Avviż Legali Importanti

|

32000L0045

Id-Direttiva tal-Kummissjoni 2000/45/KE tas-6 ta’ Lulju 2000 li tistabbilixxi l-metodi ta’ analiżi Komunitarji għad-determinazzjoni ta’ vitmina A, vitamina E u triptofan f’għalfTest b’rilevanza għaż-ŻEE

Official Journal L 174 , 13/07/2000 P. 0032 - 0050 CS.ES Chapter 3 Volume 30 P. 12  - 30 ET.ES Chapter 3 Volume 30 P. 12  - 30 HU.ES Chapter 3 Volume 30 P. 12  - 30 LT.ES Chapter 3 Volume 30 P. 12  - 30 LV.ES Chapter 3 Volume 30 P. 12  - 30 MT.ES Chapter 3 Volume 30 P. 12  - 30 PL.ES Chapter 3 Volume 30 P. 12  - 30 SK.ES Chapter 3 Volume 30 P. 12  - 30 SL.ES Chapter 3 Volume 30 P. 12  - 30

		Id-Direttiva tal-Kummissjoni 2000/45/KEtas-6 ta’ Lulju 2000li tistabbilixxi l-metodi ta’ analiżi Komunitarji għad-determinazzjoni ta’ vitmina A, vitamina E u triptofan f’għalf(Test b’rilevanza għaż-ŻEE)IL-KUMMISSJONI TAL-KOMUNITAJIET EWROPEJ,Wara li kkunsidrat it-Trattat li jistabbilixxi l-Komunitajiet Ewropej,Wara li kkunsidrat id-Direttiva tal-Kunsill 70/373/KEE ta’ l-20 ta’ Lulju 1970 fuq l-introduzzjoni tal-metodi ta’ teħid ta’ kampjuni u analiżi Komunitarji għal kontroll uffiċjali ta’ l-għalf [1], kif l-aħħar emendat bl-Att ta’ Adeżjoni ta’ l-Awstrija, l-Finlandja u l-Isvezja [2], u partikolarment l-Artikolu 2 tagħhomBilli:(1) Id-Direttiva 70/373/KEE tisptipula li l-kontrolli uffiċjali ta’ l-għalf għal l-iskopijiet ta’ qbil ta’ kontroll mal-ħtiġijiet li skond il-liġijiet, regolamenti u dispożizzjonijiet amministrativi li jikkontrollaw il-kwalitá u kompożizzjoni tagħhom li jridu jsiru bl-użu tal-metodi Komunitarji ta’ teħid ta’ kampjuni u analiżi(2) Id-Direttiva tal-Kunsill 70/524/KEE tat-23 ta’ Novembru ta’ l-1970 dwar addittivi fl-għalf [3], kif emendat l-aħħar mir-Regolament tal-Kummissjoni (KE) Nru 2439/1999 tas-17 ta’ Novembru 1999 [4] li tistipula li l-kontenut ta’ vitamina A u vitamina E irid ikun indikat fuq it-tikkettjar fejn dawn is-sustanzi huma miżjuda għal taħlitiet minn qabel u l-għalf.(3) Id-Direttiva tal-Kunsill 79/373/KEE tat-2 ta’ April 1979 fuq marketing ta’ taħlit ta’ għalf [5] kif l-aħħar emendat mid-Direttiva tal-Kummissjoni 2000/16/KE [6] u d-Direttiva tal-Kunsill 93/74/KEE tat-13 ta’ Settembru 1993 fuq għalf maħsub għal skopijiet nutrizzjonali partikolari [7], kif l-aħħar emendat mid- Direttiva 96/25/KE [8], li tistipula li aċidi amino se jiġu stipulati fit-tikkettjar ta’ l-għalf.(4) Metodi ta’ analiżi Komunitarji jridu jiġu stabbiliti għal kontroll ta’ dawn is-sustanzi.(5) Il-miżuri provduti f’din id-Direttiva huma bi qbil ma’ l-opinjoni tal-Kumitat Permanenti għal Għalf,ADOTTAT DIN ID-DIRETTIVAArtikolu 1L-Istati Membri jridu jistipulaw li analiżi kontrollati bi skop ta’ kontrolli uffiċjali tal-kontenut ta’ vitamina A, vitamina E u triptofan ta’ għalf u taħlit minn qabel isiru bl-użu tal-metodu stipulat fl-Anness għalihom.Artikolu 2l-Istati Membri għandhom idaħħlu fis-seħħ, mhux aktar tard mill-31 t’Awissu 2000, il-liġijiet, regolamenti jew dispożizzjonijiet amministrativi neċessarji biex jaqblu mad-dispożizzjonijiet ta’ din id-Direttiva.Meta l-Istati Membri jadottaw dawn il-miżuri, dawn għandhom ikollhom riferenza għal din id-Direttiva jew għandhom ikunu akkumpanjati b’riferenza waqt il-pubblikazzjoni uffiċċjali tagħhom.Il-proċedura għal ċerta riferenza trid tiġi adottata mill-Istati Membri.Artikolu 3Din id-Direttiva għanda tidħol fis-seħħ fl-20 ġurnata wara l-pubblikazzjoni fil-Ġurnal Uffiċjali tal-Komunitajiet Ewropej.Artikolu 4Din id-Direttiva hija ndirizzata lill-Istati Membri.Magħmul fi Brussel, fis-6 ta’ Lulju 2000.Għall-KummissjoniDavid ByrneMembru tal-Kummissjoni[1] ĠU L 170, tat-3.8.1970, p. 2.[2] ĠU C 241, tad-29.8.1994, p. 1.[3] ĠU L 270, ta’ l-14.12.1970, p. 1.[4] ĠU L 297, tat-18.11.1999, p. 8.[5] ĠU L 86, tas-6.4.1979, p. 30.[6] ĠU L 105, tat-3.5.2000, p. 36.[7] ĠU L 237, tat-22.9.1993, p. 23.[8] ĠU L 125, tat-23.5.1996, p. 35.--------------------------------------------------L-ANNESSPARTI A DETERMINAZZJONI TAL-VITAMINA A1. Skop u għanIl-kontenut ta’ vitamina A huwa espress f’Unitajiet Internazzjonali (UI) kull kg. UI wieħed jikkorrispondi ma’ l-attivitá ta’ 0,300 μg ta’ alkoħol ta’ trans-vitamina A-kollu jew 0,344 μg aċetat ta’ trans-vitamina A-kollu jew 0,550 μg palmitat ta’ trans-vitamina A-kolluIl-limitu ta’ determinazzjoni huwa 2000 UI vitamina A/kg.2. PrinċipjuIl-kampjun huwa idrolizzat b’soluzzjoni idrossida ta’ potassju etanoliku u l-vitamina A hija estratta f’pitrolju ħafif. Is-solvent jitneħħa b’evaporazzjoni u r-residwu jiġi imdewweb f’metanoll u, jekk neċessaru, dilwit għal konċentrazzjoni meħtieġaIl-kontenut ta’ vitamina A huwa determinat b’eżekuzzjoni bil-kontra ta’ fażi għolja ta’ likwidu kromatografiku (EK-FGLK) bl-użu ta’ UV jew detettur florexxentiIl-parametri kromatografiċi huma magħżula sabiex ma jkunx hemm separazzjoni bejn l-alkohol ta’ trans-vitamina A u is-cis isomers tiegħu.3. Reaġenti3.1. Etanol, σ = 96 %3.2. Pitrolju ħafif, skala ta’ dbaqbieq 40 sa 60 °C3.3. Metanol3.4. ta’ idrossidu potassju, β = 50g/100 ml3.5. Soluzzjoni ta’ askorbat tas-sodju, β = 10 g/100 ml (ara 7.7 osservazzjonijiet)3.6. Sulfid tas-sodju, Na2S · x H2O (x = 7-9)3.6.1. Soluzzjoni ta’ sulfid tas-sodju, ċ = 0,5 mol/l in gliċerol, β = 120g/l (FORMA: x = 9) (ara 7.8 osservazzjonijiet)3.7. Soluzzjoni fenolftalejn, β = 2 g/100 ml fl-etanol (3.1)3.8. 2-Propanol3.9. Fażi mobbli għal HPLC taħlit ta’ metanol (3.3) u ilma, per eżempju 980 + 20 (v + v) L-iskala eżatta tiġi determinata mill-karatteristiċi tal-kolonna magħżulha.3.10. Nitroġenu, bla ossiġenu3.11. Aċetat-trans-vitamina A, extra pur, ta’ attivitá awtentikata, per eżempju 2,80 x 106 IU/g3.11.1. Soluzzjoni ta’ l-istock ta’ l-aċetat ta’ -trans-vitamina A-kolluLi tiżen viċin 0,1 mg, 50 mg ta’ aċetat ta’ vitamina A (3.11) ġo kunjett gradwad 100 ml. Dewweb f’2-propanol (3.8) u wassal sal-marka ma’ l-istess solvent. Il-konċentrazzjoni nominali ta’ din is-soluzzjoni hija 1400 UI vitamina A kull ml. Il-kontenut eżatt irid jiġi determinat akond il-5.6.3.1.3.12. Palmitat-trans-vitamina A, extra pur, ta’ attivitá awtentikata, per eżempju 1,80 x 106 UI/g3.12.1. Soluzzjoni ta’ stock tal-palmitat trans-vitamina A-kolluLi tiżen viċin 0,1 mg, 80 mg ta’ aċetat ta’ vitamina A (3.12) ġo kunjett gradwad 100 ml. Dewweb f’2-propanol (3.8) u wassal sal-marka ma’ l-istess solvent. Il-konċentrazzjoni nominali ta’ din is-soluzzjoni hija 1400 UI vitamina A kull mlIl-kontenut eżatt irid jiġi determinat akond il-5.6.3.2.3.13. 