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31973L0046

Quarta direttiva 73/46/CEE della Commissione, del 5 dicembre 1972, che fissa i metodi d'analisi comunitari per i controlli ufficiali degli alimenti per gli animali

Gazzetta ufficiale n. L 083 del 30/03/1973 pag. 0021 - 0034 edizione speciale finlandese: capitolo 3 tomo 5 pag. 0115  edizione speciale greca: capitolo 03 tomo 9 pag. 0114  edizione speciale svedese/ capitolo 3 tomo 5 pag. 0115  edizione speciale spagnola: capitolo 03 tomo 6 pag. 0230  edizione speciale portoghese: capitolo 03 tomo 6 pag. 0230

++++( 1 ) GU n . L 170 del 3 . 8 . 1970 , pag . 2 .  ( 2 ) GU n . L 171 del 29 . 7 . 1972 , pag . 39 .  ( 3 ) GU n . L 155 del 12 . 7 . 1971 , pag . 13 .  ( 4 ) GU n . L 279 del 20 . 12 . 1971 , pag . 7 .  ( 5 ) GU n . L 123 del 29 . 5 . 1972 , pag . 6 .  ( 6 ) 1 UI = 0,3 * g di retinolo .  ( 7 ) Per gli alimenti d'allattamento e per i prodotti che possono agglomerarsio o rigonfiare , raddoppiare la quantità dei reattivi indicati in 5.2 , primo e secondo comma .  ( 8 ) L'aggiunta di ascorbato di sodio non è necessaria quando si esegue l'idrolisi in atmosfera di azoto .  ( 9 ) Il contenuto in carotene puo essere determinato misurando la densità ottica a 450 nm ; E 1 %/1 cm = 2600 .  COMMISSIONE  QUARTA DIRETTIVA DELLA COMMISSIONE  del 5 dicembre 1972  che fissa i metodi d'analisi comunitari per i controlli ufficiali degli alimenti per gli animali  ( 73/46/CEE )  LA COMMISSIONE DELLE COMUNITA EUROPEE ,  visto il trattato che istituisce la Comunità economica europea ,  vista la direttiva del Consiglio , del 20 luglio 1970 , concernente l'introduzione di modi di prelevamento dei campioni e di metodi d'analisi comunitari per il controllo ufficiale degli alimenti per gli animali ( 1 ) , modificata dalla direttiva n . 72/275/CEE del 20 luglio 1972 ( 2 ) , in particolare l'articolo 2 ,  considerando che la suddetta direttiva prevede che i controlli ufficiali degli alimenti per gli animali destinati a constatare l'osservanza delle condizioni prescritte in virtù delle disposizioni legislative , regolamentari o amministrative concernenti le qualità e la composizione degli alimenti per gli animali , siano effettuati secondo i modi di prelevamento di campioni ed i metodi di analisi comunitari ;  considerando che le direttive n . 71/250/CEE , n . 71/393/CEE e n . 72/199/CEE della Commissione , del 15 giugno 1971 ( 3 ) , del 18 novembre 1971 ( 4 ) e del 27 aprile 1972 ( 5 ) hanno già fissato un certo numero di metodi di analisi comunitari ; che , tenuto conto dello stato d'avanzamento dei lavori sin qui effettuati , è necessario adottare una quarta serie di metodi ;  considerando che le misure previste dalla presente direttiva sono conformi al parere del Comitato permanente degli alimenti per gli animali ,  HA ADOTTATO LA PRESENTE DIRETTIVA :  Articolo 1  Gli Stati membri prescrivono che le analisi per i controlli ufficiali degli alimenti per gli animali , per quanto riguarda il contenuto in umidità dei grassi e degli oli animali e vegetali e per quanto riguarda i contenuti in magnesio e con cellulosa grezza degli alimenti , siano effettuate secondo i metodi descritti all'allegato I della presente direttiva .  Le disposizioni generali di cui alla prima parte ( introduzione ) dell'allegato della prima direttiva n . 71/250/CEE della Commissione , del 15 giugno 1971 , si applicano ai metodi descritti all'allegato I della presente direttiva .  Articolo 2  Gli Stati membri prescrivono che le analisi per i controlli ufficiali degli alimenti per gli animali , per quanto riguarda il loro contenuto in retinolo ( vitamina A ) , tiamina ( aneurina , vitamina B1 ) , acidi ascorbico e deidroascorbico ( vitamina C ) , siano effetuate secondo i metodi descritti all'allegato II della presente direttiva .  