar invertido, bem como o método de determinação da cor em solução para o açúcar branco extra e para o açúcar líquido estão fixados no Anexo da Directiva 73/437/CEE;  Considerando por outro lado que, aguardando o aperfeiçoamento de outros métodos comunitários para a determinação dos açúcares redutores, é conveniente deixar aos Estados-membros a faculdade de continuar a autorizar a utilização do método Lane e Eynon  (métodos 7 e 8, pontos III.3 e III.4, do Anexo II) em substituição do método Luff-Schoorl (método 6, pontos III.3 e III.4, do Anexo II);  Considerando que os métodos de análise que constam da presente directiva estão conformes ao parecer do Comité Permanente dos Géneros Alimentícios,  ADOPTOU A PRESENTE DIRECTIVA:   Artigo 1o  1. Os Estados-membros exigirão que as análises necessárias aos controlos dos critérios indicados no Anexo I sejam efectuadas de acordo com os métodos descritos no Anexo II da presente directiva.  2. Sem prejuízo do disposto no segundo parágrafo, o método Luff-Schoorl (método 6 do Anexo II) deve utilizar-se para o doseamento dos açúcares redutores nos seguintes açúcares:  - açúcar líquido,  - açúcar branco líquido,  - açúcar líquido invertido,  - açúcar branco líquido invertido,  - xarope de açúcar invertido,  - xarope de açúcar branco invertido,  - xarope de glucose,  - xarope de glucose desidratado,  - dextrose monoidratado,  - dextrose anidra.  Contudo, os Estados-membros podem exigir a aplicação no seu território do método Lane e Eynon (métodos 7 e/ou 8 do Anexo II) para determinar os açúcares redutores num ou mais açúcares acima referidos.  3. No caso em que um Estado-membro utilize a faculdade prevista no no 2, segundo parágrafo, desse facto informará imediatamente a Comissão e os outros Estados-membros.   Artigo 2o  Os Estados-membros porão em vigor as disposições legislativas, regulamentares e administrativas necessárias para darem cumprimento à presente directiva, o mais tardar dezoito meses após a sua notificação. Desse facto informarão imediatamente  a Comissão.   Artigo 3o  Os Estados-membros são destinatários da presente directiva.  Feito em Bruxelas em 26 de Julho de 1979.  Pela Comissão Etienne DAVIGNON Membro da Comissão   (1) JO no L 42 de 23. 2. 1970, p. 1.     ANEXO I   ÂMBITO DE APLICAÇÃO DOS MÉTODOS DE ANÁLISE COMUNITÁRIOS RELATIVOS A DETERMINADOS AÇÚCARES DESTINADOS À ALIMENTAÇÃO HUMANA I. Determinação da perda de massa por dessecação:  - no açúcar semibranco (Método 1 do Anexo II) - no açúcar ou açúcar branco (Método 1 do Anexo II) - no açúcar branco extra (Método 1 do Anexo II) II. Determinação da matéria seca:  II.1. - no xarope de glucose (Método 2 do Anexo II) - no xarope de glucose desidratado (Método 2 do Anexo II) - na dextrose monoidratada (Método 2 do Anexo II) - na dextrose anidra (Método 2 do Anexo II) II.2. - açúcar líquido ou açúcar branco líquido (Método 3 do Anexo II) - açúcar líquido invertido ou açúcar branco líquido invertido (Método 3 do Anexo II) - xarope de açúcar invertido ou xarope de açúcar branco invertido (Método 3 do Anexo II) III. Doseamento dos açúcares redutores:  III.1. - no açúcar semibranco (Método 4 do Anexo II) III.2. - no açúcar ou açúcar branco (Método 5 do Anexo II) - no açúcar branco extra (Método 5 do Anexo II) III.3. - no açúcar líquido (Método 6 ou método 7 do Anexo II) - no açúcar branco líquido (Método 6 ou método 7 do Anexo II) - no açúcar líquido invertido (Método 6 ou método 7 do Anexo II) - no açúcar branco líquido invertido (Método 6 ou método 7 do Anexo II) - no xarope de açúcar invertido (Método 6 ou método 7 do Anexo II) - no xarope de açúcar branco invertido (Método 6 ou método 7 do Anexo II) III.4 - no xarope de glucose (Método 6 ou método 8 do Anexo II) - no xarope de glucose desidratada (Método 6 ou método 8 do Anexo II) - na dextrose monoidratada (Método 6 ou método 8 do Anexo II) - na dextrose anidra (Método 6 ou método 8 do Anexo II) IV. Determinação da cinza sulfatada:  - no xarope de glucose (Método 9 do Anexo II) - no xarope de glucose desidratado (Método 9 do Anexo II) - na dextrose monoidratada (Método 9 do Anexo II) - na dextrose anidra (Método 9 do Anexo II) V. Determinação da polarização:  - do açúcar semibranco (Método 10 do Anexo II) - do açúcar ou açúcar branco (Método 10 do Anexo II) - do açúcar branco extra (Método 10 do Anexo II)       ANEXO II   MÉTODOS DE ANÁLISE RELATIVOS AO CONTROLO DA COMPOSIÇÃO DE DETERMINADOS AÇÚCARES DESTINADOS À ALIMENTAÇÃO HUMANA INTRODUÇÃO 1. Preparação da amostra a analisar A amostra destinada ao laboratório deve ser cuidadosamente homogeneizada.  Tomar, tendo em vista a análise, uma quantidade de pelo menos 200 g e introduzi-la imediatamente num recipiente seco munido de um fecho estanque.  2. Reagentes e aparelhos Na descrição da aparelhagem são indicados apenas os instrumentos e aparelhos especiais ou que exijam normas especiais.  Por outro lado, quando se faz referência à água, trata-se sempre de água destilada ou água desmineralizada de pureza pelo menos equivalente.  Todos os reagentes devem ser de qualidade analítica salvo especificações em contrário. Do mesmo modo, quando se faz referência a uma solução de um reagente, sem outra indicação, trata-se de uma solução aquosa.  3. Expressão dos resultados O resultado referido no boletim de análise é o valor médio obtido a partir de pelo menos duas determinações cuja reprodutibilidade é satisfatória.  Salvo disposições especiais, os resultados são expressos em percentagem (m/m) da amostra original, tal como recebida no laboratório.  O resultado só deve comportar os algarismos significativos do que a precisão do método lhe permita.  METODO 1 DETERMINAÇÃO DA PERDA DE MASSA POR DESSECAÇÃO 1. Objectivo e âmbito de aplicação O método permite determinar a perda de massa por:  - do açúcar semibranco,  - do açúcar ou do açúcar branco,  - do açúcar branco extra.  2. Definição O teor da perda de massa por dessecação é obtido pela aplicação do método a seguir descrito.  3. Princípio A perda de massa por dessecação é determinada a uma temperatura de 103 ± 2 ° C.  4. Aparelhos e utensílios 4.1. Balança analítica com precisão de 0,1 mg.  4.2. Estufa convenientemente ventilada e que assegure uma regulação de temperatura de 103 ± 2 ° C.  4.3. Cápsula de metal de fundo plano (não atacável nas condições de ensaio) com um diâmetro pelo menos igual a 100 mm e com uma altura igual a 30 mm.  4.4. Exsicador contendo sílica-gel recentemente activada ou outro desidratante equivalente e munido de um indicador de humidade.  5. Técnica Nota bene: As operações descritas nos pontos 5.3 a 5.7 devem ser efectuadas imediatamente após a abertura dos recipientes que contêm as amostras.  5.1. Secar a cápsula (4.3) na estufa (4.2) a 103 ± 2 ° C até à massa constante.  5.2. Deixar arrefecer a cápsula no exsicador (4.4) (pelo menos 30 a 35 minutos) e pesar com uma precisão de 0,1 mg.  5.3. Pesar com uma precisão de 0,1 mg, na cápsula, cerca de 20 a 30 g da amostra.  5.4. Colocar a cápsula na estufa (4.2) e mantê-la em seguida durante 3 horas a uma temperatura de 103 ± 2 ° C.  5.5. Deixar arrefecer a cápsula dentro de um exsicador (4.4) e pesar com a precisão de 0,1 mg.  5.6. Colocar de novo a cápsula na estufa (4.2) a 103 ± 2 ° C.  Deixar arrefecer no exsicador (4.4) e pesar com a precisão de 0,1 mg. Repetir esta operação no caso do desvio entre as duas pesagens sucessivas ser superior a 1 mg. Na hipótese de um aumento de massa, considerar-se-á para o cálculo o valor mais baixo  registado.  