2,6-Di-tert-butyl-4-methylphenol (BHT) (ara 7.5 osservazzjonijiet)4. Apparat4.1. Evaporatur rotanti li jiġbed l-arja4.2. Oġġetti tal-ħġieġ għanbar4.2.1. Kunjetti konikali jew bil-qiegħ ċatt, 500 ml, bis-socket tal-ħġieġ matt fil-qiegħ4.2.2. Kunjetti gradwati bit-tappijiet tal-ground-glass, bl-għonq dejjaq, 10, 25, 100 u 500 ml4.2.3. Lembuti li jisseparaw, konikali, 1000 ml, bit-tappijiet tal-ground-glass4.2.4. Kunjetti bil-forma ta’ lanġasa, 250 ml, bis-sockets tal-ground-glass4.3. Kondensur allihn, tul tal-jacket ta’ 300 mm, bil-ġonta tal-ground-glass, bl-adapter għal pajp tal-gass4.4. Karta filtru ippjegata għal separazzjoni tal-fażi, dijametru 185 mm (p.e. Schleicher & Schuell 597 HY 1/2)4.5. Apparat HPLC bis-sistema ta’ injezzjoni4.5.1. Kolonna kromatografika likwida, 250 mm × 4 mm, Ċ18, 5 jew 10 μm pakkjar, jew ekwivalenti (kriterju ta’ eżekuzzjoni livell ta’ quċċata waħda biss għal kulliżomeru retinol fil-kundizzjonijiet-HPLC)4.5.2. Detettur UV jew florexxenti, b’aġġustament tal-wavelength varjabbli4.6. Spettrofotometru b’10 mm ta’ ċelli quartz4.7. Banju-ta’ l-ilma ma’ stirrer manjetiku4.8. Apparat ta’ estrazzjoni (ara l-figura 1) li jikkonsisti minn:4.8.1. Ċilindru tal-ħġieġ ta’ 1l kapaċitá iffitjat bl-għonq u tapp tal-ground glass4.8.2. Insert tal-ground glass magħmmar bis-side-arm u tubu aġġustabbli li jgħaddi min ġo n-nofs. It-tubu aġġustabbli jrid ikollu t-tarf il-baxx tiegħu fil-forma ta’ U u jet fit-tarf opposta sabiex is-saff tal-likiwdu ta’ fuq fiċ-ċilindru jista’ jiġi trasferit f’lembut li jissepara.5. ProċeduraNota:A hija sensitiva għad-dawl (UV) u għall-ossidazzjoni. L-operazzjoni trid issir fin-nuqqas ta’ dawl (bl-użu ta’ oġġetti tal-ħġieġ għanbar, jew oġġetti tal-ħġieġ protetti bil-folja/i ta’ l-aluminju) u ossiġenu (u flaxjat bin-nitroġenu). Matul l-estrazzjoni ta’ arja fuq il-likwidu trid tiġi mibdula b’nitroġenu (u tevita pressa eċċessiva billi tillaxka t-tapp minn ħin għall-ieħor).5.1. Preparazzjoni tal-kampjunIllima l-kampjun sabiex jgħaddi għarbiel imxebbek1 mm, b’attenzjoni li tiġi evitata l-ġenerazzjoni tas-sħanaIl-limar irid isir immedjatament qabel jintiżen u saponifikazzjoni inkella jista’ jkun hemm telf ta’ vitamina A.5.2. SaponifikazzjoniSkond il-kontenut tal-piż tal-vitamina A, sa’ l-eqreb 0,01 g, 2 g sa 25 g tal-kampjun f’kunjett ta’ 500 ml konikali jew bil-qiegħ ċatt (4.2.1). Żid suċċessivament bit-tidwir ta’ 130 ml etanol (3.1), bejn wieħed u ieħor 100 mg BHT (3.13), 2 ml soluzzjoni ta’ askorbat sodju (3.5) u 2 ml soluzzjoni ta’ sulfid sodju (3.6) ffitja kondensur (4.3) mall-kunjett u deffes il-kunjett fil-banju ta’ l-ilma bl-istirrer manjetiku (4.7). Saħħan sakem ibaqbaq u ħallieħ jirriflaksja għal ħames minuti, Imbagħad żid 25 ml soluzzjoni idrossida tal-potassju (3.4) minn ġol-kondensur (4.3) u ħalli jirriflaksja 25 minuta oħra, bl-istirring taħt tnixxija żgħira ta’ nitroġenu. Imbagħad laħlaħ il-kondensur b’xi 20 ml ta’ ilma u kessaħ il-kontenut tal-kunjett f’temperatura ambjentali.5.3. EstrazzjoniItrasferixxi b’tiswib is-soluzzjoni tas-saponifikazzjoni fi kwantitajiet bit-tlaħlieħ b’volum totali ta’ 250 ml ta’ ilma għall-lembut li jissepara ta’ 1000 ml (4.2.3) jew għall-apparat ta’ estrazzjoni (4.8). Laħlaħ il-kunjett tas-saponifikazzjoni suċċessivament b’25 ml etanol (3.1) u 100 ml pitrolju ħafif (3.2) u trasferixxi it-tlaħliħiet għal ġo lembut li jissepara għal ġo l-apparat ta’ l-estrazzjoniĦawwad sew għal żewġ minuti u ħallieh joqod għal żewġ minuti.5.3.1. Estrazzjoni bl-użu ta’ lembut li jissepara (4.2.3)Meta s-saffi ġew separati (ara osservazzjoni 7.3) trasferiment tas-saff tal-pitrolju ħafif għal lembut li jissepara ieħor (4.2.3). Irrepeti din l-estrazzjoni darbtejn, b’100 ml ta’ pitrolju ħafif (3.2) u darbtejn, b’ 50 ml ta’ pitrolju ħafif (3.2).Aħsel l-estratti magħquda fil-lembut li jissepara darbtejn billi iddawru bil-mod (biex tevita formazzjoni ta’ emulsjonijiet) b’porzjonijiet ta’ 100 ml ta’ ilma imbagħad ħawwad ripetittivament ma’ 100 ml porżjonijiet aktar sakemm l-ilma jibqa bla kulur fuq żidied ta’ soluzzjoni phenolphthalein (3.7) (bħala suffiċjenza tas-soltu aħsel erba’ darbiet). Iffiltra l-estratt maħsul minn ġo filtru ippjegat xott għal fażi ta’ separazzjoni (4.4) biex tneħħi xi ilma sospiż ġo kunjett gradwat ta’ 500 (4.2.2). Laħlaħ il-lembut ta’ separazzjoni u l-filtru b’ 50 ml ta’ pitrolju ħafif (3.2), imla sal-marka bil-pitrolju ħafif (3.2) u ħawwad sew.5.3.2. Estrazzjoni bl-użu ta’ apparat ta’ estrazzjoni (4.8)Meta s-saffi jisseparaw (ara osservazzjoni 7.3) biddel it-tapp taċ-ċilindru tal-ħġieġ (4.8.1) bl-insert tal-ground glass (4.8.2) u għamel fil-pożizzjoni it-tarf tisfel forma ta’ U tat-tubu aġġustabbli sakemm ikun eżatt fuq il-livell ta’ l-interface. Bl-applikazzjoni ta’ pressa minn linja nitroġena lis-side-arm, itrasferixxi s-saff ta’ fuq tal-pitrolju ħafif għal ġo lembut li jissepara ta’ 1000 ml (4.2.3). Żid 100 ml ta’ pitrolju ħafif (3.2) għal ġo ċ-ċilindru tal-ħġieġ, agħmel it-tapp u ħawwad sew. Ħalli is-saffi jisseparaw u ittrasferixxi s-saff ta’ fuq għal ġol-lembut li jissepara bħal qabel. Irrepeti l-proċedura ta’ estrazzjoni b’100 ml ta’ pitrolju ħafif (3.2), imbgħat irdoppja b’ 50 ml ta’ porzjonijiet ta’ pitrolju ħafif (3.2) u żid saffi ta’ pitrolu ħafif fil-lembut li jissepara.Aħsel l-estratti ta’ pitrolju ħafif imħallat kif deskritt f’ 5.3.1 u ipproċedi kif deskritt hawn.5.4. Preparazzjoni tas-soluzzjoni tal-kampjun għal HPLCIppipetta porzjoni alikwota tas-soluzzjoni tal-pitrolju ħafif (minn 5.3.1 jew 5.3.2) ġo kunjett bil-forma ta’ lanġasa ta’ 250 ml (4.2.4). Evapora s-solvent sakemm kważi jinxef fuq evaporatur rotanti (4.1) bi pressa imnaqqsa f’banju ta’ temperatura li ma teċċedix 40 °C. Aħżen mill-ġdid il-pressa atmosferika billi żżid nitroġenu (3.10) u neħħi il-kunjett mill-evaporatur rotanti. Neħħi is-solvent li fadal bi tnixxija ta’ nitroġenu (3.10) u dewweb ir-residwu immedjatament f’volum mgħaruf (10-100 ml) ta’ metanol (3.3) (il-konċentrazzjoni ta’ vitamina A trid tkun fl-iskala ta’ 5 UI/ml sa 30 UI/ml).5.5. Determinazzjoni permezz ta’ HPLCVitamina A hija separata fuq kolonna ta’ fażi bil-kontra Ċ18 (4.5.1) u l-konċentrazzjoni hija miżurata b’mezz ta’ detettur UV (325 nm) jew detettur florexxenti (eċitazzjoni: 325 nm, emissjoni: 475 nm) (4.5.2).Injetta porzjoni alikwota (p.e. 20 μl) ta’ soluzzjoni metanolika miksuba f’ 5.4 u elute bil-fażi mobbli (3.9). Ikkalkola l-għoli ta’ l-livell għoli (żona) ta’ bosta injezzjonijiet ta’ l-istess soluzzjoni tal-kampjun l-għoli tal-livell għoli (żona) ta’ bosta injezzjonijiet tas-soluzzjonijiet ta’ kalibrazzjoni (5.6.2).Kundizzjonijiet HPLCIl-kundizzjonijiet li jmiss huma offruti għal gwida; kundizzjonijiet oħra jistgħu jintużaw dment li jagħtu riżultati ekwivalenti.Kolonna kromografika likwida (4.5.1): | 250 mm x 4 mm, Ċ18, 5 jew 10 µm ippakjar, jew ekwivalenti |Fażi mobbli (3.9): | Taħlita ta' metanol (3.3) u ilma, p.e. 980 + 20 (v + v) |Rata ta' tnixxija: | 1-2 ml/min |Detettur (4.5.2): | Detettur UV (325 nm) jew detettur