Le disposizioni generali di cui alla prima parte ( introduzione ) dell'allegato della prima direttiva n . 71/250/CEE della Commissione , del 15 giugno 1971 , eccetto la parte relativa alla preparazione del campione da analizzare , si applicano ai metodi descritti all'allegato II della presente direttiva .  Articolo 3  Gli Stati membri mettono in vigore , non oltre il 1 * gennaio 1974 , le disposizioni legislative , regolamentari o amministrative necessarie per conformarsi alle disposizioni della presente direttiva e ne informano immediatamente la Commissione .  Articolo 4  Gli Stati membri sono destinatari della presente direttiva .  Fatto a Bruxelles , il 5 dicembre 1972 .  Per la Commissione  Il Presidente  S . L . MANSHOLT  ALLEGATO I  1 . DETERMINAZIONE DELL'UMIDITA NEI GRASSI E NEGLI OLI ANIMALI E VEGETALI  1 . Scopo e campo d'applicazione  Il metodo permette di determinare il contenuto in umidità ( acqua ed altre materie volatili ) dei grassi e degli oli animali e vegetali .  2 . Principio  Il campione viene sottoposto ad essiccazione a 103 * C fino a cessazione della diminuzione di massa . La perdita di massa viene determinata per pesata .  3 . Apparecchiatura  3.1 . Recipiente a fondo piano , di materiale resistente alla corrosione , diametro : da cm 8 a 9 , altezza : circa cm 3  3.2 . Termometro a mercurio con bulbo rinforzato e camera di espansione all'estremità superiore , graduato da circa 80 * C ad almeno 110 * C , lunghezza : circa cm 10 .  3.3 . Bagno di sabbia o piastra elettrica riscaldante  3.4 . Essiccatore , contenente un efficace disidratante  3.5 . Bilancia analitica  4 . Modo di operare  Pesare , con l'approssimazione di mg 1 , circa g 20 del campione omogeneizzato nel recipiente ( 3.1 ) , essiccato e tarato , contenente il termometro ( 3.2 ) . Riscaldare sul bagno di sabbia o sulla piastra riscaldante ( 3.3 ) , agitando continuamente con il termometro , in modo da far salire la temperatura a 90 * C in circa 7 minuti .  Ridurre l'intensità del riscaldamento secondo la frequenza con la quale le bolle risalgono dal fondo del recipiente . La temperatura non deve superare i 105 * C . Continuare ad agitare raschiando il fondo del recipiente sino a quando non si formano più bolle .  Per assicurare l'eliminazione completa dell'umidità , riscaldare più volte a 103 * C pio meno 2 * C , raffreddando a 93 * C tra i riscaldamenti successivi . Lasciar quindi raffreddare nell'essiccatore ( 3.4 ) , sino a temperatura ambiente e pesare . Ripetere l'operazione fino a quando la perdita di massa tra due pesate successive non supera mg 2 .  N . B . Un aumento della massa del campione dopo i ripetuti riscaldamenti indica un'ossidazione del grasso . In questo caso , calcolare il risultato basandosi sulla pesata effettuata immediatamente prima che la massa abbia incominciato ad aumentare .  5 . Calcolo dei risultati  Il contenuto in umidità , in per cento del campione , è dato dalla seguente formula :  ( M1 - M2 ) * 100/Mo  in cui :  M0 = massa , in grammi , della quantità di prodotto sottoposta all'analisi  M1 = massa , in grammi , del recipiente con il suo contenuto prima del riscaldamento  M2 = massa , in grammi , del recipiente con il suo contenuto dopo il riscaldamento .  I risultati inferiori a 0,05 % debbono essere riportati con la dizione " meno di 0,05 % " .  Ripetibilità  La differenza tra i risultati di due determinazioni parallele , effettuate sullo stesso campione , non deve oltrepassare 0,05 % in valore assoluto .  2 . DETERMINAZIONE DEL MAGNESIO  _ per spettrofotometria d'assorbimento atomico _  1 . Scopo e campo di applicazione  Il metodo permette di determinare il magnesio nei mangimi . Esso è particolarmente adatto per determinare i contenuti di magnesio inferiori al 5 % .  