5.7. O tempo de dessecação total não deve exceder 4 horas.  6. Resultados 6.1. Fórmula e cálculo dos resultados A perda de massa por dessecação, expressa em percentagem da amostra, é dada pela fórmula seguinte:   × 1 000 em que mo = massa inicial da toma, em gramas m1 = massa da toma em gramas, depois do ensaio na estufa.  6.2. REPRODUTIBILIDADE A diferença entre os resultados de duas determinações paralelas, efectuadas simultaneamente nas mesmas condições pelo mesmo analista relativas à mesma amostra, não deve ultrapassar 0,02 g por 100 g de amostra.  MÉTODO 2 DETERMINAÇÃO DA MATÉRIA SECA (por dessecação no vácuo) 1. Objectivo e âmbito de aplicação O método permite determinar o teor da matéria seca:  - do xarope de glucose - do xarope de glucose desidratada - da dextrose monoidratada - da dextrose anidra.  2. Definição O teor de matéria seca é obtido pela aplicação do método a seguir descrito.  3. Princípio A perda de massa por dessecação é determinada pela passagem numa estufa de vácuo a uma pressão que não ultrapasse 3,3 KPa (34 mbar) e à temperatura de 70 ± 1 ° C, de uma toma diluída e misturada comterra de diatomáceas no caso do xarope de glucose  desidratado.  4. Reagentes 4.1. Terra de diatomáceas de qualidade analítica, purificada por sucessivas lavagens com o ácido clorídrico diluído (1 ml de ácido concentrado, massa volúmica = 1,19 g/ml por litro de água) escoada por funil Buechner. Parar o tratamento logo que as águas  de lavagem saiam nitidamente ácidas. Continuar a lavagem com água até que o pH das águas de filtração seja superior a 4. Secar numa estufa regulada a 103 ± 2 ° C e conservar o pó branco obtido num recipiente hermeticamente fechado.  5. Apareilhos e utensílios 5.1. Estufa de dessecação sob vácuo munida de regulação automática da temperatura, de um termómetro e de um manómetro para vácuo.  A estufa será concebida de modo a assegurar um transporte rápido do calor às cápsulas colocadas sobre as prateleiras porta-amostras.  5.2. Bateria de dessecação do ar de circulação composta por uma coluna cheia de sílica gel recentemente activada ou um agente desidratante equivalente e munida de um indicador de humidade. Esta coluna monta-se em série com um borbulhador de gás contendo  ácido sulfúrico concentrado. É ligado à entrada de ar da estufa.  5.3. Bomba de vácuo capaz de manter na estufa uma pressão inferior a 3,3 Kpa (34 mbar).  5.4. Cápsula de metal de fundo plano (não atacável pelo xarope de glucose ou pela dextrose nas condições do ensaio) com cerca de 100 mm de diâmetro e uma altura de pelo menos 30 mm.  5.5. Vareta de vidro com um comprimento tal que não possa cair dentro do recipiente.  5.6. Exsicador com sílica gel recentemente activada ou um desidratante equivalente e munido de um indicador de humidade.  5.7. Balança analítica de precisão de 0,1 mg.  6. Técnica 6.1. Deitar cerca de 30 g de terra de diatomáceas (4.1) numa cápsula (5.4) munida de uma vareta de vidro (5.5). Colocar o conjunto na estufa (5.1) a 70 ± 1 ° C e reduzir a pressão a 3,3 kPa (34 mbar) ou menos. Secar, pelo menos, durante cinco horas  deixando penetrar lentamente uma corrente de ar através da bateria de dessecação. Verificar a pressão periodicamente e corrigi-la, se necessário.  6.2. Restabelecer a pressão atmosférica dentro da estufa aumentando cuidadosamente o débito da corrente de ar. Colocar imediatamente a cápsula com a vareta de vidro no exsicador (5.6). Deixar arrefecer e pesar.  6.3. Pesar com a precisão de 1 mg, cerca de 10 g do produto a analisar num copo de 100 ml.  6.4. Diluir a amostra em 10 ml de água quente e transferir a solução quantitativamente para a cápsula tarada servindo-se da vareta (5.5) e lavando-a três vezes com 5 ml de água quente. Homogeneizar com muito cuidado.  6.5. Colocar a cápsula com a toma e a vareta de vidro na estufa e restabelecer uma pressão de 3,3 kPa (34 mbar) ou menos. Durante a dessecação a 70 ± 1 ° C deixar circular uma lenta corrente de ar seco. Deixar funcionar durante 20 horas mas conduzir a  operação de tal modo que a dessecação esteja já bastante adiantada perto do fim do primeiro dia. Será necessário fazer funcionar a bomba de vácuo, durante a noite, à pressão prevista, deixando penetrar uma lenta corrente de ar seco a fim de manter uma  pressão de 3,3 kPa (34 mbar) ou menos.  6.6. Restabelecer a pressão atmosférica dentro da estufa aumentando cuidadosamente o débito da corrente de ar seco. Colocar imediatamente a cápsula no exsicador. Deixar arrefecer e pesar.  6.7. Prosseguir a operação (6.5) durante mais 4 horas. Restabelecer em seguida a pressão dentro da estufa, colocar imediatamente a cápsula no exsicador. Deixar arrefecer e pesar. Verificar a constância da massa obtida. Esta constância é considerada  satisfatória se o desvio entre as duas pesagens da mesma cápsula não exceder 2 mg. Se o desvio ultrapassar este limite, recomeçar a operação 6.7.  6.8. Para determinar o teor de matéria seca da dextrose monoidratada e da dextrose anidra, seguir a técnica prevista na secção 6, sem utilizar a terra de diatomáceas e a água.  7. Expressão dos resultados 7.1. Fórmula e cálculo dos resultados A matéria seca expressa em % da massa da amostra a analisar é igual a:  (m1 - m2) ×  em que m3 = a massa inicial, em gramas, da toma;  m1 = a massa, em gramas, da cápsula com a terra de diatomáceas e a vareta de vidro e o resíduo de dessecação da amostra;  m2 = a massa, em gramas, da cápsula com a terra de diatomáceas e a vareta.  7.2. Reprodutibilidade A diferença entre os resultados de duas determinações paralelas efectuadas simultaneamente nas mesmas condições, pelo mesmo analista e relativas à mesma amostra, não deve ultrapassar 0,12 g por 100 g da amostra.  MÉTODO 3 DETERMINAÇÃO DA MATÉRIA SECA TOTAL (Por refractometria) 1. Objectivo e âmbito de aplicação O método permite determinar a matéria seca:  - do açúcar líquido,  - do açúcar branco líquido,  - do açúcar líquido invertido,  - do açúcar branco líquido invertido,  - do xarope de açúcar invertido,  - do xarope de açúcar branco invertido.  2. Definição O teor de matéria seca é obtido pela aplicação do método a seguir descrito.  3. Princípio O índice de refracção da amostra é determinado a 20 ° C e convertido em matéria seca por meio das tabelas de conversão, que estabelecem a concentração em função do índice de refracção.  4. Aparelhos e utensílios 4.1. Refractómetro que permita a leitura do índice de refracção com uma precisão à quarta casa decimal, munido de um termómetro e de um dispositivo de circulação de água mantida a 20 ± 0,5 ° C.  4.2. Fonte luminosa constituída por uma lâmpada de vapor de sódio.  5. Técnica 5.1. Solubilizar os cristais, se existirem na amostra, efectuando uma diluição 1:1 (m/m).  5.2. Medir no refractómetro (4.1) o índice de refracção da amostra a 20 ° C.  6. Expressão dos resultados 6.1. Cálculo dos resultados A matéria seca é calculada utilizando os índices de refracção das soluções de sacarose a 20 ° C da tabela junta, corrigida acrescentando 0,022 por cada 1 % de açúcar invertido presente na amostra.  6.2. Quando a amostra tiver sido diluída em água, de acordo com a relação 1:1 (m/m), a quantidade calculada de matéria seca deve ser multiplicada por 2.  