florexxenti (eċċitazzjoni: 325 nm/emissjoni: 475 nm) 475 nm) |5.6. Kalibrazzjoni5.6.1. Preparazzjoni ta’ soluzzjonijiet ta’ standard tax-xogħolIppipetta 20 ml ta’ soluzzjoni ta’ stock aċetat tal-vitamina A (3.11.1) jew 20 ml tas-soluzzjoni ta’ stock palmitat tal-vitamina A (3.12.1) ġo kunjett konikali jew tal-qiegħ ċatt li jesgħa 500 ml (4.2.1) u idrolizzah kif spjegat fil-5.2, imma mingħajr żieda ta’ BHT. Sussegwentament agħmel estrazzjoni bil-pitrolju ħafif (3.2) skond l-5.3 u imla sa 500 ml bil-pitrolju ħafif (3.2). Evapora 100 ml ta’ din l-estrazzjoni fuq evaporatur rotanti (ara 5.4) kważi xott, neħħi s-solvent li jifdal bi tnixxija ta’ nitroġenu (3.10) u erġa dewweb ir-residwi ġo 10,0 ml ta’ metanol (3.3). Il-konċentrazzjoni nominali ta’ din is-soluzzjoni hija 560 UI vitamina A kull mlIl-kontenut eżatt irid jiġi determinat akond il-5.6.3.3. Is-soluzzjoni standard tax-xogħol trid tkun preparata mill-ġdid qabel l-użu.Ippipetta 2,0 ml ta’ din is-soluzzjoni standard ta’ xogħol ġo kunjett gradwat ta’ 20 ml, imla sal-marka bil-metanol (3.3) u ħawwadIl-konċentrazzjoni nominali ta’ din is-soluzzjoni standard ta’ xogħol imħallta hija 56 UI vitamina A kull ml.5.6.2. Preparazzjoni tas-soluzzjonijiet ta’ kalibrazzjoni u l-grafika ta’ kalibrazzjoniIttrasferixxi 1,0, 2,0, 5,0 u 10,0 ml ta’ din is-soluzzjoni standard ta’ xogħol ġo serje ta’ kunjetti gradwati ta’ 20 ml, imla sal-marka bil-metanol (3.3) u ħawwadIl-konċentrazzjoni nominali ta’ dawn is-soluzzjonijiet huma 2,8 5,6, 14,0 u 28,0 UI vitamina A kull ml.Injetta 20 μl min kull soluzzjoni ta’ kalibrazzjoni għal bosta drabi u stabbilixxi l-għoli tal-livell l-għoli (żoni). Uża l-għoli tal-livell għoli (żoni) ipplottja grafika ta’ kalibrazzjoni li tikkonsidra ir-riżultati tal-kontroll UV (5.6.3.3).5.6.3. Standardizzazzjoni UV tas-soluzzjonijiet standard5.6.3.1. Soluzzjoni ta’ stock aċetat tal-vitamina AIppipetta 2,0 ml ta’ din is-soluzzjoni standard ta’ aċetat ta’ vitamina A (3.11.1) ġo kunjett gradwat (4.2.2) u imla sal-marka b’2-propanoli (3.8). Il-konċentrazzjoni nominali ta’ din is-soluzzjoni hija 56 UI vitamina A kull ml. Ippipetta 3,0 ml ta’ din is-soluzzjoni standard ta’ aċetat ta’ vitamina A ġo kunjett gradwat ta’ 25 ml u imla sal-marka b’2-propanoli (3.8). Il-konċentrazzjoni nominali ta’ din is-soluzzjoni hija 6,72 UI vitamina A kull ml. Kejjel l-ispektrum ta’ l-UV ta’ din is-soluzzjoni kontra 2-propanoli (3.8) fl-ispettrofotometru (4.6) bejn 300 nm u 400 nm. L-estinsjoni massima trid tkun bejn 325 nm u 327 nm.Kalkolazzjoni tal-kontenut tal-vitamina A:+++++ TIFF +++++5.6.3.2. Soluzzjoni ta’ stock palmitat ta’ vitamina AIppipetta 2,0 ml ta’ din is-soluzzjoni standard ta’ palmitat ta’ vitamina A (3.12.1) ġo kunjett gradwat ta’ 50 ml (4.2.2) u imla sal-marka b’2-propanoli (3.8). Il-konċentrazzjoni nominali ta’ din is-soluzzjoni hija 56 UI vitamina A kull ml. Ippipetta 3,0 ml ta’ din is-soluzzjoni standard ta’ palmitat ta’ vitamina A ġo kunjett gradwat ta’ 25 ml u imla sal-marka b’2-propanoli (3.8). Il-konċentrazzjoni nominali ta’ din is-soluzzjoni hija 6,72 UI vitamina A kull ml. Kejjel l-ispektrum ta’ l-UV ta’ din is-soluzzjoni kontra 2-propanoli (3.8) fl-ispettrofotometru (4.6) bejn 300 nm u 400 nm. L-estinsjoni massima trid tkun bejn 325 nm u 327 nm.Kalkolazzjoni tal-kontenut tal-vitamina A:+++++ TIFF +++++5.6.3.3. Soluzzjoni ta’ standard ta’ xogħol ta’ vitamina AIppipetta 3,0 ml tas-soluzzjoni standard ta’ vitamina A mhux imħallta, preparata skond 5.6.1 ġo kunjett gradwat ta’ 50 ml(4.2.2) u imla sal-marka b’2-propanoli (3.8). Ippipetta 5,0 ml ta’ din is-soluzzjoni ġo kunjett gradwat ta’ 25 ml u imla sal-marka b’2-propanoli (3.8). Il-konċentrazzjoni nominali ta’ din is-soluzzjoni hija 6,72 UI vitamina A kull ml. Kejjel l-ispektrum ta’ l-UV ta’ din is-soluzzjoni kontra 2-propanoli (3.8) fl-ispettrofotometru (4.6) bejn 300 nm u 400 nm. L-estinsjoni massima trid tkun bejn 325 nm u 327 nm.Kalkolazzjoni tal-kontenut tal-vitamina A:+++++ TIFF +++++6. Kalkolazzjoni tar-riżultatiMill-għoli maħsub (żona) tal-livelli l-għolja tal-vitamina A tas-soluzzjoni tal-kampjun li tiddetermina il-konċentrazzjoni tas-soluzzjoni tal-kampjun f’UI/ml b’referenza għal grafika ta’ kalibrazzjoni (5.6.2).Il-kontenut tal-vitamina A w f’UI/kg tal-kampjun tinagħta bil-formula li jmiss:w =500 . β . V. 1000V. mIU/kgta’ fejn:β = konċentrazzjoni tal-vitamina A tas-solizzujoni tal-kampjun (5.4) f’UI/mlV1 = volum ta’ soluzzjoni tal-kampjun (5.4) f’mlV2 = volum ta’ aliquot meħud f’ 5.4 f’mlm = massa ta’-porzjoni tat-test fi g7. Osservazzjonijiet7.1. Għal kampjuni b’konċentrazzjoni baxxa ta’ vitamina A huwa ta’ użu li tikkombina l-estratti ta’ pitrolju ħafif ta’ żewġ saponifikazzjonijiet-imposti (ammont peżat: 25 g) għal soluzzjoni waħda ta’ kampjun għal determinazzjoni -HPLC.7.2. Il-piż tal-kampjun meħud għall-analiżi ma jridx ikun fih aktar min 2 g xaħam.7.3. Jekk separazzjoni ta’ fażi mas-seħħx żid bejn wieħed u ieħor 10 ml etanol (3.1) biex tikser l-emulsjoni.7.4. Biż-żejt tal-fwied tal-bakkaljaw u xaħmijiet puri oħra il-ħin ta’ saponifikazzjoni jrid jiġi estiż għal 45-60 minuti.7.5. Hydroquinone jista’ jiġi użat minflok il-BHT.7.6. Bl-użu ta’ kolonna ta’ fażi normali s-separazzjoni ta’ iżomeri retinol huwa possibbli.7.7. Bejn wieħed u ieħor 150 mg ta’ aċidu assorbiku jista’ jintuża minflok soluzzjoni ta’ sodju askorbat.7.8. Bejn wieħed u ieħor 50 mg EDTA jista’ jintuża minflok soluzzjoni ta’ sulfide sodju.8. Abilitá ta’ ripetizzjoniId-differenza bejn ir-riżultati ta’ żewġ determinazzjonijiet paralelli isiru fuq l-istess kampjun ma jridx jeċċedi 15 % relativ għal riżultati aktar għolja.9. Riżultati ta’ studju kollaborattiv [1]L : numru ta' laboratorjin : numru ta' valuri waħedhomsr : devjazzjoni standard ta' abilitá ta' repetizzjonisR : Devjazzjoni standard ta' riproduzzjonabilitár : abilitá ta' repetizzjoniR : reproduċibilitáCVr : koeffiċjenti għal varjazzjoni ta' abilitá ta' repetizzjoniCVR : koeffiċjenti għal varjazzjoni ta' riproduttivitá| Taħlit min qabel Premix | Għalf imħallat min qabel | Konċentrat ta'mineral | Għalf ta' proteini | anżir żgħir |L | 13 | 12 | 13 | 12 | 13 |n | 48 | 45 | 47 | 46 | 49 |barley [UI/kg] | 17,02 × 106 | 1,21 × 106 | 537100 | 151800 | 18070 |sr [UI/kg] | 0,51 × 106 | 0,039 × 106 | 22080 | 12280 | 682 |r [UI/kg] | 1,43 × 106 | 0,109 × 106 | 61824 | 34384 | 1910 |ĊVr [%] | 3,0 | 3,5 | 4,1 | 8,1 | 3,8 |SR [UI/kg] | 1,36 × 106 | 0,069 × 106 | 46300 | 23060 | 3614 |>R [UI/kg] | 3,81 × 106 | 0,193 × 106 | 129640 | 64568 | 10119 |>ĊVR [%] | 8,0 | 6,2 | 8,6 | 15 | 20 |+++++ TIFF +++++PARTI B DETERMINAZZJONI TAL-VITAMINA E1. Skop u għanIl-kontenut ta’ vitamina E huwa espress bħala mg DL-α-tocopherol aċetat kull kg. 1 mg DL-α-tocopherol