2 . Principio  Il campione viene incenerito e sciolto nell'acido cloridrico diluito . Se non contiene sostanze organiche , viene sciolto direttamente all'acido cloridrico diluito . La soluzione viene diluita e il contenuto di magnesio viene determinato con la spettrofotometria d'assorbimento atomico a 285,2 nm , per raffronto con soluzioni tipo .  3 . Reattivi  3.1 . Acido cloridrico p . a . , d : 1,16  3.2 . Acido cloridrico p . a . , d : 1,19  3.3 . Magnesio , in nastro o filo , o solfato di magnesio MgSO4 : 7H2O p . a . essiccato nel vuoto a temperatura ambiente  3.4 . Soluzione di sale di stronzio ( cloruro o nitrato ) al 2,5 % ( p/v ) di stronzio ( = 76,08 g di SrCl26 H2O p . a./1 o 60,38 g di Sr ( NO3 ) 2 p . a./1 ) .  3.5 . Soluzione tipo di magnesio : pesare , con la precisione di mg 1 , g 1 di magnesio ( 3.3 ) liberato con cura della pellicola di ossido od una quantità corrispondente di solfato di magnesio ( 3.3 ) , introdurlo in un pallone tarato da ml 1 000 , aggiungere ml 80 di acido cloridrico ( 3.1 ) , lasciare sciogliere e portare a ml 1 000 aggiungendo acqua ; ml 1 di tale soluzione contiene mg 1,000 di magnesio .  4 . Apparecchiatura  4.1 . Crogiolo da incenerimento di platino , quarzo o porcellana  4.2 . Forno elettrico a muffola , provvisto di termostato  4.3 . Spettrofotometro d'assorbimento atomico  5 . Modo di operare  5.1 Preparazione della soluzione  5.1.1 . Alimenti costituiti esclusivamente da sostanze minerali  Pesare , con l'approssimazione di mg 1 , g 5 del campione , introdurli in un pallone tarato da ml 500 con ml 250 a 300 d'acqua . Aggiungere ml 40 di acido cloridrico ( 3.1 ) . Portare ad ebollizione e lasciare bollire lentamente il liquido per 30 minuti . Lasciare raffreddare , portare a volume con acqua , mescolare e filtrare su filtro di carta a pieghe asciutto . Scartare i primi ml 30 di filtrato .  In presenza di silice trattare g 5 di campione con una quantità sufficiente ( ml 15 a 30 ) di acido cloridrico ( 3.2 ) ed evaporare a secco a bagnomaria . Proseguire come indicato in 5.1.2 a partire dal 3 * periodo .  5.1.2 . Alimenti costituiti essenzialmente da sostanze minerale  Pesare , con l'approssimazione di mg 1 , g 5 del campione in un crogiolo da incenerimento ed incenerire a 550 * C in un forno a muffola , sino ad ottenere ceneri esenti da particelle carboniose .  Per eliminare la silice , aggiungere alle ceneri una quantità sufficiente ( ml 15 a 30 ) di acido cloridrico ( 3.2 ) , ed evaporare a secco su bagnomaria . Essiccare poi per un'ora in stufa a 105 * C . Riprendere il residuo con ml 10 di acido cloridrico ( 3.1 ) e trasferire , mediante acqua calda , in pallone tarato da ml 500 . Portare all'ebollizione , lasciar raffreddare e portare a volume con acqua . Mescolare e filtrare su filtro di carta asciutto in un bicchiere asciutto . Scartare i primi ml 30 di filtrato .  5.1.3 . Alimenti costituiti essenzialmente da sostanze organiche  Pesare , con l'approssimazione di mg 1 , g 5 del campione in un crogiolo da incenerimento e incenerire a 550 * C in un forno a muffola , sino a ottenere ceneri esenti da particelle carboniose . Riprendere le ceneri con ml 5 di acido cloridrico ( 3.2 ) , evaporare a secco in bagno maria ed essiccare quindi per un'ora in una stufa a 105 * C per insolubilizzare la silice . Riprendere il residuo con ml 5 di acido cloridrico ( 3.1 ) , trasferire , con l'ausilio di acqua calda , in un pallone tarato da ml 250 , portare all'ebollizione , lasciar raffreddare e portare a volume con acqua . Mescolare e filtrare su filtro di carta asciutto in un bicchiere asciutto . Scartare i primi ml 30 di filtrato .  5.2 Misura dell'assorbimento atomico  Preparare almeno 5 soluzioni di riferimento a concentrazioni crescenti , scelte in funzione della zona di misurazione optimum dello spettrofotometro , diluendo con acqua la soluzione campione ( 3.5 ) . Aggiungere a ciascuna soluzione ml 10 di soluzione di sale di stronzio ( 3.4 ) e completare quindi il volume a ml 100 mediante aggiunta d'acqua .  