6.3. REPRODUTIBILIDADE A diferença entre os resultados de duas determinações paralelas, efectuadas simultaneamente nas mesmas condições, pelo mesmo analista relativas à mesma amostra, não deve ultrapassar 0,2 g por 100 g.  TABELAS DE REFERÊNCIA Indices de refracção (n) de soluções de sacarose a 20 graus (1)   "" ID="1">1,3330> ID="2">0,009"> ID="1">1,3331> ID="2">0,078"> ID="1">1,3332> ID="2">0,149"> ID="1">1,3333> ID="2">0,218"> ID="1">1,3334> ID="2">0,288"> ID="1">1,3335> ID="2">0,358"> ID="1">1,3336> ID="2">0,428"> ID="1">1,3337>  ID="2">0,498"> ID="1">1,3338> ID="2">0,567"> ID="1">1,3339> ID="2">0,637"> ID="1">1,3340> ID="2">0,707"> ID="1">1,3341> ID="2">0,776"> ID="1">1,3342> ID="2">0,846"> ID="1">1,3343> ID="2">0,915"> ID="1">1,3344> ID="2">0,985"> ID="1">1,3345>  ID="2">1,054"> ID="1">1,3346> ID="2">1,124"> ID="1">1,3347> ID="2">1,193"> ID="1">1,3348> ID="2">1,263"> ID="1">1,3349> ID="2">1,332"> ID="1">1,3350> ID="2">1,401"> ID="1">1,3351> ID="2">1,470"> ID="1">1,3352> ID="2">1,540"> ID="1">1,3353>  ID="2">1,609"> ID="1">1,3354> ID="2">1,678"> ID="1">1,3355> ID="2">1,747"> ID="1">1,3356> ID="2">1,816"> ID="1">1,3357> ID="2">1,885"> ID="1">1,3358> ID="2">1,954"> ID="1">1,3359> ID="2">2,023"> ID="1">1,3360> ID="2">2,092"> ID="1">1,3361>  ID="2">2,161"> ID="1">1,3362> ID="2">2,230"> ID="1">1,3363> ID="2">2,299"> ID="1">1,3364> ID="2">2,367"> ID="1">1,3365> ID="2">2,436"> ID="1">1,3366> ID="2">2,505"> ID="1">1,3367> ID="2">2,574"> ID="1">1,3368> ID="2">2,642"> ID="1">1,3369>  ID="2">2,711"> ID="1">1,3370> ID="2">2,779"> ID="1">1,3371> ID="2">2,848"> ID="1">1,3372> ID="2">2,917"> ID="1">1,3373> ID="2">1,985"> ID="1">1,3374> ID="2">3,053"> ID="1">1,3375> ID="2">3,122"> ID="1">1,3376> ID="2">3,190"> ID="1">1,3377>  ID="2">3,259"> ID="1">1,3378> ID="2">3,327"> ID="1">1,3379> ID="2">3,395"> ID="1">1,3380> ID="2">3,463"> ID="1">1,3381> ID="2">3,532"> ID="1">1,3382> ID="2">3,600"> ID="1">1,3383> ID="2">3,668"> ID="1">1,3384> ID="2">3,736"> ID="1">1,3385>  ID="2">3,804"> ID="1">1,3386> ID="2">3,872"> ID="1">1,3387> ID="2">3,940"> ID="1">1,3388> ID="2">4,008"> ID="1">1,3389> ID="2">4,076"> ID="1">1,3390> ID="2">4,144"> ID="1">1,3391> ID="2">4,212"> ID="1">1,3392> ID="2">4,279"> 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Objectivo e âmbito de aplicação O método permite determinar o teor de açúcares redutores, expresso em açúcares invertidos no açúcar semibranco.  2. Definição Os açúcares redutores expressos em açúcares invertidos são determinados pelo método a seguir descrito.  3. Princípio Redução de uma solução de cobre (II) por meio de uma solução de açúcares redutores. O óxido de cobre (I) formado é oxidado por uma solução de iodo em que se determina o excesso por titulação de retorno com uma solução titulada de tiosulfato de sódio.  4. Reagentes 4.1. Solução de cobre II (solução de Mueller) 4.1.1. Dissolver 35 g de sulfato de cobre (II) pentaidratado (Cu SO4 5H2O) em 400 ml de água a fever. Arrefecer.  4.1.2. Dissolver 173 g de tartarato duplo de sódio e de potássio tetraidratado (sal de Rochelle ou sal de Seignette: KNaC4H4O64H2O) e 68 g de carbonato de sódio anidro em 500 ml de água a ferver. Arrefecer.  4.1.3. Misturar as duas soluções (4.1.1 e 4.1.2) num balão aferido de 1 l e perfazer 1 000 ml com água. Juntar 2 g de carvão activado, agitar, deixar em repouso durante várias horas e filtrar por papel de filtro duro ou por membrana filtrante. Se  durante a conservação aparecerem pequenas quantidades de óxido de cobre (I) é necessário nova filtragem.  4.2. Solução de ácido acético 5 mol/l.  4.3. Solução de iodo 0,01665 mol/l.  4.4. Solução de tiosulfato de sódio 0,0333 mol/l.  4.5. Solução de amido: juntar uma mistura de 5 g de amido solúvel em 30 ml de água a 1 l de água a ferver. Ferver durante três minutos, deixar arrefecer, juntar eventualmente 10 mg de iodeto de mercúrio (II) como agente conservante.  5. Aparelhagem 5.1. Frasco cónico de 300 ml; pipetas e buretas de precisão 5.2. Banho de água a ferver.  6. Técnica 6.1. Tomar num frasco cónico de 300 ml uma quantidade da amostra (10 g pelo menos) que não contenha mais de 30 mg de açúcar invertido e dissolvê-la em cerca de 100 ml de água.  Juntar 10 ml de solução de cobre (II) (4.1) por meio de uma pipeta. Agitar e colocar o frasco num banho de água a ferver e mantê-lo durante exactamente 10 minutos. O nível da solução no frasco cónico deve estar pelo menos 20 mm abaixo do nível da água  do banho. Arrefecer rapidamente, numa corrente de água fria. Durante esta operação, não, não agitar a solução para evitar que o oxigénio do ar reponha em solução uma parte do precipitado de óxido de cobre (I).  Juntar à solução arrefecida 5 ml de ácido acético 5 mol/l (4.2) sem agitar e imediatamente depois, com uma bureta, juntar um excesso (entre 20 e 40 ml) de solução de iodo 0,01665 mol/l (5.3).  Agitar para dissolver o precipitado de cobre. Triturar o iodo em excesso por meio da solução de tiosulfato de sódio 0,0333 mol/l (4.4) na presença da solução de amido (4.5) adicionada no final da titulação.  6.2. Proceder previamente a um ensaio em branco com água. Determinar esta correcção para cada preparação de solução de cobre (II) (4.1). Este valor não deve exceder 0,1.  6.3. Proceder a um ensaio a frio com a solução açucarada, deixando-a repousar à temperatura ambiente durante 10 minutos para tomar em conta redutores eventualmente presentes tais como o dióxido de enxofre.  7. Expressão dos resultados 7.1. Fórmula e cálculo dos resultados Volume da solução de iodo utilizada: número de ml da solução de iodo 0,01665 mol/l adicionado em excesso menos o número de ml da solução de tiossulfato de sódio 0,0333 mol/l utilizado na titulação.  Subtrair ao volume da solução de iodo 0,01665 mol/l utilizada:  7.1.1. O número de em ml utilizado no ensaio em branco efectuado previamente com água (6.2);  7.1.2. O número de ml utilizado no ensaio a frio com a solução açucarada (6.3);  7.1.3. 2 ml para ter em conta a acção redutora de 10 g de sacarose ou uma quantidade proporcional se a toma for inferior a 10 g (correcção para a sacarose). Efectuadas estas correcções, 1 ml da solução de iodo consumido corresponde a 1 mg de açúcar invertido.  O teor de açúcar invertido em percentagem da amostra é dado pela fórmula seguinte:   em que V1 = número de ml da solução de iodo 0,01665 mol/l (4.3) após correcção,  m0 = massa, em gramas, da toma.  7.2. REPRODUTIBILIDADE A diferença entre os resultados de duas determinações, efectuadas simultaneamente nas mesmas condições pelo mesmo analista relativas à mesma amostra, não deve ultrapassar 0,02 g por 100 g da amostra.  MÉTODO 5 DETERMINAÇÃO DOS AÇÚCARES REDUTORES - EXPRESSOS EM AÇÚCAR INVERTIDO (Método de Knight e Allen) 1. Objectivo e âmbito de aplicação O método permite determinar um teor de açúcar invertido no:  - açúcar ou açúcar branco,  - açúcar branco extra. 2. Definição Os açúcares redutores, expressos em açúcar invertido, são determinados pelo método a seguir descrito.  3. Princípio Um reagente de cobre (II) é adicionado em excesso à solução a analisar, sendo seguidamente reduzido; a quantidade não reduzida é titulada por retorno com uma solução de EDTA.  4. Reagentes 4.1. Solução de ácido etilenodiaminatetracético (sal dissódico) (EDTA), 0,0025 mol/l: dissolver em água 0,930 g de EDTA e perfazer 1 000 ml com água.  4.2. Solução de indicador de murexida: Juntar 0,25 g de murexida a 50 ml de água e misturar com 20 ml de uma solução aquosa de azul de metileno a 0,2 g/100 ml.  4.3. Reagente alcalino de cobre: dissolver 25 g de carbonato de sódio anidro e 25 g de tartarato duplo de sódio e potássio tetraidratado em cerca de 600 ml de água contendo 400 ml de hidróxido de sódio 1 mol/l. Dissolver 6 g de sulfato de cobre (II)  pentaidratados em cerca de 100 ml de água e juntar à solução de tartarato. Perfazer a 1 000 ml com água.  