aċetat jikkorrispondi għal 0,91 mg DL-α- tocopherol (vitamina E).Il-limitu ta’ determinazzjoni huwa 2 mg vitamina E/kg.2. PrinċipjuIl-kampjun huwa idrolizzar b’soluzzjoni idrossida ta’ potassju etanoliku u l-vitamina E hija estratta f’pitrolju ħafif. Is-solvent jitneħħa b’evaporazzjoniu r-residwu jiġi imdewweb f’metanoll u, jekk neċessaru, imġallat għal konċentrazzjoni meħtieġa. Il-kontenut ta’ vitamina E huwa determinat b’eżekuzzjoni bil-kontra ta’ fażi għolja ta’ likwidu kromatografiku (EK-FGLK) bl-użu ta’ UV jew detettur florexxenti.3. Reaġenti3.1. Etanol, σ = 96 %3.2. Pitrolju ħafif, skala ta’ dbaqbieq 40 °C - 60 °C3.3. Metanol3.4. Sodju ta’ idrossidu potassju, β = 50 g/100 ml3.5. Soluzzjoni ta’ askorbat tas-sodju, β = 10 g/100 ml (ara 7.7 osservazzjonijiet)3.6. Sulfid tas-sodju, Na2S · x H2O (x = 7-9)3.6.1. Soluzzjoni ta’ sulfid tas-sodju, ċ = 0,5 mol/l in gliċerol, β = 120 g/l (għal x = 9) (ara 7.8 osservazzjonijiet)3.7. Soluzzjoni fenolftalejn, β = 2 g/100 ml fl-etanol (3.1)3.8. taħlit ta’ metanol (3.3) u ilma, per eżempju 980 + 20 (v + v). L-iskala eżatta tiġi determinata mill-karatteristiċi tal-kolonna użata.3.9. Nitroġenu, bla ossiġenu3.10. DL-α-tokoferol aċetat, pur iżżejjed, ta’ attivitá attestata3.10.1. Soluzzjoni ta’ stock ta’ l-aċetat tokoferol-DL-α-aċetatLi tiżen viċin 0,1 mg, 100 mg ta’ aċetat-tokoferol-DL-α (3.10) ġo kunjett gradwad ta’ 100 ml. Dewweb fl-etanol (3.1) u jsir sal-marka ma’ l-istess solvent. 1 ml ta’ din is-soluzzjoni fiha 1 mg aċtetat-tokoferol-DL-α. (Kontroll UV ara 5.6.1.3; stabilizzazzjoni ara 7.4 osservazzjoni).3.11. Tokoferol-DL-α, pur iżżejjed, ta’ attivitá attestata3.11.1. Li tiżen viċin 0,1 mg, 100 mg ta’ tokoferol-DL-α (3.10) ġo kunjett gradwad ta’ 100 ml. Dewweb fl-etanol (3.1) u jsir sal-marka ma’ l-istess solvent. 1 ml ta’ din is-soluzzjoni fiha 1 mg tokoferol-DL-α. (Kontroll UV ara 5.6.2.3; stabilizzazzjoni ara 7.4 osservazzjoni).3.12. Di-tert-butyl-4-methylphenol (BHT) (ara 7.5 osservazzjonijiet)4. Apparat4.1. Evaporatur rotanti li jiġbed l-arja4.2. Oġġetti tal-ħġieġ għanbar4.2.1. Kunjetti konikali jew bil-qiegħ ċatt, 500 ml, bis-socket tal-ħġieġ fil-qiegħ4.2.2. Kunjetti gradwati bit-tappijiet tal-ground-glass, bl-għonq dejjaq, 10, 25, 100 u 500 ml4.2.3. Lembuti li jisseparaw, konikali, 1000 ml, bit-tappijiet tal-ground-glass4.2.4. Kunjetti bil-forma ta’ lanġasa, 250 ml, bis-sockets tal-ground-glass4.3. Kondensur allihn, tul tal-jacket ta’ 300 mm, bil-ġonta tal-ground-glass, bl-adapter għal pajp tal-gass4.4. Karta filtru ippjegata għal separazzjoni tal-fażi, dijametru 185 mm (p.e. Schleicher & Schuell 597 HY 1/2)4.5. Apparat HPLC bis-sistema ta’ injezzjoni4.5.1. Kolonna kromatografika likwida, 250 mm × 4 mm, Ċ18, 5 jew 10 μm pakkjar, jew ekwivalenti4.5.2. Detettur UV jew florexxenti, b’aġġustament tal-wavelength varjabbli4.6. Spettrofotometru b’10 mm ta’ ċelli quartz4.7. Banju-ta’ l-ilma ma’ stirrer manjetiku4.8. Apparat ta’ estrazzjoni (ara figura 1) li tikkonsisti minn:4.8.1. Ċilindru tal-ħġieġ ta’ 1 l kapaċitá iffitjata bl-għonq u tapp tal-ground glass4.8.2. Insert tal-ground glass magħmmar bis-side-arm u tubu aġġustabbli li jgħaddi min ġo n-nofs. It-tubu aġġustabbli jrid ikollu t-tarf il-baxx tiegħu fil-forma ta’ U u jet fit-tarf opposta sabiex is-saff tal-likwidu ta’ fuq fiċ-ċilindru jista’ jiġi trasferit f’lembut li jissepara.5. ProċeduraNota:Vitamina E hija sensitiva għad-dawl (UV) u għal ossidazzjoni. L-operazzjoni trid issir fin-nuqqas ta’ dawl (bl-użu ta’ oġġetti tal-ħġieġ għanbar, jew oġġetti tal-ħġieġ protetti bil-folja/i ta’ l-aluminju) u ossiġenu (u flaxjat bin-nitroġenu). Matul l-estrazzjoni ta’ arja fuq il-ikwidu trid tiġi mibdula b’nitroġenu (u tevita pressa eċċessiva billi tillaxka t-tapp minn ħin għall-ieħor).5.1. Preparazzjoni tal-kampjunIllima il-kampjun sabiex jgħaddi għarbiel imxebbek 1 mm, bl-attenzjoni li tiġi evitata il-ġenerazzjoni tas-sħana. Il-limar irid isir immedjatament qabel jintiżen u saponifikazzjoni inkella jista’ jkun hemm telf ta’ vitamina E.5.2. SaponifikazzjoniSkond il-kontenut tal-piż tal-vitamina E, sa’ l-eqreb 0,01 g, 2 g sa 25 g tal-kampjun f’kunjett ta’ 500 ml konikali jew bil-qiegħ ċatt (4.2.1). Żid suċċessivament bit-tidwir ta’ 130 ml etanol (3.1), bejn wieħed u ieħor 100 mg BHT (3.13), 2 ml soluzzjoni ta’ askorbat sodju (3.5) u 2 ml soluzzjoni ta; sulfid sodju (3.6). Iffitja l-kondensur (4.3) mall-kunjett u deffes il-kunjett fil-banju ta’ l-ilma bl-istirrer manjetiku (4.7) Saħħan sakem ibaqbaq u ħallieh jirrifaksja għal ħames minuti. Imbagħad żid 25 ml soluzzjoni idrossida tal-potassju (3.4) minn ġol-kondensur (4.3) u ħalli jirriflaksja 25 minuta oħra bl-istirring taħt tnixxija żgħira ta’ nitroġenu. Imbgħat laħlaħ il-kondensur bxi 20 ml ta’ ilma u kessaħ il-kontenut tal-kunjett f’temperatura ambjentali.5.3. EstrazzjoniItrasferixxi b’tiswib is-soluzzjoni tas-saponifikazzjoni fi kwantitajiet bit-tlaħtieħ b’volum totali ta’ 250 ml ta’ ilma għal lembut li jissepara ta’ 1000 ml (4.2.3) jew għall-apparat ta’ estrazzjoni (4.8). Laħlaħ il-kunjett tas-saponifikazzjoni suċċesivament b’25 ml etanol (3.1) u 100 ml pitrolju ħafif (3.2) u trasferixxi it-tlaħliħiet għal ġo lembut li jissepara għal ġo l-apparat ta’ l-estrazzjoniIl-proporzjoni ta’ l-ilma u etanol fit-tagħqid ta’ soluzzjonijiet trid tkun xi 2:1. Ħawwad sew għal żewġ minuti u ħallieh joqod għal żewġ minuti.5.3.1. Estrazzjoni bl-użu ta’ lembut li jissepara (4.2.3)Meta s-saffi ġew separati (ara osservazzjoni 7.3) trasferiment tas-saff tal-pitrolju ħafif għal lembut li jissepara ieħor (4.2.3). Irrepeti din l-estrazzjoni darbtejn, b’100 ml ta’ ptitrolju ħafif (3.2) u darbtejn, b’ 50 ml ta’ pitrolju ħafif (3.2).Aħsel l-estratti magħquda fil-lembut li jissepara darbtejn billi iddawru bil-mod (biex tevita formazzjoni ta’ emulsjonijiet) b’porzjonijiet ta’ 100 ml ta’ ilma imbagħad ħawwad ripetetutament ma’ 100 ml porżjonijiet aktar sakemm l-ilma jibqa bla kulur fuq żidied ta’ soluzzjoni phenolphthalein (3.7) (ikun suffiċjenti li taħsel erba’ darbiet). Iffiltra l-estratt maħsul minn ġo filtru ippjegat xott għal fażi ta’ separazzjoni (4.4) biex tneħħi xi ilma sospiż ġo kunjett gradwat ta’ 500 (4.2.2). Laħlaħ il-lembut ta’ separazzjoni u l-filtru b’ 50 ml ta’ pitrolju ħafif (3.2), imla sal-marka bil-pitrolju ħafif (3.2) u ħawwad sew.5.3.2. Estrazzjoni bl-użu ta’ apparat ta’ estrazzjoni (4.8)Meta s-saffi jisseparaw (ara osservazzjoni 7.3) biddel it-tapp taċ-ċilindru tal-ħġieġ (4.8.1) bl-insert tal-ground glass (4.8.2) u għamel fil-pożizzjoni it-tarf t’isfel forma ta’ U tat-tubu aġġustabbli sakemm ikun eżatt fuq il-livell ta’ l-interface. Bl-applikazzjoni ta’ pressa minn linja nitroġena lis-side-arm, itrasferixxi is-saff ta’ fuq tal-pitrolju ħafif għal ġo