Diluire con acqua una parte del filtrato ottenuto in 5.1.1 , 5.1.2 o in 5.1.3 in modo da ottenere una concentrazione di magnesio compresa fra i limiti di concentrazione delle soluzioni di riferimento . La concentrazione di acido cloridrico di questa soluzione non deve essere superiore a 0,4 N . Aggiungere ml 10 di soluzione di sale di stronzio ( 3.4 ) e completare quindi il volume a ml 100 mediante aggiunta d'acqua .  Misurare l'assobimento della soluzione da determinare e delle soluzioni di riferimento alla lunghezza d'onda di 285,2 nm .  6 . Calcolo dei risultati  Determinare la quantità di magnesio del campione riferendosi alle soluzioni campione . Esprimere il risultato in percento del campione .  Ripetibilità  La differenza tra i risultati di due determinazioni parallele effettuate su di uno stesso campione non deve essere superiore al 5 % , in valore relativo .  3 . DETERMINAZIONE DELLA CELLULOSA GREZZA  1 . Scopo e campo d'applicazione  Il metodo permette di determinare nei mangimi le materie organiche , esenti da grasso , insolubili in ambiente acido e in ambiente alcalino , convenzionalmente designate con il nome di cellulosa grezza .  2 . Principio  Il campione , eventualmente sgrassato , è trattato successivamente con soluzioni bollenti di acido solforico e di idrossido di potassio di concentrazioni determinate . Il residuo è separato per filtrazione su amianto , lavato , essiccato , pesato e calcinato a 900 * C . La perdita di peso conseguente alla calcinazione corrisponde alla cellulosa grezza della quantità di prodotto sottoposta all'analisi .  3 . Reattivi  3.1 . Acido solforico p . a . 0,26 N  3.2 . Amianto trattato : aggiungere ad amianto per crogiolo di Gooch circa cinque volte il suo peso di acido cloridrico diluito ( un volume di acido cloridrico , d : 1,19 , più tre volumi d'acqua ) . Far bollire la miscela per circa 45 minuti , lasciar raffreddare , filtrare su imbuto di Buechner . Lavare il residuo prima con acqua , fino all'eliminazione dell'acido cloridrico nelle acque di lavaggio , e poi con acetone ( 3.6 ) . Essiccare l'amianto nella stufa e calcinarlo quindi per due ore a 900 * C . Lasciar raffreddare e conservare in bottiglia chiusa . L'amianto cosi trattato puo essere utilizzato più di una volta . Esso deve essere conforme alle prescrizioni di cui al punto 5.1 per quanto riguarda la prova in bianco .  3.3 . Emulsione antischiuma ( per esempio silicone )  3.4 . Soluzione d'idrossido di potassio p . a . 0,23 N  3.5 . Acido cloridrico 0,5 N  3.6 . Acetone puro  3.7 . Etere dietilico puro  4 . Apparecchiatura  4.1 . Becher da almeno ml 600 , graduato a ml 200  4.2 . Dischi di porcellana del diametro di circa mm 80 e dello spessore di circa mm 4 , con circa 32 fori dal diametro di circa mm 4 ciascuno .  4.3 . Beute da vuoto da circa 1 2 , con tappo di gomma , graduate in corrispondenza di ml 800 e provviste di un imbuto di vetro del diametro di mm 120 .  4.4 . Piastre filtranti del diametro di circa mm 40 e dello spessore di circa mm 4 , con bordo obliquo adattato al cono dell'imbuto ( 4.3 ) , con 16 fori di circa mm 4 di diametro ciascuno e ricoperte da una griglia metallica a maglio di circa mm 1 di lato . Le piastre e le griglie metalliche non debbono alterarsi per azione degli acidi o degli alcali .  4.5 . Crogioli di platino o di quarzo per incenerimento  4.6 . Forno elettrico a muffola , con termostato .  4.7 . Essiccatore  4.8 . Filtro di amianto  Mettere in sospensione g 2,0 di amianto ( 3.2 ) in ml 100 d'acqua . Filtrare sotto vuoto su una piastra filtrante ricoperta da una griglia metallica ( 4.4 ) posta nell'imbuto di una beuta da vuoto ( 4.3 ) . Raccogliere il filtrato e filtrarlo nuovamente con lo stesso filtro . Eliminare il filtrato .  