Nota bene A solução tem uma duração de conservação limitada (uma semana).  4.4. Solução padrão de açúcar invertido: Num balão aferido de 250 ml, dissolver 23,75 g de sacarose pura (4.5) em cerca de 120 ml de água. Juntar 9 ml de ácido clorídrico (S = 1,16) e deixar em repouso à temperatura ambiente durante oito dias. Perfazer  a solução até 250 ml e verificar a hidrólise por leitura no sacarímetro num tubo de 200 mm. Dever-se-á obter - 11,80 ± 0,05 ° S (ver ponto 8). Com a ajuda de uma pipeta, transferir 200 ml desta solução para um balão aferido de 2 000 ml. Diluir com a  água agitando sempre (para evitar uma alcalinidade local excessiva), juntar 71,4 ml de hidróxido de sódio 1 mol/l contendo 4 g de ácido benzóico (ver ponto 8).  Perfazer 2 000 ml para obter uma solução a 1 g/100 ml de açúcar invertido.  A solução deve apresentar um pH próximo de 3. Esta solução concentrada, estável, deve ser diluída imediatamente antes de ser utilizada.  4.5. Sacarose pura: amostra de sacarose pura com um teor em açúcar invertido inferior a 0,001 g/100 g.  5. Aparelhos e utensílios 5.1. Tubo de ensaio de 150 × 20 mm,  5.2. Cápsula de porcelana branca.  5.3. Balança analítica com uma precisão de 0,1 mg.  6. Técnica 6.1. Dissolver no tubo de ensaio (5.1) 5 g de açúcar a analisar em 5 ml de água. Juntar 2 ml do reagente de cobre (4.3) e misturar. Mergulhar o tubo num banho de água a ferver durante cinco minutos, arrefecer seguidamente em água fria.  6.2. Transferir quantitativamente para uma cápsula de evaporação (5.2), lavando o tubo de ensaio com alguns ml de água. Juntar 3 gotas do indicador (4.2) e titular com o auxílio de uma solução de EDTA (4.1). V0 é o volume em ml de EDTA utilizado na  titulação.  A solução verde para cinzento antes do ponto final e a púrpura no ponto final. A cor púrpura desaparece lentamente devido à oxidação do óxido de cobre (I) em óxido de cobre (II), a uma velocidade que depende da concentração do cobre reduzido presente. O  ponto final da titulação deve pois ser atingido rapidamente.  6.3. Traçar uma curva referência por adição de quantidades conhecidas de açúcar invertido (solução 4.4 diluída convenientemente) a 5 g de sacarose (4.5) e juntar água suficientemente fria de modo a que sejam adicionados 5 ml de água.  Representar os valores de titulação (em ml) em função da percentagem de açúcar invertido adicionado aos 5 g de sacarose: a curva resultante apresenta uma relação linear corresponde a 0,001 - 0,019 g de açúcar invertido, por 100 g de amostra.  7. Expressão dos resultados 7.1. Cálculo dos resultados Indicar na curva de referência a percentagem de açúcar invertido que corresponde ao valor de V0 ml de EDTA determinado na análise da amostra.  7.2. Para concentrações de açúcar invertido superiores a 0,017 g/100 na amostra a analisar, a dimensão da amostra colhida para aplicação da técnica (5.1) deve ser reduzida de modo adequado; perfazer, contudo, 5 g da amostra a analisar com sacarose pura  (4.5).  7.3. REPRODUTIBILIDADE A diferença entre os resultados de duas determinações paralelas, efectuadas simultaneamente nas mesmas condições pelo mesmo analista, relativas à mesma amostra, não deve ultrapassar 0,005 g para 100 g de amostra.  8. Observações Para a transformação em graus polarimétricos, dividir por 2,889 (tubo de precisão de 200 mm; fonte luminosa constituída por uma lâmpada de vapor de sódio; temperatura do local onde se encontra o aparelho, próxima de 20 ° C).  MÉTODO 6 DOSEAMENTO DOS AÇÚCARES REDUTORES EXPRESSOS EM AÇÚCAR INVERTIDO OU EM D-GLUCOSE (Método Luff-Schoorl) 1. Objectivo e âmbito de aplicação O método permite dosear:  1.1. O teor de açúcares redutores (expressos em açúcar invertido) no:  - açúcar líquido,  - açúcar branco líquido,  - açúcar líquido invertido,  - açúcar branco líquido invertido,  - xarope de açúcar invertido,  - xarope de açúcar branco invertido.  1.2. A D-glucose que, em relação à matéria seca, representa o equivalente em dextrose no:  - xarope de glucose,  - xarope de glucose desidratado.  1.3. A dextrose (D-glucose) na:  - dextrose monoidratada;  - dextrose anidra.  2. Definição Açúcares redutores expressos em açúcar invertido, D-glucose ou equivalente em dextrose: teor de açúcares redutores expresso em açúcar invertido, D-glucose ou equivalente em dextrose, e determinado pelo método a seguir descrito.  3. Princípio Os açúcares redutores da amostra (clarificada, se necessário) são aquecidos à ebulição em condições normalizadas, na presença de uma solução de cobre (II), que é parcialmente reduzida a cobre (I). O excesso de cobre (II) é doseado por iodometria.  4. Reagentes 4.1. Solução de Carrez I Dissolver em água 21,95 g de acetato de zinco diidratado Zn(CH3COO)22H2O ou 24 g de acetato de zinco triidratado Zn(CH3COO)23H2O e 3 ml de ácido acético glacial. Perfazer a 100 ml com água.  4.2. Solução de Carrez II Dissolver em água 10,6 g de hexacianoferrato II de potássio triidratado, K4 Fe (CN)6.3H2O. Perfazer a 100 ml com água.  4.3. Reagente segundo Luff-Schoorl Preparar os seguintes soluções:  4.3.1. Solução de sulfato de cobre (II): dissolver 25 g de sulfato de cobre (II) pentaidratado, CuSO4SH2O, isento de ferro, em 100 ml de água;  4.3.2. Solução de ácido cítrico: dissolver 50 g de ácido cítrico monoidratado, C6H8O7H2O em 50 ml de água;  4.3.3. Solução de carbonato de sódio: num balão aferido de 1 l dissolver 143,8 g de carbonato de sódio anidro em cerca de 300 ml de água quente. Deixar arrefecer.  4.3.4. Deitar, agitando cuidadosamente, a solução de ácido cítrico (4.3.2) na solução de carbonato de sódio (4.3.3). Agitar até ao desaparecimento do desprendimento gasoso. Juntar em seguida a solução de sulfato de cobre (II) (4.3.1) e perfazer a 1 000  ml com água. Deixar em repouso durante uma noite e filtrar, se necessário. Determinar a molaridade do reagente assim obtido de acordo com o ponto 6.1 (Cu 0,1 mol/l; Na2CO3 1 mol/l).  4.4. Solução de tiossulfato de sódio 0,1 mol/l.  4.5. Solução de amido: Juntar uma mistura de 5 g de amido solúvel em 30 ml de água a 1 l de água a ferver. Ferver durante 3 minutos, deixar arrefecer, juntar eventualmente 10 mg de iodeto de mercúrio (II) como agente conservante.  4.6. Ácido sulfúrico 3 mol/l.  4.7. Solução a 30 % (m/v) de iodeto de potássio.  4.8. Granulados de pedra-pomes fervidos em ácido clorídrico, lavados com água até ao desaparecimento da acidez e secos.  4.9. Isopentanol.  4.10. Hidróxido de sódio 0,1 mol/l.  4.11. Ácido clorídrico 0, mol/l.  4.12. Solução a 1 % (m/v) de fenolftaleína em etanol.  5. Aparelhos e utensílios 5.1. Frasco cónico de 300 ml munido de um condensador de refluxo.  5.2. Cronómetro.  6. Técnica 6.1. Controlo do reagente de Luff-Schoorl (4.3) 6.1.1. Juntar a 25 ml do reagente de Luff-Schoorl (4.3), 3 g de iodeto de potássio e 25 ml de ácido sulfúrico 3 mol/l (4.6). Titular com tiossulfato de sódio 0,1 mol/l (4.4) na presença da solução de amido (4.5) que se introduz perto do fim da  titulação. A quantidade de tiossulfato de sódio 0,1 mol/l utilizada deve ser 25 ml.  6.1.2. Num balão aferido de 100 ml, deitar 10 ml do reagente pipetado e perfazer até ao traço com água.  