lembut li jissepara ta’ 1000 ml (4.2.3). Żid 100 ml ta’ pitrolju ħafif (3.2) għal ġo ċ-ċilindru tal-ħġieġ, agħlaq bit-tapp u ħawwad sew. Ħalli s-saffi jisseparaw u ittrasferixxi s-saff ta’ fuq għal ġol-lembut li jissepara bħal qabel. Irrepeti l-proċedura ta’ estrazzjoni b’100 ml ta’ pitrolju ħafif (3.2), imbagħad irdoppja b’ 50 ml ta’ porzjonijiet ta’ pitrolju ħafif (3.2) u żid saffi ta’ pitrolu ħafif fil-lembut li jissepara.Aħsel l-estratti ta’ pitrolju ħafif imħallat kif deskritt f’ 5.3.1 u ipproċedi kif deskritt hawn.5.4. Preparazzjoni tas-soluzzjoni tal-kampjun għal HPLCIppipetta porzjoni alikwota tas-soluzzjoni tal-pitrolju ħafif (min 5.3.1 jew 5.3.2) ġo kunjett bil-forma ta’ lanġasa ta’ 250 ml (4.2.4). Evapora s-solvent sakemm kważi jinxef fuq evaporatur rotanti (4.1) bi pressa imnaqqsa f’banju ta’ temperatura li ma teċċedix 40 °C. Aħżen mill-ġdid il-pressa atmosferika billi żżid nitroġenu (3.9) u neħħi il-kunjett mill-evaporatur rotanti. Neħħi s-solvent li fadal bi tnixxija ta’ nitroġenu (3.9) u dewweb ir-residwu immedjatament f’volum mgħaruf (10-100 ml) ta’ metanol (3.3) (il-konċentrazzjoni ta’ tokoferol-DL-α irid ikun fl-iskala ta’ 5 μg/mlsa 30 μg/ml).5.5. Determinazzjoni permezz ta’ HPLCVitamina E hija separata fuq kolonna ta’ fażi bil-kontra Ċ18 (4.5.1) u l-konċentrazzjoni hija miżurata bl-użu ta’ detettur florexxenti (eċċitazzjoni: 330 nm) jew detettur UV (292 nm) (4.5.2).Injetta porzjon alikwota (p.e. 20 μl) ta’ soluzzjoni metanolika miksuba f’ 5.4 u elute bil-fażi mobbli (3,8). Ikkalkola l-għoli ta’ l-livell għoli (żoni) ta’ bosta injezzjonijiet ta’ l-istess soluzzjoni tal-kampjun l-għoli tal-livell għoli (żoni) ta’ bosta injezzjonijiet tas-soluzzjonijiet ta’ kalibrazzjoni (5.6.2).Kundizzjonijiet HPLCIl-kundizzjonijiet li jmiss huma offruti bħala gwida; kundizzjonijiet oħra jistgħu jintużaw dment li jagħtu riżultati ekwivalenti.Kolonna grafika likwida (4.5.1): | 250 mm x 4 mm, Ċ18, 5 jew 10 µm ippakjar, jew ekwivalenti |Fażi mobbli (3,8): | Taħlita ta' metanol (3.3) u ilma, p.e. 980 + 20 (v + v) |Rata ta' tnixxija: | >1-2 ml/min |Detettur (4.5.2): | Detettur florexxenti (eċċitazzjoni:< nm/emissjoni:(292 nm) 330 nm) jew detettur UV (292 nm) |5.6. Kalibrazzjoni (aċetat tokoferol jew - DL - α- tokoferol)5.6.1. Aċetat DL-α - tokoferol standard5.6.1.1. Preparazzjoni ta’ soluzzjoniji ta’ standard ta’ xogħolIttrasferixxi bil-pipetta 25 ml tas-soluzzjoni stock ta’ aċtetat tokoferol-DL-α (3.10.1) ġo kunjett konikali jew bil-qiegħ ċatt ta’ 500 ml (4.2.1) u idrolizza kif spjegat f’5.2. Sussegwentement agħmel estrazzjoni bil-pitrolju ħafif (3.2) skond l-5.3 u imla sa 500 ml bil-pitrolju ħafif. Evapora 25 ml ta’ din l-estrazzjoni fuq evaporatur rotanti (ara 5.4) kważi xott, neħħi s-solvent li jifdal bi tnixxija ta’ nitroġenu (3.9) u erġa dewweb ir-residwi ġo 25,0 ml ta’ metanol (3.3). L-inqas konċentrazzjoni ta’ din is-soluzzjoni hija 45,5 μg DL-α-tokoferol kull ml, ekwivalenti għal 50 μg DL-α-tokoferol aċetat kull mlIs-soluzzjoni ta’ standard tax-xogħol iridu jkunu preparati mil-ġdid qabel l-użu.5.6.1.2. Preparazjoni tas-soluzzjonijiet ta’ kalibrazzjoni u l-grafika ta’ kalibrazzjoniIttrasferixxi 1,0, 2,0, 4,0 u 10,0 ml tas-soluzzjoni standard ta’ xogħol ġo serje ta’ kunjetti gradwati ta’ 20 ml, imla sal-marka bil-metanol (3.3) u ħawwad. L-inqas konċentrazzjoni ta’ dawn is-soluzzjonijiet huma 2,5, 5,0, 10,0 u 25,0 μg DL-α-tokoferol aċetat, p.e. 2,28, 7,88, 9,10 μg/ml u 22,8 μg/ml DL-α-tokoferol.Injetta 20 μl min kull soluzzjoni ta’ kalibrazzjoni għal bosta drabi u stabilixxi l-għoli tal-livell l-għoli (żoni). Bl-użu tal-livelli għolja (żoni) ipplotja grafika ta’ kalibrazzjoni.5.6.1.3 5.6.1.3. Standardizzazzjoni ta’ UV tas-soluzzjoni ta’ stock ta’ l-aċetat tokoferol-DL-α (3.13.1)Ħallat 5,0 ml tas-soluzzjoni stock DL-α - tokoferol aċetat (3.10.1) għal 25,0 ml b’etanolu kejjel il-UV spektrum ta’ din is-soluzzjoni kontra l-etanol (3.1) fl-ispektrofotometru (4.6) bejn 250 nm u 320 nm.L-assorbiment massimu jrid ikun sa 284 nm:+++++ TIFF +++++F’din it-taħlita valur ta’ estinsjoni ta’ 0,84 sa 0,88 irid jinkiseb.5.6.2. DL-α - tokoferol standard5.6.2.1. Preparazzjoni ta’ soluzzjoniji ta’ standard ta’ xogħolIttrasferixxi bil-pipetta 2,0 ml tas-soluzzjoni stock DL-α-tocopherol (3.11.1) ġo kunjett gradwat ta’ 50 ml, dewweb fil-metanol (3.3) u imla sal-marka bil-metanol. L-inqas konċentrazzjoni ta’ din is-soluzzjoni hija 40 μg DL-α-tocopherol kull ml, ekwivalenti għal 44,0 μg DL-α-tocopherol aċetat kull ml. Is-soluzzjoni ta’ standard tax-xogħol trid tkun preparata mill-ġdid qabel l-użu.5.6.2.2. Preparazzjoni tas-soluzzjonijiet ta’ kalibrazzjoni u l-grafika ta’ kalibrazzjoniIttrasferixxi 1,0, 2,0, 4,0 u 10,0 ml tas-soluzzjoni standard ta’ xogħol ġo serje ta’ kunjetti gradwati ta’ 20 ml, imla sal-marka bil-metanol (3.3) u ħawwad. L-inqas konċentrazzjoni ta’ dawn is-soluzzjonijiet huma 2,0, 4,0, 8,0 u 20,0 μg/ml DL-α-tokoferol, p.e. 2,20, 4,40, 8,79 μg/ml u 22,0 μg/ml DL-α-tocopherol aċetat.Injetta 20 μl min kull soluzzjoni ta’ kalibrazzjoni għal bosta drabi u stabilixxi l-għoli tal-livell l-għoli (żoni). Bl-użu tal-livelli għolja (żoni) ipplotja grafika ta’ kalibrazzjoni.5.6.2.3. Standardizzazzjoni ta’ UV tas-soluzzjoni ta’ stock ta’ tocopherol-DL-α (3.11.1)Ħallat 2,0 ml tas-soluzzjoni stock DL-α - tokoferol (3.11.1) għal 25,0 ml b’etanolu u kejjel il-UV spektrum ta’ din is-soluzzjoni kontra l-etanol (3.1) fl-ispektrofotometru (4.6) bejn 250 nm u 320 nm+++++ TIFF +++++F’din it-taħlita valur ta’ estinsjoni ta’ 0,6 irid jinkiseb.6. Kalkolazzjoni tar-riżultatiMill-għoli maħsub (żona) tal-livelli l-għolja tal-vitamina E tas-soluzzjoni tal-kampjun li tiddetermina il-konċentrazzjoni tas-soluzzjoni tal-kampjun f’μg/ml (kalkolat bħala α-tocopherol aċetat) b’riferenza għal grafika ta’ kalibrazzjoni (5.6.1.2 jew 5.6.2.2).Il-kontenut tal-vitamina E w f’mg/kg tal-kampjun tingħata bil-formula li jmiss:+++++ TIFF +++++fejn:β = konċentrazzjoni tal-vitamina E tas-soluzzjoni tal-kampjun (5.4) f’μg/mlV1 = volum ta’ soluzzjoni tal-kampjun (5.4) f’mlV2 = volum ta’ aliquot meħud f’ 5.4 f’mlm = massa ta’-porzjoni tat-test fi g7. Osservazzjonijiet7.1. Għal kampjuni b’konċentrazzjoni baxxa ta’ vitamina E huwa ta’ użu li jikkombina l-estratti tal-pitrolju ħafif ta’ żewġ charges ta’ saponifikazzjonijiet (ammont imwieżen: g) għal soluzzjoni waħda ta’ kampjun għal determinazzjoni -HPLC.7.2. Il-piż tal-kampjun meħud għall-analiżi ma jridx ikun fih aktar min 2 g xaħam.7.3. Jekk separazzjoni ta’ fażi ma sseħx żid bejn wieħed u ieħor 10 ml etanol (3.1) biex tikser l-emulsjoni.7.4. Wara l-kejl spektrofotometriku tad-DL-α-tocopherol aċetat jew soluzzjoni tad-DL-α-tocopherol skond 5.6.1.3 jew 5.6.2.3 rispettivament żid bejn wieħed