5 . Modo di operare  Pesare , con l'approssimazione di mg 1 , g 3 di campione e g 2 di amianto trattato ( 3.2 ) in un becher ( 4.1 ) , aggiungere ml 200 di acido solforico ( 3.1 ) e qualche goccia di emulsione antischiuma ( 3.3 ) . Portare rapidamente all'ebollizione e lasciare bollire per 30 minuti esatti . Per mantenere costante il volume , coprire il becher con un dispositivo raffreddante , per esempio un pallone a fondo rotondo da ml 500 a circolazione di acqua fredda . Interrompere l'ebollizione aggiungendo circa ml 50 d'acqua fredda e filtrare immediatamente sotto vuoto su un filtro di amianto già preparato comme indicato in 4.8 .  Lavare il residuo con 5 parti da circa ml 100 di aqua molto calda per ottenere un volume finale di filtrato di ml 800 . Travasare tutto il residuo nel becher ( 4.1 ) , nel quale è già stato collocato un disco di porcellana ( 4.2 ) per rendere regolare l'ebollizione . Aggiungere ml 200 di soluzione di idrossido di potassio ( 3.4 ) . Portare rapidamente all'ebollizione e lasciar bollire per 30 minuti esatti . Aggiungere circa ml 50 d'acqua fredda e filtrare immediatamente sotto vuoto su un nuovo filtro di amianto già preparato come indicato sub 4.8 . Lavare il residuo con acqua molto calda fino a neutralità delle acque di lavaggio ( saggio su tornasole ) ; lavare quindi tre volte con acetone ( 3.6 ) ( complessivamente , circa ml 100 ) .  Trasferire quantitativamente il residuo in un crogiuolo per incenerimento ( 4.5 ) , sminuzzarlo _ se necessario _ ed essiccare nella stufa a 130 * C fino a peso costante .  Far raffreddare in essiccatore e pesare rapidamente . Introdurre quindi il crogiolo nel forno a muffola ( 4.6 ) e lasciar calcinare per 30 minuti a 900 * C . Far raffreddare nell'essiccatore e pesare rapidamente .  Eseguire con lo stesso procedimento una prova in bianco con l'amianto trattato ( 3.2 ) , senza campione . La perdita di peso conseguente alla calcinazione dei g 6 d'amianto non deve essere superiore a mg 10 .  6 . Calcolo dei risultati  Il contenuto in cellulosa grezza , in percento del campione , è dato dalla formula : ( a _ b ) . 100/3  in cui :  a = perdita di peso conseguente alla calcinazione , nella determinazione ,  b = perdita di peso conseguente alla calcinazione , nella prova in bianco .  Ripetibilità  La differenza tra i risultati di due determinazioni parallele eseguite sullo stesso campione non deve superare :  0,3 in valore assoluto , per i contenuti di cellulosa grezza inferiori al 10 % ; 3 % in valore relativo per i contenuti di cellulosa grezze uguali o superiori al 10 % .  7 . Osservazioni  7.1 . Gli alimenti che contengono più del 10 % di materie grasse debbono essere sgrassati prima dell'analisi con etere dietilico . A tale scopo , collocare il saggio ( g 3 pesati con l'approssimazione di mg 1 ) su un filtro d'amianto ( 4.8 ) . Coprire 3 volte con circa ml 50 di etere dietilico ( 3.7 ) e filtrare ogni volta sotto vuoto con precauzione . Travasare tutto il saggio e l'amianto in un becher ( 4.1 ) e proseguire l'analisi come indicato in 5 .  7.2 . Gli alimenti che contengono materie grasse non direttamente estraibili debbono essere sgrassati una prima volta come indicato sub 7.1 ed una seconda volta dopo il lavaggio del residuo dell'attacco acido .  A questo scopo , lavare tre volte il residuo di questo attacco con acetone ( 3.6 ) ( complessivamente ml 100 ) , quindi altre tre volte con ml 50 di etere di etilico ( 3.7 ) . Versare quindi tutti i residui in un becher ( 4.1 ) e proseguire l'analisi come indicato in 5 , secondo capoverso ( trattamento con la soluzione di idrossido di potassio ) .  7.3 . Nel caso di alimenti ricchi di calcio ( più del 2 % di calcio ) versare il saggio ( g 3 pesati con l'approssimazione di mg 1 ) in un becher ( 4.1 ) contenente ml 100 di acido cloridrico 0,5 N ( 3.5 ) e lasciare riposare a freddo per 5 minuti . Filtrare immediatamente e lavare con acqua fredda . Utilizzare come adiuvante di filtrazione i g 2,0 di amianto previsti per l'ebollizione con l'acido solforico . Se la filtrazione risulta difficile , diluire la sospensione con acetone . Procedere quindi come indicato in 5 .  