Misturar num frasco cónico 10 ml de reagente diluído com 25 ml, pipetados, de ácido clorídrico 0,1 mol/l (4.11) e aquecer durante uma hora em banho de água a ferver. Arrefecer, perfazer o volume inicial com água acabada de ferver e titular com hidróxido  de sódio 0,1 mol/l (4.10) na presença de fenolftaleína (4.12).  6.1.3. Titular com ácido clorídrico 0,1 mol/l (4.11), na presença de fenolftaleína (4.12), 10 ml de reagente diluído (6.12). A viragem é marcada pelo desaparecimento da cor violeta. A quantidade de ácido clorídrico 0,1 mol/l (4.10) utilizada deve ser de  6 a 7,5 ml.  6.1.4. O reagente de Luff-Schoorl deve ter um pH compreendido entre 9,3 e 9,4 a 20 ° C.  6.2. Preparação de solução 6.2.1. Pesar com precisão de 1 mg, 5 g da amostra e introduzi-la num balão aferido de 250 ml. Juntar 200 ml de água. Se necessário, clarificar juntando sucessivamente 5 ml de solução de Carrez I (4.1) e 5 ml de solução de Carrez II (4.2). Agitar após  cada adição. Perfazer 250 ml com água. Misturar. Filtrar, se necessário.  6.2.2. Diluir a solução 6.2.1 de modo a que 25 ml de solução contenham pelo menos 15 mg e no máximo 60 mg de açúcares redutores expressos em glucose.  6.3. Titulação segundo Luff-Schoorl Tomar com a pipeta 25 ml do reagente segundo Luff-Schoorl (4.3) e introduzir num frasco cónico de 300 ml (5.1), juntar dois granulados de pedra-pomes (4.8). Colocar de imediato o frasco cónico (5.1) munido de um condensador de refluxo sobre uma rede  metálica com uma placa de amianto munida de uma abertura correspondente ao diâmetro do fundo do frasco cónico. Levar o líquido à ebulição durante cerca de 2 minutos. A partir deste momento, ferver lentamente durante exactamente dez minutos. Arrefecer  imediatamente em água fria e após cerca de 5 minutos, titular como se segue:  Juntar 10 ml de solução de iodeto de potássio (4.7) e, imediatamente após e com cuidado (devido ao risco de formação de uma espuma abundante), 25 ml de ácido sulfúrico 3 mol/l (4.6). Titular em seguida com a solução de tiossulfato de sódio 0,1 mol/l  (4.4) até ao aparecimento de uma coloração amarela pálida, juntar alguns ml de solução de amido (4.5) e prosseguir a titulação até ao desaparecimento da coloração azul.  Efectuar um ensaio em branco, substituindo os 25 ml de solução açucarada (6.2.2) por 25 ml de água.  7. Expressão dos resultados 7.1. Cálculo dos resultados Estabelecer, com a ajuda da tabela a quantidade de glucose ou de açúcar invertido em mg, correspondente à diferença entre os valores das duas titulações, expressos em ml de tiossulfato de sódio 0,1 mol/l (efectuar a interpolação se necessário).  Exprimir o resultado em % (m/m) de açúcar invertido ou de D-glucose, em relação à matéria seca.  7.2. Reprodutibilidade A diferença entre os resultados de duas titulações paralelas, efectuadas simultaneamente nas mesmas condições, pelo mesmo analista, relativas à mesma amostra, não deve ultrapassar 0,2 ml.  8. Observação 8.1. Pode ser aconselhável juntar cerca de 1 ml de isopentanol (4.9) antes da acidificação com o ácido sulfúrico, a fim de evitar a formação de espuma.    Tabela de valores segundo Luff-Schoorl  "" ID="1">1> ID="2">2,4> ID="3""" ID="1">2> ID="2">4,8> ID="3">2,4"> ID="1">3> ID="2">7,2> ID="3">2,4"> ID="1">4> ID="2">9,7> ID="3">2,5"> ID="1">5> ID="2">12,2> ID="3">2,5"> ID="1">6> ID="2">14,7>  ID="3">2,5"> ID="1">7> ID="2">17,2> ID="3">2,5"> ID="1">8> ID="2">19,8> ID="3">2,6"> ID="1">9> ID="2">22,4> ID="3">2,6"> ID="1">10> ID="2">25,0> ID="3">2,6"> ID="1">11> ID="2">27,6> ID="3">2,6"> ID="1">12> ID="2">30,3> ID="3">2,7"> ID="1">13>  ID="2">33,0> ID="3">2,7"> ID="1">14> ID="2">35,7> ID="3">2,7"> ID="1">15> ID="2">38,5> ID="3">2,8"> ID="1">16> ID="2">41,3> ID="3">2,8"> ID="1">17> ID="2">44,2> ID="3">2,9"> ID="1">18> ID="2">47,1> ID="3">2,9"> ID="1">19> ID="2">50,0>  ID="3">2,9"> ID="1">20> ID="2">53,0> ID="3">3,0"> ID="1">21> ID="2">56,0> ID="3">3,0"> ID="1">22> ID="2">59,1> ID="3">3,1"> ID="1">23> ID="2">62,2> ID="3">3,1"> MÉTODO 7 DETERMINAÇÃO DOS AÇÚCARES REDUTORES EXPRESSOS EM AÇÚCAR INVERTIDO (Método a volume constante Lane e Eynon) 1. Objectivo e âmbito de aplicação Este método permite determinar os açúcares redutores, expressos em açúcares invertidos, no:  - açúcar líquido,  - açúcar branco líquido,  - açúcar líquido invertido,  - açúcar branco líquido invertido,  - xarope de açúcar invertido,  - xarope de açúcar branco invertido.  2. Definição Açúcares redutores expressos em açúcar invertido, teor de açúcares redutores tal como é determinado pelo método a seguir descrito.  3. Princípio A solução a analisar é titulada no ponto de ebulição a em relação a um volume determinado de licor de Fehling, servindo o azul de metileno como indicador.  4. Reagentes 4.1. Licor de Fehling 4.1.1. Solução A:  Dissolver 69,3 g de sulfato de cobre (II) pentaidratado (CuSO4.5H2O) em água e perfazer 1 000 ml com água.  4.1.2. Solução B:  Dissolver 346 g de tartarato duplo de sódio e de potássio tetraidratado (KNaC4H4O64H2O) com 100 g de hidróxido de sódio em água e perfaze 1 000 ml com água.  Decantar a solução límpida de qualquer sedimento que se possa formar.  Nota bene: Conservar as duas soluções em frascos castanhos ou amarelos.  4.2. Hidróxido de sódio 1 mol/l 4.3. Solução padrão de açúcar invertido: num balão aferido de 250 ml, dissolver 23,75 g de sacarose pura em cerca de 120 ml de água, juntar 9 ml de ácido clorídrico (l = 1,16) e deixar em repouso à temperatura ambiente durante oito dias. Perfazer 250 ml  da solução e verificar a hidrólise por leitura no sacarímetro num tubo de 200 mm. Dever-se-á obter - 11,80 ° ± 0,05 ° S (ver ponto 8). Com a ajuda de uma pipeta, transferir 200 ml desta solução para um balão aferido de 2 000 ml. Diluir com água agitando  sempre (para evitar uma alcalinidade local excessiva). Juntar 71,4 ml de hidróxido de sódio 1 mol/l (4.2) contendo 4 g de ácido benzóico (ver ponto 8).  Perfazer 2 000 ml a fim de obter uma solução a 1 g/100 ml de açúcar invertido. A solução deve apresentar um pH próximo de 3. Esta solução concentrada e estável, deve ser diluída imediatamente antes de ser utilizada.  Para obter uma solução de açúcar invertido a 0,25 g/100 ml encher até à marca um balão aferido de 250 ml com a solução de açúcar invertido a 1 g/100 ml a 20 ° C. Lavar este balão deitando a solução num balão aferido de 1 000 ml e diluir até ao traço com  água, de novo a 20 ° C.  4.4. Solução de azul de metileno a 1 g/100 ml.  5. Aparelhos e utensílios 5.1. Balão de boca estreita, 500 ml.  5.2. Bureta de 50 ml, com torneira, graduada em 0,05 ml.  5.3. Pipetas aferidas de 20,25 e 50 ml.  5.4. Balões aferidos marcados de 250, 1 000 e 2 000 ml.  5.5. Dispositivo de aquecimento nas condições descritas no ponto 6.1 e de observação da viragem da cor no ponto final sem necessitar retirar o balão (5.1) da fonte de calor.  5.6. Cronómetro indicando o tempo ao segundo, pelo menos.  6. Técnica 6.1. Aferição do licor de Fehling 6.1.1. Deitar por ordem, com a ajuda de pipeta (5.3), 50 ml da solução B (4.1.2) e 50 ml da solução A (4.1.1) num copo limpo e seco. Misturar bem.  6.1.2. Lavar a bureta e enchê-la com a solução-padrão de açúcar invertido a 0,25 g/100 ml (4.3).  