u ieħor 10 mg BHT (3.12) għas-soluzzjoni (3.10.1 jew 3.10.2) u żomm is-soluzzjoni f’refriġeratur (tul ta’ ħażna massima ta’ erba’ gimgħat).7.5. Hydroquinone jista’ jiġi użat minflok il-BHT.7.6. Bl-użu ta’ kolonna ta’ fażi normali s-separazzjoni ta’ α-, β-, χ- u δ-tocopherol huwa possibbli.7.7. Bejn wieħed u ieħor 150 mg ta’ aċidu assorbiku jista’ jintuża minflok soluzzjoni ta’ sodju askorbat.7.8. Bejn wieħed u ieħor 50 mg EDTA jista’ jintuża minflok soluzzjoni ta’ sulfide sodju.8. RipetabilitáId-differenza bejn ir-riżultati ta’ żewġ determinazzjonijiet paralelli isiru fuq l-istess kampjun ma jridx jeċċedi 15 % relativ għal riżultati aktar għolja.9. Riżultati ta’ studju kollaborattiv [2]L : numru ta' laboratorjin : numru ta' valuri waħedhomsr : devjazzjoni standard ta' abilitá ta' ripetizzjonisR : Devjazzjoni standard ta' riproduzzjonibilitár : ripetabilitáR : reproduttibilitáCVr : koeffiċjenti għal varjazzjoni ta' abilitá ta' ripetizzjoniCVR : koeffiċjenti għal varjazzjoni ta' riproduttivitá| Taħlit min qabel | Għalf imħallat min qabel | Konċentrat ta'concentrate mineral | Għalf ta' proteini | Ħanżir żgħir |L | 12 | 12 | 12 | 12 | 12 |n | 48 | 48 | 48 | 48 | 48 |tifsira [mg/kg] | 17380 | 1187 | 926 | 315 | 61,3 |sr [mg/kg] | 384 | 45,3 | 25,2 | 13,0 | 2,3 |r [mg/kg] | 1075 | 126,8 | 70,6 | 36,4 | 6,4 |ĊVr [%] | 2,2 | 3,8 | 2,7 | 4,1 | 3,8 |SR [mg/kg] | 830 | 65,0 | 55,5 | 18,9 | 7,8 |R [mg/kg] | 2324 | 182,0 | 155,4 | 52,9 | 21,8 |ĊVR [%] | 4,8 | 5,5 | 6,0 | 6,0 | 12,7 |+++++ TIFF +++++PARTI Ċ DETERMINAZZJONI TA’ TRIPTOFAN1. Skop u għanl-metodu huwa għal determinazzjoni tat-total u tripotofan ħieles fl-għalf. Ma jiġix distingwit bejn forom D- u L-.2. PrinċipjuGħad-determinazzjoni ta’ trijofan totali, l-kampjun huwa idroliżżat taħt kondizzjonijiet alkalini ma’ soluzzjoni idrossida barjum saturata u imsaħħna sa 110 °C għal 20 siegħa. Wara li jiżdied standard ta’ idroliżi interna.Għad-determinazzjoni ta’ triptofan ħieles, il-kampjun huwa estratt taħt kondizzjonijiet aċidi ħfief fil-preżenza ta’ standard intern.It-triptofan u l-istandard intern fl-idroliżat jew fl-estratt huma determinati bil-HPLC b’detezzjoni florexxenti.3. Reaġenti3.1. Ilma iddistillat darbtejn jew ilma ta’ kwalitá ekwivalenti irid ikun użat (konduttivitá < 10 μS/ċm).3.2. triptofan (puritá/kontenut = 99 %) imnixxef taħt frugħa fuq pentossidu fosfru3.3. metil-triptofan (puritá/kontenut = 99 %), imnixxef taħt vakum fuq pentossidu fosfru3.4. Okta-idrat idrossidu barju (kura trid tinnżamm biex ma jiġix esponut il-Ba(OH)2 · 8 H2O esklussivament fl-arja sabiex tiġi evitata formazzjoniformation ta’ BaCO3, li tiddisturba d-determinazzjoni) (ara osservazzjoni 9.3).3.5. Idrossidu tas-sodju3.6. Aċidu orto-fosforiku, w = 85 %3.7. Aċidu idrokloriku, ρ20 = 1,19 μg/ml3.8. Metanol, grad HPLC3.9. Pitrolju ħafif, skala ta’ dbaqbieq 40-60 °C3.10. Soluzzjoni idrossida tas-sodju, ċ = 1 mol/l:Dewweb 40,0 g NaOH (3.5) fl-ilma u imla sal-1 1bl-ilma (3.1).3.11. Aċidu idroliku, ċ = 6 mol/l:Ħu 492 ml HCl (3.7) u imla sa 1 l bl-ilma.3.12. Aċidu idroliku, ċ = 1 mol/l:Ħu 82 ml HCl (3.7) u imla sa 1 l bl-ilma.3.13. Aċidu idroliku, ċ = 0,1 mol/l:Ħu 8,2 ml HCl (3.7) u imla sa 1 l bl-ilma.3.14. Aċidu orto-fosforiku, ċ = 0,5 mol/l:Ħu 34 ml ta’ aċidu orto-fosforiku (3,6) u imla sa 1 l bl-ilma (3.1).3.15. Soluzzjoni konċentrata ta’ triptofan (3.2), ċ = 2,50 μmol/ml:F’kunjett volumetriku ta’ 500 ml dewweb 0,2553 g triptofan (3.2) f’aċidu idrokloriku (3.13) u imla sal-marka bl-aċidu idroliku. Aħżen fi -18 °C għal massimu ta’ erba ġimgħat3.16. Soluzzjoni standard konċentrata interna, ċ = 2,50 μmol/ml:F’kunjett volumetriku ta’ 500 ml dewweb 0,2728 g α-metil-triptofan (3,3) f’aċidu idrokloriku (3.13) u imla sal-marka bl-aċidu idroliku. Aħżen fi -18 °C għal massimu ta’ erba ġimgħat3.17. Soluzzjoni standard ta’ kalibrazzjoni ta’ triptofan u standard intern:Ħu 2,00 ml ta’ soluzzjoni konċentrata ta’ triptofan (3.15), u 2,00 ml ta’ soluzzjoni standard interna konċentrata (α-metil-triptofan) (3.16).allat bl-ilma (3.1) u metanol (3.8) għal bejn wieħed u ieħor l-istess volum u għal bejn wieħed u ieħor l-istess konċentrazzjoni ta’ metanol (10-30 %) bħall-idroliżat imlesti.Din is-soluzzjoni trid tiġi preparata friska qabel l-użu.Protetta min dawl tax-xemx dirett waqt l-operazzjoni.3.18. Aċidu aċetiku3.19. 1,1,1-trikloro-2-metil-2-propanol3.20. Etanolamina > 98 %3.21. Soluzjoni ta’ 1 g 1,1,1-trikloro-2-metil-2-propanol (3.19) f’100 ml metanol (3.8)3.22. Fażi mobbli għal HPLC: Soluzjoni ta’ 1 g 1,1,1-trikloro-2-metil-2-propanol (3.19) f’100 ml metanol (3.8). Aġġusta pH għal 5,00 bl-użu ta’ etanolamina (3.20). Imla sa’ 1000 ml bl-ilma (3.1)4. Apparat4.1. HPLC bid-detettur spektrofluorimetriku4.2. Kolonna kromatografika likwida, 125 mm × 4 mm, Ċ18, 3 μm pakkjar, jew ekwivalenti4.3. pH-metru4.4. Kunjett polipropilina, kapaċitá 125 ml, bl-għonq u t-tap wiesgħajn.4.5. Filtru membran, 0,45 μm4.6. Autoclave, 110 (± 2) °C, 1,4 (± 0,1) bar4.7. Apparat li jħawwad mekkanikament jew ħawwad manjetiku4.8. Ħawwad vortex5. Procedura5.1. Preparazzjoni ta’ kampjuniIl-kampjun huwa illimat biex jgħaddi min ġo għarbiel imxebbek ta’ 0,5 mm. Kampjun għolja fil-kwantitá ta’ l-umditá iridu jew jiġu imnixxfa bl-arja f’temperatura li ma teċċedix 50 °C jew imnixxfa frizati qabel ma jiġu illimati. Kampjuni b’kontenut għoli ta’ xaħam iridu jiġu estratti b’pitrolju ħafif (3.9) qabel ma jiġu illimati.5.2. Determinazzjoni għal triptofan ħieles (estratt)Li tiżen viċin 1 mg ammont xieraq (1-5 g) tal-kampjun separat (5.1), ġo kunjett konikali. Żid 100,0 ml aċidu idrokloriku, ċ = 0,1 mol/l (3.13) u 5,00 ml soluzzjoni standarnd interna konċentrata (3.16) Ħawwad għal 60 min. b;użu ta’ ħawwad mekkaniju jew ħawwad manjetiku (4.7). Ħalli is-sediment joqgħod u tella bil-pipetta 10,0 ml tas-soluzzjoni supernatant fit-tazza l-kbira taż-żennuna. Aġġusta l-pH sa 3,0 bl-użu ta’ sodju idrossidu, ċ = 1,0 mol/l (3.10). Żid metanol suffiċjenti (3.8) biex tagħti konċentrazzjoni ta’ bejn 10 u 30 % ta’ metanol fil-volum finali. Ittrasferixxi ġo kunjett volumetriku ta’ volum xieraq u ħallat bl-ilma għal volum neċessarju għal kromatografija (bejn wieħed u ieħor l-istess volum bħall-kalibrazzjoni ta’ soluzzjoni standard (3.17)).Iffiltra ftit ml tas-soluzzjoni min ġo 0,45 μm filtru membran (4.5) qabel injezzjoni fuq il-kolonna HPLC. Ipproċedi għal fażi tal-kromatografija skond il-paragrafu 5.4.Ipproteġi soluzzjoni standard u estratti kontra dawl tax-xemx dirett. Jekk ma jkunx possibbli biex tanalizza l-estratti fl-istess ġurnata, l-estratti jistgħu jiġu maħżuna f’5 °C għal massimu ta’ tlett ijiem.5.3. Determinazzjoni ta’ triptofan totali (idrolisat)Iżen viċin 0,2 mg min 0,1 sa 1 g tal-kampjun separat (5.1) ġo kunjett polipropilin. Il-porzjon tal-kampjun imwieżen irid ikollu kontenut ta’ nitroġenu ta’ xi 10 mg. Żid 8,4 g Ckta-idrat idrossidu barju (3.4) u 10 ml ilma. Ħallat fuq ħawwad vortex (4.8) jew ħawwad manjetiku (4.7) Ħalli il-kalamita miksijja bit-teflon fit-taħlita. Aħsel il-ġnub tal-vessel b’4 ml ilma. Aqfel it-tap u u għalqu laxk. Trasferixxi għal ġo autoclave (4.6) bl-ilma u fwar ibaqbaq għal 30-60 minuta. Għala l-autoclave u autoclave f’10 (± 2) °C għal 20 siegħa.Sabiex tiġi evitata kristallizzazzjoni ta’ Ba(OH)2 · 8 H2O, żid it-taħlita sħuna bi 30 ml ilma li huwa f’temperatura ta’ kamra. Ħawwad bil-mod. Żid 2,00 ml soluzzjoni standard interna (α-tryptophan) konċentrata (3.16). Berred ir-reċipjenti fuq banju ilma/silġ għal 15 il-minuta.