ALLEGATO II  1 . DETERMINAZIONE DEL RETINOLO ( VITAMINA A )  1 . Scopo e campo di applicazione  Il metodo permette di determinare il contenuto di retinolo ( vitamina A ) nei mangimi , nei concentrati e nelle premiscele . Il limite inferiore di determinazione è 10 000 UI/kg per gli alimenti fortemente pigmentati , e di 4 000 UI/kg per gli altri prodotti ( 6 ) . I prodotti sono suddivisi in due gruppi a seconda del loro presunto contenuto in retinolo :  Gruppo A : contenuto inferiore a 200 000 UI/kg  Gruppo B : contenuto uguale o superiore a 200 000 UI/kg  2 . Principio  Il campione viene idrolizzato a caldo con una soluzione di idrossido di potassio in mezzo etanolico ed in presenza di una sostanza antiossidante o in atmosfera di azoto . La miscela è estratta con 1,2-dicloroetano . L'estratto è evaporato a secco e ripreso con etere di petrolio . La soluzione viene cromatografata su colonna di ossido di alluminio ( per i prodotti di cui al gruppo B la cromatografia è necessaria solo in alcuni casi ) . Il retinolo è determinato per spettrofotometria a 610 nm dopo la formazione di un complesso colorato con la reazione di Carr-Price , nel caso dei prodotti di cui al gruppo A ; per spettrofotometria nell'UV a 325 nm per quelli del gruppo B .  3 . Reattivi  a ) impiegati per l'analisi dei prodotti di cui ai gruppi A e B  3.1 . Etanolo al 96 % ( v/v )  3.2 . Soluzione al 10 % ( p/v ) di ascorbato di sodio p . a . oppure  3.3 . Azoto , purificato  3.4 . Soluzione al 50 % ( p/v ) di idrossido di potassio p . a .  3.5 . Soluzione di idrossido di potassio 1 N  3.6 . Soluzione di idrossido di potassio 0,5 N  3.7 . 1,2-dicloroetano p . a .  3.8 . Etere di petrolio , puro , punto di ebollizione 30 _ 50 * C . Se del caso , purificarlo nel seguente modo . Sbattere ml 1 000 di etere di petrolio ogni volta con ml 20 di acido solforico concentrato , fino a che l'acido resta incolore . Eliminare l'acido e lavare l'etere successivamente con ml 500 di acqua , due volte con ml 250 di una soluzione al 10 % di idrossido di sodio e tre volte con ml 500 di acqua . Eliminare la fase acquosa , essiccare l'etere per un'ora su carbone attivo e solfato di sodio anidro , filtrare e distillare .  3.9 . Ossido di alluminio standardizzato secondo Brockmann : calcinare per 8 ore a 750 * C , raffreddare in essiccatore e conservare in flacone di vetro scuro , con tappo smerigliato . Prima di utilizzarlo per la cromatografia , inumidirlo nel seguente modo : si introducono in una beuta di vetro scuro g 10 di ossido di alluminio e ml 0,7 di acqua , si chiude ermeticamente e si scalda per 5 minuti a bagnomaria bollente agitando di tanto in tanto energicamente . Lasciare raffreddare , agitando . Verificare l'attività dell'ossido di alluminio cosi preparato sottoponendo all'analisi secondo 5.3 e 5.4 una quantità nota ( 500 UI ) di retinolo tipo ( 3.17 ) .  3.10 . Ossido di alluminio basico , I grado di attività .  3.11 . Etere etilico , puro . Eliminare i perossidi e le tracce di acqua a mezzo di cromatografia su colonna di ossido di alluminio basico ( 3.10 ) ( g 25 di ossido di alluminio per ml 250 di etere etilico ) .  3.12 . Soluzioni di etere di petrolio ( 3.8 ) al 4 % , 8 % , 12 % , 16 % e 20 % di etere etilico ( 3.11 ) .  3.13 . Soluzione di solfuro di sodio 0,5 M in glicerina al 70 % ( v/v ) , preparata a partire da solfuro di sodio p . a .  b ) impiegati esclusivamente per l'analisi dei prodotti del gruppo A  3.14 . Benzene p . a . , cristallizzabile  3.15 . Cloroformio p . a . Eliminare l'etanolo , il fosgene e le tracce di acqua a mezzo di cromatografia su colonna di ossido di alluminio basico ( 3.10 ) ( g 50 di ossido di alluminio per ml 200 di cloroformio ; conviene cromatografare una seconda volta i primi ml 50 di eluato ) .  