6.1.3. Deitar com uma pipeta uma alíquoto de 20 ml da mistura das soluções A e B (6.1.1) num balão de 500 ml (5.1). Adicionar 15 ml de água no balão. Deitar 39 ml da solução de açúcar invertido, contida na bureta, juntar uma pequena quantidade de grãos  de pedra-pomes e misturar o conteúdo do balão, mexendo suavemente.  6.1.4. Levar à ebulição o balão e o seu conteúdo e deixar ferver exactamente durante 2 minutos; o balão não deve ser retirado da fonte de aquecimento durante toda a operação, nem deve parar de ferver.  Juntar três ou quatro gotas de solução de azul de metileno (4.4) no final dos 2 minutos de ebulição: a solução deve ter uma cor azul definida.  6.1.5. Prosseguir a aferição deitando da bureta a solução-padrão de açúcar invertido, em pequenas quantidades, a princípio 0,2 ml, depois 0,1 ml e por fim simples gotas, até que o ponto final seja atingido, isto é, até ao desaparecimento da cor azul  dada pelo azul de metileno. A solução deve então tomar a cor avermelhada associada a uma suspensão de óxido de cobre (I).  6.1.6. O ponto final deve ser atingido ao fim de 3 minutos após o início da ebulição da solução. O título final V0 deve situar-se entre 39 e 41 ml. Se V0 ultrapassar estes limites, ajustar a concentração de cobre da solução A (4.1.1) e repetir o  processo de aferição.  6.2. Preparação das soluções a analisar A solução a analisar deve ser concentrada de modo a conter entre 250 e 400 mg de açúcar invertido por 100 ml.  6.3. Ensaio preliminar 6.3.1. Deve ser efectuado um ensaio preliminar a fim de que a quantidade de água a juntar aos 20 ml da mistura das soluções A e B seja suficiente para garantir a obtenção de um volume final de 75 ml após titulação.  O processo é o mesmo que o descrito no ponto 6.1.4, excepto o facto de se utilizar a solução a analisar em vez da solução-padrão de açúcar invertido. Deitar da bureta para um balão, 25 ml da solução a analisar, juntar 15 ml de água e levar a solução à  ebulição durante exactamente 2 minutos, titular depois até que seja atingido o ponto final como descrito no ponto 6.1.5.  6.3.2. Depois da adição da solução de azul de metileno, se a cor avermelhada persistir, a solução a analisar está muito concentrada. Neste caso, abandonar o ensaio e recomeçar um outro ensaio com uma solução menos concentrada.  Se forem necessários mais de 50 ml de solução a analisar, para obter a cor avermelhada, é conveniente utilizar uma solução mais concentrada.  Calcular a quantidade de água a juntar subtraindo de 75 ml os volumes do licor de Fehling (20 ml) e da solução a analisar.  6.4. Análise da solução 6.4.1. Deitar para um balão, 20 ml de licor de Fehling com a ajuda de uma pipeta e uma quantidade de água determinada de acordo com o ponto 6.3.  6.4.2. Juntar com a ajuda de uma bureta o título observado da solução da amostra (como determinado no ponto 6.3) menos 1 ml.  Juntar alguns grãos de pedra pomes, misturar o conteúdo do balão, mexendo, levar à ebulição e titular como descrito no ponto 6.3. O ponto final deve ser atingido cerca de um minuto após a adição de azul de metileno.  Título final = V1.  7. Expressão dos resultados 7.1. Fórmula e modo de cálculo O teor de açúcares redutores da solução da amostra, calculado em açúcar invertido, é dado pela fórmula seguinte:  % de açúcares redutores (expressos em açúcar invertido) =  em que:  C = concentração da solução da amostra em g por 100 ml,  V0 = volume, em ml, da solução titulada de açúcares invertidos, usada na aferição,  V1 = volume em ml da solução da amostra utilizada para a análise precisa descrita no ponto 6.4.2,  f = factor de correcção utilizado para ter em conta a concentração de sacarose da solução da amostra. Os valores são indicados no quadro seguinte.   "" ID="1">0> ID="2">1,000"> ID="1">0,5> ID="2">0,982"> ID="1">1,0> ID="2">0,971"> ID="1">1,5> ID="2">0,962"> ID="1">2,0> ID="2">0,954"> ID="1">2,5> ID="2">0,946"> ID="1">3,0> ID="2">0,939"> ID="1">3,5> ID="2">0,932"> ID="1">4,0>  ID="2">0,926"> ID="1">4,5> ID="2">0,920"> ID="1">5,0> ID="2">0,915"> ID="1">5,5> ID="2">0,910"> ID="1">6,0> ID="2">0,904"> ID="1">6,5> ID="2">0,898"> ID="1">7,0> ID="2">0,893"> ID="1">7,5> ID="2">0,888"> ID="1">8,0> ID="2">0,883"> ID="1">8,5>  ID="2">0,878"> ID="1">9,0> ID="2">0,874"> ID="1">9,5> ID="2">0,869"> ID="1">10,0> ID="2">0,864"> As correcções para os diferentes teores de sacarose da solução da amostra podem ser calculados por interpolação a partir do quadro.  Nota bene: A concentração aproximada de sacarose pode ser calculada subtraindo a concentração dos sólidos dissolvidos devido ao açúcar invertido (estimando, para fins deste cálculo, que f = 1) à concentração total em sólidos dissolvidos, expressa em  sacarose, e deduzida do índice de refracção da solução, recorrendo ao método 3.  7.2. Reprodutibilidade A diferença entre os resultados de duas determinações paralelas, efectuadas simultaneamente, nas mesmas condições pelo mesmo analista, relativas à mesma amostra, não deve ultrapassar 1 % da sua média aritmética.  8. Observação Para a transformação em graus polarimétricos, dividir por 2,889 (tubo de precisão 200 mm; fonte luminosa constituída por uma lâmpada de vapor de sódio; temperatura do local onde se encontra o aparelho, próxima de 20 ° C).  MÉTODO 8 DETERMINAÇÃO DO EQUIVALENTE EM DEXTROSE (Método a titulação constante Lane-Eynon) 1. Objectivo e âmbito de aplicação Este método permite determinar o equivalente em dextrose:  - do xarope de glucose,  - do xarope de glucose desidratada,  - da dextrose monoidratada,  - da dextrose anidra.  2. Definição 2.1. Poder redutor: teor de açúcares redutores, determinado pelo método prescrito, expresso em dextrose anidra (D-glucose) e calculado em % (m/m) da amostra.  2.2. Equivalente em dextrose: poder redutor, calculado em % (m/m) em relação à matéria seca.  3. Princípio A solução a analisar é titulada no ponto de ebulição em relação a um volume determinado de licor de Fehling em condições bem definidas, utilizando o azul de metileno como indicador.  4. Reagentes 4.1. Licor de Fehling 4.1.1. Solução A:  Dissolver 69,3 g de sulfato de cobre (II) pentaidratado (CuSO4.5H2O) em água e perfazer 1 000 ml com água.  4.1.2. Solução B:  Dissolver 346 g de tartarato duplo de sódio e potássio tetraidratado (KNaC4H45764H2O) com 100 g de hidróxido de sódio em água e perfazer 1 000 ml com água. Decantar a solução límpida de qualquer sedimento que se possa formar.  Nota bene: Conservar estas duas soluções (4.1.1 e 4.1.2) em frascos castanhos ou amarelos.  4.1.3. Preparação do licor de Fehling Deitar nesta ordem, com a ajuda da pipeta (5.3), 50 ml da solução B (4.1.2) e 50 ml da solução A num copo limpo e seco. Misturar bem.  Nota bene: Não conservar o licor de Fehling. Fazer uma preparação extemporânea em cada dia de utilização, aferindo-a de acordo com o ponto 6.1.  4.2. Dextrose anidra de referência (D-glucose) (C6H12O6) Secar o produto numa estufa de vácuo durante 4 horas a 100 ± 1 ° C pelo menos e à pressão de cerca de 10 kPa (103 mbar).  4.3. Solução padrão de dextrose a 0,060 g/100 ml Pesar com precisão de 0,1 mg, 0,6 g de dextrose anidra (4.2), dissolvê-la na água; transferir a solução para um balão aferido de 100 ml (5.4). Perfazer até ao traço e misturar.  Renovar esta solução em cada dia que se utilizar.  4.4. Solução de azul de metileno a 0,1 g/100 ml Dissolver 0,1 g de azul de metileno em 100 ml de água.  5. Aparelhos e utensílios 5.1. Balão de boca estreita de 250 ml.  5.2. Bureta em ângulo recto, de 50 ml, com torneira, graduada em 0,05 ml.  5.3. Pipetas aferidas de 25 ml e 50 ml.  5.4. Balões aferidos de 100 ml e 500 ml com um traço.  