Żomm il-vessilu fl-banju li jberred u innewtralizza ma’ HCl, ċ = 6 mol/l (3.11) waqt li tħawwad u aġġusta l-pH to 3,0 bl-użu ta’ HCl, ċ = 1 mol/l (3.12). Żid metanol suffiċjenti biex tagħti konċentrazzjoni ta’ bejn 10 u 30 % ta’ metanol fil-volum finaliIttrasferixxi ġo kunjett volumetriku ta’ volum xieraq u ħallat bl-ilma għal volum definit għal volum definit neċessarju għal kromatografija (per eżempju 100 ml). Iż-żieda ta’ metanol ma tridx tikkawza preċipitazzjoni.Iffiltra ftit ml tas-soluzzjoni minn ġo 0,45 μm filtru membran (4.5) qabel injezzjoni fuq il-kolonna HPLC. Ipproċedi għal fażi tal-kromatografija skond il-paragrafu 5.4.Ipproteġi soluzzjoni standard u idroliżati kontra dawl tax-xemx dirett. Jekk ma jkunx possibbli biex tanalizza l-idroliżati fl-istess ġurnata, jistgħu jiġu maħżuna f’5 °C għal massimu ta’ tlett ijiem.5.4. Determinazzjoni HPLCIl-kundizzjonijiet li jmiss għal eluzzjoni iżokratika huma offruti għal gwida; kondizzjonijiet oħra jistgħu jintużaw, iżda li jagħtu riżultati ekwivalenti (ara ukoll osservazzjonijiet 9.1 u9.2):Kolonna grafika likwida (4.2): | 125 mm x 4 mm, Ċ18, 3 μm pakkjar jew ekwivalenti |Temperatura tal-kolonna: | Temperatura ambjentali |Fażi mobbli (3,22): | Soluzzjoni ta' 3,00 g aċidu aċetiku (3.18) + 900 ml ilma (3.1) + 50.0 ml (3.21) ta' 1.1.1-trikloru-2-metil-2-propanol (3.19) f'metanol (3.8) (1 g/100 ml). Aġġusta pH għal 5,00 bl-użu ta' etanolamina (3.20). Imla sa' 1000 ml bl-ilma (3.1) |Rata ta' tnixxija: | 1 ml/min |totali tal-proċedura: | bejn wieħed u ieħor 34 min |Wavelength ta' detezzjoni: | 280 nm, emissjoni: 356 nm 356 nm |Volum ta' injezzjoni | 20 |6. Kalkolazzjoni ta’ riżultati+++++ TIFF +++++A = żona tal-livelli l-għolja ta’ standard intern, soluzzjoni standard ta’ kalibrazzjoni (3.17)B = żona ta’ livelli l-għolja ta’ triptofan, estratti (5.2) jew idrolisat (5.3)C = volum f’ml (2 ml) ta’ soluzzjoni triptofan konċentrat (3.15) miżjud fis-soluzzjoni tal-kalibrazzjoni (3.17)D = konċentrazzjoni f’μmol/ml (= 2,50) ta’ soluzzjoni triptofan konċentrat (3.15) miżjud fis-soluzzjoni tal-kalibrazzjoni (3.17)E = volum f’ml ta’ soluzzjoni standard interna konċentrata (3.16) miżjuda fl-estrazzjoni (5.2) (= 5,00 ml) jew għall-idrolisat (5.3) (= 2,00 ml)F = żona ta’ livelli l-għolja ta’ standard intern, estratt (5.2) jew idrolisat (5.3)G = żona tal-livelli l-għolja ta’ triptofan, soluzzjoni standard ta’ kalibrazzjoni (3.17)H = volum f’ml (= 2,00 ml) ta’ soluzzjoni standard internali konċentrat (3.16) miżjud fis-soluzzjoni tal-kalibrazzjoni (3.17)W = piż ta’ kampjun fi g (irranġat għal piż oriġinali jekk imnixxef u/jew jitneħħilu x-xaħam)MW = piż molekulari ta’ triptofan (= 204,23)7. RipetabilitáId-differenza bejn ir-riżultati ta’ żewġ determinazzjonijiet paralelli isiru fuq l-istess kampjun ma jridx jeċċedi 10 % relativ għal riżultat aktar għoli.8. Riżultati ta’ studju kollaborattivStudju kollaborattiv Komunitarju (ir-Raba’ interparagun) ġie irranġat fejn tlett kampjuni ġew analizzati min 12 il-laboratorju biex jattestaw il-metodu għal idrolisi. Analiżi (5) replikanti ġew eżegwiti fuq kull kampjun. Ir-riżultati huma mogħtija fit-tabella li jmiss:L : numru ta' laboratorji li jissottomettu riżultatin : numru ta' riżultati singoli miżmuma biex jiġu eliminati outliers (identifikat min test ta' outlier Cochran, dixon)Sr : devjazzjoni standard ta' abilitá ta' repetizzjoniSR : devjazzjoni standard ta' riproduzzjonibilitár : ripetabilitáR : reprodutibilitáĊVr : koeffiċjenti għal varjazzjoni ta' abilitá ta' repetizzjoni, %ĊVR : koeffiċjenti għal varjazzjoni ta' riproduttivitá, %| Kampjun 1 Għalf tal-ħanżir | Kampjun 2 Għalf tal-ħanżir imsaħħaħ L-tryptophanbit-triptofan | Kampjun 3 Għalf konċentrat għal ħnieżer |L | 12 | 12 | 12 |n | 50 | 55 | 50 |Xgħir [g/kg] | 2,42 | 3,40 | 4,22 |sr [g/kg] | 0,05 | 0,05 | 0,08 |r [g/kg] | 0,14 | 0,14 | 0,22 |ĊVr [%] | 1,9 | 1,6 | 1,9 |SR [g/kg] | 0,15 | 0,20 | 0,09 |R [g/kg] | 0,42 | 0,56 | 0,25 |ĊVR [%] | 6,3 | 6,0 | 2,2 |Studju kollaborattiv Komunitarju ieħor (it-tielet interparagun) ġie irranġat fejn żewġ kampjuni ġew analizzati min 13 il-laboratorju biex jattestaw il-metodu għal estrazzjoni ta’ triptofan ħieles. Analiżi (5) replikanti ġew eżegwiti fuq kull kampjun. Ir-riżultati huma mogħtija fit-tabella li jmiss:L : numru ta' laboratorji li jissottomettu riżultatin : numru ta' riżultati singoli miżmuma biex jiġu eliminati outliers (identifikat min test ta' outlier Cochran, dixon)sr : devjazzjoni standard ta' abilitá ta' repetizzjonisR : devjazzjoni standard ta' riproduzzjonibilitár : ripetabilitáR : reproduċibilitáCVr : koeffiċjenza ta' varjazzjoni ta' abilitá ta' repetizzjoni, %CVR : koeffiċjenza ta' varjazzjoni ta' riproduttivitá, %| Kampjun 4 Taħlita ta' qamħ u soja | Kampjun 5 Taħlita ta' qamħ u soja (= kampjun 4 ) b'triptofan miżjud (0,457 g/kg) |L | 12 | 12 |n | 55 | 60 |Mezz [g/kg] | 0,391 | 0,931 |sr [g/kg] | 0,005 | 0,012 |r [g/kg] | 0,014 | 0,034 |CVr [%] | 1,34 | 1,34 |SR [g/kg] | 0,018 | 0,048 |R [g/kg] | 0,050 | 0,134 |CVR [%] | 4,71 | 5,11 |Studju interkumparabbli Komunitarju ieħor ġie irranġat ta’ fejn erba’ kampjuni ġew analizzati min seba’ laboratorji bl-għan ta’ triptofan attestat għal idroliżi. Ir-riżultati ġew mogħtija taħt ħames analiżi Replikanti ġew eżegwita fuq kull kampjun.L : numru ta' laboratorji li jissottomettu riżultatin : numru ta' riżultati singoli miżmuma biex jiġu eliminati outliers (identifikat min test ta' outlier Cochran, Dixon)sr : devjazzjoni standard ta' abilitá ta' repetizzjonisR : devjazzjoni standard ta' riproduzzjonibilitár : ripetibilitáR : reprodutibilitáCVr : koeffiċjenti għal varjazzjoni ta' abilitá ta' repetizzjoni, %CVR : koeffiċjenti għal varjazzjoni ta' riproduttivitá, %| Kampjun 1 Għalf tal-ħanżir imħallat (CRM117) | Kampjun 2 Xgħajr ta' ħut b'xaħam baxx (CRM118) | Kampjun 3 Xgħajr tas-Soybean (CRM119) | Kampjun 4 Trab ta' ħalib xkumat (CRM120) |L | 7 | 7 | 7 | 7 |n | 25 | 30 | 30 | 30 |Xgħajr [g/kg] | 2,064 | 8,801 | 6,882 | 5,236 |sr [g/kg] | 