3.16 . Reattivo di Carr-Price : agitare g 25 circa di tricloruro di antimonio p . a . ( conservato in essiccatore ) con ml 100 di cloroformio ( 3.15 ) fino a saturazione della soluzione . Un modico deposito di tricloruro di antimonio non disturba . Aggiungere ml 2 di anidride acetica p . a . Conservare in una bottiglia di vetro scuro con tappo smerigliato , in frigorifero . Si conserva per parecchie settimane .  3.17 . Retinolo tipo controllato spettrofotometricamente .  c ) impiegati esclusivamente per l'analisi dei prodotti del gruppo B  3.18 . Isopropanolo , per cromatografia  4 . Apparecchiatura  4.1 . Bagnomaria  4.2 . Apparecchio rotativo per evaporazione sotto vuoto provvisto di palloni di differenti capacità  4.3 . Colonne da cromatografia , in vetro ( lunghezza : mm 300 , diametro interno : circa mm 13 )  4.4 . Spettrofotometro con vaschette da mm 10 ( di quarzo nel caso di misure nell'UV )  4.5 . Lampada UV ; 365 nm  5 . Modo di operare  N . B . Tutte le operazioni debbono essere fatte in assenza d luce diretta ed impiegando vetreria scura  5.1 . Entità del campione  Prelevare una quantità di campione finemente macinato proporzionale al presunto contenuto in vitamina A , e cioè :  g 0,1-1,0 per i concentrati ( contenuti superiori a 20 000 UI/g ) ;  g 3,0-5,0 per le premiscele ( contenuti compresi tra 400 e 20 000 UI/g ) ;  g 10-20 per le miscele minerali ;  g 30 per i prodotti di cui al gruppo A .  Introdurre immediatamente la quantità di sostanze da sottoporre ad analisi in un pallone da ml 500 a collo smerigliato .  5.2 . Idrolisi ed estrazione ( 7 )  Aggiungere successivamente alla quantità di sostanza da sottoporre ad analisi ml 40 di etanolo ( 3.1 ) , ml 2 della soluzione di ascorbato di sodio ( 3.2 ) ( 8 ) , ml 10 della soluzione di idrossido di potassio ( 3.4 ) e ml 2 della soluzione di solfuro di sodio ( 3.13 ) . Scaldare il pallone , innestato su un refrigerante a ricadere , per 30 min a 70-80 * C , raffreddandolo poi sotto acqua corrente . Aggiungere ml 50 di etanolo ( 3.1 ) e ml 100 ( prelevato con pipetta tarata ) di 1,2-dicloroetano ( 3.7 ) . Agitare energicamente e travasare poi il supernatante in un imbuto separatore . Aggiungere , nell'imbuto separatore , ml 150 della soluzione di idrossido di potassio ( 3.5 ) , agitare per 10 secondi e lasciare riposare fino alla separazione delle fasi . Raccogliere la fase dicloroetanica ( fase inferiore ) in un altro imbuto separatore , aggiungere ml 40 della soluzione di idrossido di potassio ( 3.6 ) , agitare per 10 secondi e lasciare riposare fino alla separazione delle fasi . Raccogliere la fase dicloroetanica in imbuto separatore e lavarla 6-8 volte con ml 40 di acqua per volta , fino alla scomparsa della reazione alcalina ( saggio alla fenolftaleina ) . Raccogliere la fase dicloroetanica ed eliminare le ultime tracce di acqua a mezzo di strisce di carta da filtro .  Evaporare a secco una parte aliquota della soluzione , su bagnomaria alla temperatura di 40 * C e sotto vuoto . Riprendere rapidamente il residuo con ml 5 di etere di petrolio ( 3.8 ) .  Per i prodotti di cui al gruppo A cromatografare come descritto al punto 5.3.1 .  Per i prodotti di cui al gruppo B , trasferire la soluzione in un pallone tarato da ml 50 , portare a volume con etere di petrolio ( 3.8 ) , omogeneizzare e misurare la densità ottica come indicato al punto 5.4.2 .  