5.5. Um dispositivo de aquecimento, permitindo manter a ebulição nas condições descritas no ponto 6.1 e observar a viragem da cor no ponto final sem necessitar de retirar o balão (5.1) da fonte de calor (6.1, nota 3).  5.6. Cronómetro indicando o tempo ao segundo pelo menos 6. Técnica 6.1. Aferição do licor de Fehling 6.1.1. Pipetar 25 ml de licor de Fehling (4.1.3) para um balão de boca estreita, seco e limpo (5.1).  6.1.2. Encher a bureta (5.2) com a solução-padrão de dextrose (4.3).  6.1.3. Deitar no balão (5.1) 18 ml da solução-padrão de dextrose (4.3). Agitar o balão para misturar bem o conteúdo.  6.1.4. Colocar o balão sobre o dispositivo de aquecimento (5.3) previamente regulado de modo a que a ebulição comece ao fim de 120 ± 15 segundos.  O dispositivo de aquecimento não deve ser regulado durante a operação de titulação (ver nota 1).  6.1.5. Quando a ebulição começar, destravar o cronómetro a partir do zero.  6.1.6. Ferver o conteúdo do balão durante 120 segundos controlados por cronómetro. Juntar 1 ml de solução de azul de metileno (4.4) próximo do final deste período.  6.1.7. Após uma ebulição de 120 segundos (controlada por cronómetro), começar a juntar a solução-padrão de dextrose, da bureta graduada (6.1.2) para o balão (5.1) em quantidades de 0,5 ml, até que a cor do azul de metileno desapareça (ver notas 2 e 3).   Tomar nota do volume total de solução-padrão de dextrose adicionada, incluindo a penúltima adição de 0,5 ml (X ml).  6.1.8. Repetir as operações 6.1.1. e 6.1.2.  6.1.9. Deitar, da bureta graduada para o balão (5.1), uma quantidade de solução-padrão de dextrose igual a (X-0,3) ml.  6.1.10. Repetir as operações 6.1.4, 6.1.5 e 6.1.6.  6.1.11. Após uma ebulição de 120 segundos (controlada por cronómetro), começar a juntar a solução-padrão de dextrose, da bureta graduada para o balão (5.1); inicialmente em quantidades de 0,2 ml e por fim gota a gota, até que a cor do azul de metileno  tenha desaparecido.  Perto do final desta operação, o intervalo de tempo entre as adições sucessivas de solução-padrão de dextrose deve ser de 10 a 15 segundos.  Estas adições devem ser concluídas em 60 segundos, isto é, o tempo total de ebulição não deve ultrapassar 180 segundos.  Pode ser necessário proceder a uma terceira titulação com uma adição inicial de solução-padrão de dextros (6.1.9) que seja ligeiramente superior e convenientemente ajustada para obter o resultado pretendido.  6.1.12. Tomar nota do volume (V0 em ml) da solução-padrão de dextrose utilizada até ao ponto final da titulação (ver nota 4).  6.1.13. V0 deve estar compreendido entre 19 e 21 ml de solução-padrão de dextrose (4.3). Se V0 ultrapassar estes limites, ajustar convenientemente a concentração da solução A (4.1.1) e repetir a operação de titulação.  6.1.14. Para a titulação quotidiana do licor de Fehling, dado que V0 é conhecido com precisão, é necessária uma única titulação com uma adição inicial de (V0-0,5) ml de solução-padrão de dextrose.  Nota 1: É necessário, quando a ebulição tiver começado, que o desprendimento de vapor seja vivo e contínuo durante todo o processo de titulação, o que permitirá evitar, tanto quanto possível, a entrada de ar no balão de titulação, que teria por  consequência a reoxidação do seu conteúdo.  Nota 2: O desaparecimento da cor do azul de metileno é mais facilmente observável olhando as camadas superiores e o menisco do conteúdo do balão de titulação, que estão relativamente isentos do precipitado de óxido de cobre (I) vermelho. O  desaparecimento da cor é mais vísivel à luz indirecta. É útil colocar um fundo branco atrás do balão de titulação.  Nota 3: A bureta graduada deve estar tanto quanto possível isolada da fonte de calor durante o doseamento.  Nota 4: Dado que é sempre necessário ter em conta o factor individual, cada operador deve efectuar a sua própria titulação de normalização e utilizar o seu próprio valor de V0 para os calculos (7.1).  6.2. Exame preliminar da amostra 6.2.1. A menos que o poder redutor (2.1) da amostra seja conhecido aproximadamente, efectuar um exame preliminar com o objectivo de obter o seu valor aproximado de modo a que a massa da amostra a analisar (6.3) possa ser calculada.  Este exame efectua-se como se segue:  6.2.2. Preparar uma solução de Z % (m/v) da amostra, tendo «Z» um valor estimado.  6.2.3. Ver 6.1.2, utilizar a solução da amostra (6.2.2) em vez da solução titulada de dextrose.  6.2.4. Ver 6.1.1.  6.2.5. Ver 6.1.3. Utilizar 10 ml da solução da amostra em vez de 18 ml de solução-padrão de dextrose.  6.2.6. Ver 6.1.4.  6.2.7. Levar à ebulição o conteúdo do balão. Adicionar 1 ml de solução de azul de metileno (4.4).  6.2.8. Logo que a ebulição tiver início, destravar o cronómetro (5.6) a partir do zero e começar a juntar de 10 em 10 segundos, 1 ml da solução da amostra da bureta para o balão, até que a cor do azul de metileno desapareça.  Tomar nota do volume total da solução da amostra adicionado, incluindo a penúltima adição (Y ml).  6.2.9. «Y» não deve exceder 50 ml. No caso de exceder, aumentar a concentração da solução da amostra e repetir a titulação.  6.2.10. O poder redutor aproximado da amostra preparada, em percentagem da massa, é dado pela fórmula:  6.3. Amostra a analisar Pesar com precisão de 0,1 mg, uma quantidade da amostra (M g) que contenha entre 2,85 g e 3,15 g de açúcares redutores expressos em dextrose anidra (D-glucose), utilizando para o cálculo, quer o valor aproximado conhecido que diz respeito ao poder  redutor (2.1), quer o valor aproximado obtido no ponto 6.2.10.  6.4. Solução a analisar Dissolver em água a quantidade da amostra (M g) a analisar e perfazer 500 ml com água.  6.5. Determinação 6.5.1. Ver 6.1.1.  6.5.2. Encher a bureta (5.2) com a soluça analisar (6.4).  6.5.3. Deitar da bureta para o balão, 18,5 ml da solução a analisar. Agitar o balão a fim de misturar o conteúdo.  6.5.4. Ver 6.1.4.  6.5.5. Ver 6.1.5.  6.5.6. Ver 6.1.6.  6.5.7. Ver 6.1.7; utilizar a solução a analisar em vez da solução-padrão de dextrose.  6.5.8. Ver 6.1.8.  6.5.9. Ver 6.1.9; utilizar a solução a analisar em vez da solução-padrão de dextrose.  6.5.10. Ver 6.1.10.  6.5.11. Ver 6.1.11; utilizar a solução a analisar em vez da solução-padrão de dextrose.  6.5.12. Tomar nota do volume (V1) da solução a analisar utilizado até ao ponto final da titulação.  6.5.13. V1 deve estar compreendido entre 19 e 21 ml da solução a analisar. Se V1 exceder os limites, ajustar como for conveniente a concentração da solução a analisar e repetir de 6.5.1. a 6.5.12.  6.5.14. Efectuar dois doseamentos com a mesma solução a analisar.  6.6. Teor da matéria seca Determinar o teor da matéria seca da amostra utilizando o método 2.  7. Expressão dos resultados 7.1. Fórmulas e cálculo dos resultados 7.1.1. Poder redutor:  O poder redutor, calculado em percentagem em relação à massa da amostra, é dado pela fórmula:   em que:  V0 = volume, em ml, da solução-padrão de dextrose (4.3) utilizada na titulação de aferção (6.1),  V1 = volume, em ml, da solução a analisar (6.4) utilizado na titulação de determinação (6.5),  M = massa em g, da amostra a analisar (6.3) utilizada para obter 500 ml de solução a analisar.  