0,021 | 0,101 | 0,089 | 0,040 |r [g/kg] | 0,059 | 0,283 | 0,249 | 0,112 |CVr [%] | 1,04 | 1,15 | 1,30 | 0,76 |SR [g/kg] | 0,031 | 0,413 | 0,283 | 0,221 |R [g/kg] | 0,087 | 1,156 | 0,792 | 0,619 |CVR [%] | 1,48 | 4,69 | 4,11 | 4,22 |9. Osservazzjonijiet9.1. Skond kundizzjonijiet kromatografiċi speċjali jistgħu jagħtu separazzjonijiet aħjar bejn triptofan u α-metil-triptofan.Eluzzjoni isokratika segwita b’tindif ta’ kolonna li titla:Kolonna grafika likwida | 125 mm x 4 mm, C18, 5 μm pakkjar jew ekwivalenti |Temperatura tal-kolonna: | 32 °C |Fażi mobbli: | A: 0,01 mol/l KH2PO4/metanol, 95 + 5 (V + V) B: Metanol |Program li jitla: | 0 min | 100 % A | 0 % B |15 min | 100 % A | 0 % B |17 min | 60 % A | 40 % B |19 min | 60 % A | 40 % B |21 min | 100 % A | 0 % B |33 min | 100 % A | 0 % B |Rata ta' tnixxija: | 1,2 ml/min |Ħin totali tal-proċedura: | approximately 33 minutes bejn wieħed u ieħor 34 minuta |9.2. Il-kromatografija dvarja skond it-tip ta’ HPLC u tal-materjal ta’ l-ippakkjar tal-kolonna użat. Is-sistema magħżula trid tkun kapaċi li tagħti separazzjoni ta’ linja ta’ bażi bejn it-triptofan u l-istandard intern. Madankollu huwa importanti li prodotti ta’ degradazzjoni ikunu separati mit-triptofan u l-istandard intern. Idrolistati mingħajr standard intern irid jitħaddem sabiex jiċċekja il-linja ta’ bażi taħt l-istandard intern għal impuritajiet. Huwa importanti li il-ħin ta’ tħaddim huwa twil suffiċjenti għall-eluzjoni ta’ kull prodott ta’ degradazzjoni, inkella l-livelli għolja ta’ elutazzjoni jistgħu jinterferixxu ma’ tħaddim kromatografiku sussegwenti.Fl-iskala ta’ l-operazzjoni, s-sistema kromatografika trid tingħata risposta lineari. Ir-risposta lineari trid tiġi titkejjel b’konċentrazzjoni kostanti (in-normal) ta’ l-istandard intern u konċentrazzjonijiet li jvarjaw ta’ triptofan. Huwa ta’ importanza li il-qies taż-żewġ livelli għolja ta’ standard intern u tat-triptofan huma fl-iskala lineari tas-sistema HPLC/Jekk il-livell/i tat-triptofan u/jew l-anqas ta’ l-istandard intern ma jkunx/u żgħar ħafna jew kbar ħafna l-analiżi iridu jiġu ripetuti ma’ qies ta’ kampjun ieħor u/jew l-volum mibdul finali.9.3. Idrossidu barjumDawn ir-riżultati f’soluzzjoni mhux ċara għall-determinazzjoni HPLC, li tista’ tipproduċi riżultati baxxi għal triptofan.[1] Kontrollata mill-grupp tax-xogħol ta’ l-għalf għal Verband Deutscher Landwirtschaftlicher Untersuchungs- und Forschungsanstalten (VDLUFA).[2] Kontrollata mill-grupp tax-xogħol ta’ l-għalf għal Verband Deutscher Landwirtschaftlicher Untersuchungs- und Forschungsanstalten (VDLUFA).--------------------------------------------------


title: Id-Direttiva tal-Kunsill ta' l-14 ta' Diċembru 1981 li tissupplimenta d-Direttivi 75/362/KEE, 77/452/KEE, 78/686/KEE u 78/1026/KEE dwar ir-rikonoxximent reċiproku ta' diplomi, ċertifikati u provi oħrajn ta' kwalifiki formali tat-tobba, ta' l-infermiera responsabbli għall-kura ġenerali, tad-dentisti u tal-kirurgi veterinarji rispettivament, fir-rigward tad-drittijiet ottenuti

text:
Avviż Legali Importanti

|

31981L1057

Official Journal L 385 , 31/12/1981 P. 0025 - 0026 Finnish special edition: Chapter 16 Volume 1 P. 0050  Spanish special edition: Chapter 06 Volume 2 P. 0126  Swedish special edition: Chapter 16 Volume 1 P. 0050  Portuguese special edition Chapter 06 Volume 2 P. 0126

		Id-Direttiva tal-Kunsillta' l-14 ta' Diċembru 1981li tissupplimenta d-Direttivi 75/362/KEE, 77/452/KEE, 78/686/KEE u 78/1026/KEE dwar ir-rikonoxximent reċiproku ta' diplomi, ċertifikati u provi oħrajn ta' kwalifiki formali tat-tobba, ta' l-infermiera responsabbli għall-kura ġenerali, tad-dentisti u tal-kirurgi veterinarji rispettivament, fir-rigward tad-drittijiet ottenuti(81/1057/KEE)IL-KUNSILL TAL-KOMUNITAJIET EWROPEJ,Wara li kkunsidra t-Trattat li jistabbilixxi l-Komunità Ekonomika Ewropea, u b'mod partikolari l-Artikoli 49, 57 u 66 tiegħu,Wara li kkunsidra l-proposta mill-Kummissjoni [1],Wara li kkunsidra l-opinjoni tal-Parlament Ewropew [2],Wara li kkunsidra l-opinjoni tal-Kumitat Ekonomiku u Soċjali [3],Billi fid-Direttivi 75/362/KEE [4], 77/452/KEE [5], 78/686/KEE [6] u 78/1026/KEE [7] li jikkonċernaw ir-rikonoxximent reċiproku ta' diplomi, ċertifikati u provi oħrajn ta' kwalifiki formali tat-tobba, ta' l-infermiera responsabbli għall-kura ġenerali, tad-dentisti u tal-kirurgi veterinarji rispettivament, u li jinkludu miżuri sabiex jiffaċilitaw l-eżerċizzju effettiv tad-dritt ta' stabbiliment tal-libertà li jiġu pprovduti servizzi, id-dispożizzjonijiet li jirrigwardaw id-drittijiet ottenuti jirreferu għad-diplomi, iċ-ċertifikati u provi oħrajn ta' kwalifiki formali ta' tobba, ta' infermiera responsabbli għall-kura ġenerali, ta' dentisti u ta' kirurgi veterinarji maħruġa mill-Istati Membri qabel l-implimentazzjoni tad-Direttivi msemmija;Billi dawn id-dispożizzjonijiet għalhekk, ma jkoprux espressament id-diplomi, iċ-ċertifikati u l-provi l-oħrajn ta' kwalifiki formali li huma prova ta' taħriġ li ma jilħaqx il-ħtiġiet minimi ta' taħriġ previsti fid-Direttivi 75/363/KEE [8], 77/453/KEE [9], 78/687/KEE [10] u 78/1027/KEE [11] li ġie kkompletat wara l-implimentazzjoni tad-Direttivi msemmija, imma li kien beda qabel l-implimentazzjoni tagħhom;Billi hu xieraq li din l-omissjoni tissewwa,ADOTTA DIN ID-DIRETTIVA:L-Artikolu 1L-Artikolu 9(1) u (2) tad-Direttiva 75/362/KEE, l-Artikolu 4 tad-Direttiva 77/452/KEE, l-Artikolu 7(1) u (2) tad-Direttiva 78/686/KEE u l-Artikolu 4 tad-Direttiva 78/1026/KEE għandhom ukoll japplikaw għad-diplomi, iċ-ċertifikati u l-provi l-oħrajn ta' kwalifiki formali li huma prova ta' taħriġ li ma jilħaqx il-ħtiġiet minimi ta' taħriġ previst fl-Artikoli 1, 2, 3, 4 u 5 tad-Direttiva 75/363/KEE, fl-Artikolu 1 tad-Direttiva 77/453/KEE, fl-Artikoli 1, 2 u 3 tad-Direttiva 78/687/KEE u fl-Artikolu 1 tad-Direttiva 78/1027/EEC rispettivament u li ġie kkompletat wara l-implimentazzjoni ta' dawn id-Direttivi imma kien beda qabel l-implimentazzjoni msemmija.L-Artikolu 2L-Istati Membri għandhom jieħdu l-miżuri neċessarji biex jikkonformaw ma' din id-Direttiva sa mhux aktar tard mit-30 ta' Ġunju 1982. Għandhom minnufih jgħarrfu b'dan lill-Kummissjoni.L-Artikolu 3Din id-Direttiva hija indirizzata lill-Istati Membri.Magħmul fi Brussel, fl-14 ta' Diċembru 1981.Għall-KunsillIl-PresidentG. Howe[1] ĠU C 121, tat-23.5.1981, p. 3.[2] ĠU C 172, tat-13.7.1981, p. 114.[3] ĠU C 185, tas-27.7.1981, p. 7.[4] ĠU L 167, tat-30.6.1975, p. 1.[5] ĠU L 176, tal-15.7.1977, p. 1.[6] ĠU L 233, ta' l-24.8.1978, p. 1.[7] ĠU L 362, tat-23.12.1978, p. 1.[8] ĠU L 167, tat-30.6.1975, p. 14.[9] ĠU L 176, tal-15.7.1977, p. 8.[10] ĠU L 233, ta' l-24.8.1978, p. 10.[11] ĠU L 362, tat-23.12.1978, p. 7.--------------------------------------------------