7.1.2. Equivalente em dextrose:  O equivalente em dextrose, calculado em percentagem em relação à massa da matéria seca da amostra é dado pela fórmula:   em que:  PR = poder redutor calculado em percentagem em relação à massa da amostra (7.1.1),  D = teor da matéria seca da amostra preparada em percentagem por massa.  7.1.3. Tomar como resultado a média aritmética de dois doseamentos na condição de estarem preenchidas as exigências respeitantes à reprodutibilidade (7.2.) 7.2. Reprodutibilidade A diferença entre os resultados de duas determinações paralelas, efectuadas simultaneamente nas mesmas condições pelo mesmo analista, relativas à mesma amostra, não deve ultrapassar 1 % da sua média aritmética.  MÉTODO 9 DETERMINAÇÃO DAS CINZAS SULFATADAS 1. Objectivo e âmbito de aplicação O método permite determinar o teor de cinzas:  - do xarope de glucose,  - do xarope de glucose desidratado,  - da dextrose monoidratada,  - da dextrose anidra.  2. Definição O teor de cinzas sulfatadas é obtido pela aplicação do método a seguir descrito.  3. Princípio A massa residual da amostra é determinada em meio oxidante após incineração a 525 ° C, na presença de ácido sulfúrico e é expressa em percentagem da massa.  4. Reagentes 4.1. Ácido sulfúrico diluído: juntar lentamente e com precaução, 100 ml de H2SO4 concentrado [massa volúmica 20 = 1,84 g/ml; 96 % (m/m)] a 300 ml de água.  5. Aparelhos e utensílios 5.1. Forno eléctrico de mufla, munido de um pirómetro e susceptível de funcionar à temperatura de 525 ± 25 ° C.  5.2. Balança analítica com precisão de 0,1 mg.  5.3. Cadinhos de incineração em platina ou quartzo, de volume adequado.  5.4. Exsicador com sílica gel recentemente activada ou com um agente desidratante equivalente e munido de um indicador de humidade.  6. Técnica Pesar, com precisão de 0,1 mg, 5 g de xarope de glucose ou de xarope de glucose desidratado ou cerca de 10 g de dextrose monoidratada ou anidra num cadinho de incineração (5.3), previamente levado à temperatura de incineração, seguidamente arrefecido e  tarado.  Juntar 5 ml de solução de ácido sulfúrico (4.1) (8.1). Aquecer com cuidado o cadinho que contém a amostra à chama ou sobre uma placa de aquecimento até à carbonização completa. Durante a carbonização, inflamar os vapores da amostra (8.2).  Colocar então o cadinho de incineração (5.3) no forno de mufla (5.1) à temperatura de 525 ± 25 ° C até obtenção de cinzas brancas, o que geralmente pode ser obtido em 2 horas (8.3).  Deixar arrefecer a amostra cerca de 30 minutos no exsicador (5.4) e pesar.  7. Expressão dos resultados 7.1. Fórmula e modo de cálculo O teor de cinza sulfatada expressa em percentagem da massa da amostra a analisar é igual a:  S =  × 100 em que:  m0 = massa inicial, em g, da toma de ensaio,  m1 = massa em g, de cinzas sulfatadas.  7.2. Reprodutibilidade A diferença entre os resultados de duas determinações paralelas, efectuadas simultâneamente nas mesmas condições pelo mesmo analista, relativas à mesma amostra, não deve ultrapassar 2 % do teor de cinza em valor relativo.  8. Observações 8.1. A fim de evitar uma formação excessiva de espuma, juntar ácido sulfúrico em pequenas quantidades.  8.2. Devem ser tomadas todas as precauções necessárias durante a primeira carbonização para evitar as perdas da amostra e das cinzas, na sequência de uma dilatação muito forte da massa.  8.3. Se a amostra for difícil de carbonizar, o cadinho pode ser retirado do forno de mufla e o resíduo humidificado depois de arrefecido com algumas gotas de água antes de o colocar de novo na mufla.  MÉTODO 10 DETERMINAÇÃO DA POLARIZAÇÃO 1. Objectivo e âmbito de aplicação O método permite determinar a polarização:  - do açúcar semibranco - do açúcar ou açúcar branco,  - do açúcar branco extra.  2. Definição A polarização é a rotação do plano da luz polarizada por uma solução de 26 g de açúcar em 100 ml contida num tubo de 200 mm de comprimento.  3. Princípio A polarização é determinada num sacarímetro ou polarímetro de acordo com as condições do método a seguir descrito.  4. Reagentes 4.1. Agente clarificante: solução de acetato básico de chumbo.  Juntar 560 g de acetato básico de chumbo seco a cerca de 1 000 ml de água recentemente fervida.  Ferver durante 30 minutos e deixar em repouso aproximadamente uma noite.  Decantar a camada superior e diluir com água recentemente fervida de modo a obter uma solução com uma massa volúmica de cerca de 1,25 (massa volúmica 20 = 1,25 g/ml). Conservar esta solução ao abrigo do ar.  4.2. Éter dietílico 5. Aparelhos e utensílios 5.1. Sacarímetro graduado para um peso de 26 g de sacarose ou polarímetro Este aparelho deve ser instalado num local onde a temperatura seja próxima de 20 ° e ter sido aferido com placas-padrão de quartzo.  5.2. Fonte luminosa constituída por uma lâmpada de vapor de sódio.  5.3. Tubos de precisão para polarímetro com 200 mm de comprimento que não devem apresentar um erro que exceda ± 0,02 mm.  5.4. Balança analítica, com precisão de 0,1 mg.  5.5. Balões aferidos de 100 ml calibrados individualmente. Os balões cuja capacidade real se situe no intervalo de 100 ± 0,01 ml podem ser utilizados sem correcção. Os balões cuja capacidade se situe fora destes limites devem ser utilizados com uma  correcção adequada para ajustar o volume a 100 ml.  5.6. Banho de água com termóstato regulável a 20 ± 0,1 ° C.  6. Técnica 6.1. Preparação da solução Pesar o mais rapidamente possível 26 g ± 0,002 g da amostra a analisar e introduzir quantitativamente num balão aferido de 100 ml (5.5), com a ajuda de cerca de 60 ml de água.  Dissolver por agitação e sem aquecer.  Quando for necessária uma clarificação, juntar 0,5 ml do reagente de acetato básico de chumbo (4.1).  Misturar a solução por rotação do balão e lavar as paredes do balão perfazendo o volume até cerca de 10 mm abaixo do traço de aferição.  Colocar o balão no banho de água, regulado a 20 ± 0,1 ° C (5.6) até à estabilização da temperatura da solução de açúcar.  Eliminar, se necessário, as bolhas formadas à superfície do líquido com uma gota de éter dietílico (4.2).  Perfazer até ao traço de aferição.  Misturar cuidadosamente, invertendo o balão pelo menos três vezes.  Deixar repousar o balão e o conteúdo durante 5 minutos.  6.2. Polarização Manter, para as operações seguintes, a temperatura a 20 ± 0,1 ° C.  6.2.1. Assegurar-se de que o aparelho está no ponto zero.  6.2.2. Filtrar a solução por papel de filtro. Eliminar os primeiros 10 ml do filtrado. Recolher em seguida 50 ml do filtrado.  6.2.3. Lavar o tubo polarimétrico, passando-o duas vezes com a solução 6.2.2.  Encher o tubo cuidadosamente com a solução de sacarose a analisar a 20 ± 0,1 ° C.  Eliminar todas as bolhas de ar no momento em que se coloca o obturador em posição.  Colocar o tubo cheio na calha do aparelho.  6.2.4. Ler a rotação com uma aproximação de 0,05 ° S (ou de 0,02 ° S graus polarimétricos) e efectuar cinco determinações. Fazer a média.  7. Expressão dos resultados 7.1. Fórmula e cálculo dos resultados Os resultados expressam-se em graus S com uma precisão de 0,1 ° S. A transformação dos graus polarimétricos em graus sacarimétricos faz-se recorrendo à fórmula:  grau S = grau de polarimétrico × 2,889 7.2. Reprodutibilidade A diferença entre os resultados de duas determinações paralelas, efectuadas simultaneamente, nas mesmas condições pelo mesmo analista, relativas à mesma amostra e representando cada uma a média de cinco leituras, não deve exceder 0,1 ° S.