5.3 . Cromatografia  5.3.1 . Prodotti appartenenti al gruppo A  Riempire un tubo per cromatografia ( 4.3 ) , fino all'altezza di mm 200 , di g 10 di ossido di alluminio , preparato secondo ( 3.9 ) , precedentemente impregnato con etere di petrolio ( 3.8 ) . Introdurre nella colonna la soluzione ottenuta in 5.2 e aggiungere immediatamente ml 20 di etere di petrolio ( 3.8 ) . Eluire successivamente con aliquote di ml 10 delle soluzioni di etere di petrolio al 4 % , 8 % , 12 % , 16 % e 20 % di etere etilico ( 3.12 ) , sotto vuoto parziale o sotto pressione in modo che la velocità di eluizione sia di 2 a 3 gocce al secondo .  Il carotene è eluito per primo ( 9 ) . Il retinolo è generalmente eluito a mezzo della soluzione di etere di petrolio al 20 % di etere etilico ( 3.12 ) . L'eluizione viene controllata in luce ultravioletta ( irradiando per brevissimo tempo la colonna con una lampada a mercurio ) . La banda fluorescente del retinolo è nettamente distinta dalle bande gialle che la seguono e che sono le xantofille . Raccogliere la frazione di eluato che contiene il retinolo in una erlenmeyer .  5.3.2 . Prodotti appartenenti al gruppo B  La cromatografia viene effettuata solo se le misure della densità ottica ottenute secondo 5.4.2 non sono conformi alle prescrizioni indicate in 5.4.2 .  Se è necessaria la cromatografia , introdurre nella colonna cromatografica una parte aliquota della soluzione in etere di petrolio ottenuta in 5.2 , contenente all'incirca 500 UI di retinolo e cromatografare nel modo indicato in 5.3.1 .  5.4 . Misure della densità ottica  5.4.1 . Prodotti appartenenti al gruppo A  Portare a secco sotto vuoro l'eluato contenente il retinolo , ottenuto in 5.3.1 . Riprendere il residuo con ml 2 di benzene ( 3.14 ) . Prelevare ml 0,3 di questa soluzione ed aggiungervi ml 3 del reattivo di Carr-Price ( 3.16 ) . Si sviluppa una colorazione blu . Misurare la densità ottica allo spettrofotometro a 610 nm , esattamente 30 secondi dopo l'inizio della reazione . Determinare il contenuto in retinolo riferendosi ad una curva di taratura ottenuta a partire da soluzioni benzeniche di retinolo tipo a concentrazioni crescenti trattate con il reattivo di Carr-Price ( da 2 a 16 UI di retinolo tipo ( 3.17 ) in ml 0,3 di benzene ( 3.14 ) + ml 3 di reattivo di Carr-Price ( 3.16 ) . La curva di taratura deve essere periodicamente ricontrollata sulla scorta dello standard e della soluzione del reattivo di Carr-Price preparato di fresco .  5.4.2 . Prodotti appartenenti al gruppo B  Prelevare una parte aliquota della soluzione in etere di petrolio ottenuta in 5.2 e contenente all'incirca 200 UI di retinolo . Portare a secco sotto vuoto e riprendere il residuo con ml 25 di isopropanolo ( 3.18 ) . Misurarne la densità ottica allo spettrofotometro a 325 , 310 e 334 nm . Il massimo di assorbimento è a 325 nm . Il contenuto in retinolo della soluzione viene calcolato nel seguente modo :  E325 18,30 = UI di vitamina A/ml  I rapporti tra le densità ottiche  E310 : E325 ed E334 : E325  debbono essere di 6 : 7 = 0,857 .  Se uno di questi rapporti si scosta sensibilmente da questo valore ( * 0,830 o * 0,880 ) , la determinazione delle densità ottiche deve essere preceduta dalla cromatografia secondo le modalità indicate in 5.3.2 . Se la misura delle densità ottiche effettuata dopo cromatografia fa rilevare che i rapporti sopraddetti si scostano ancora sensibilimente dal valore di 0,857 ( * 0,830 o * 0,880 ) la determinazione deve essere effettuata seguendo il procedimento previsto per i prodotti del gruppo A .  6 . Calcolo del risultato  Calcolare il contenuto in retinolo del campione tenendo conto del peso della sostanza sottoposta ad analisi e delle diluizioni effettuate nel corso della analisi . Esprimere i risultati in UI di retinolo per kg .  Ripetibilità  La differenza tra i risultati di due determinazioni effettuate in parallelo sullo stesso campione non deve superare :  _ 20 % , in valore relativo , per i contenuti inferiori a 75 000 UI/kg ;  _ 15 000 UI per i contenuti compresi tra 75 000 e 150 000 UI/kg ;  _ 10 % , in valore relativo , per i contenuti compresi tra 150 000 e 250 000 UI/kg ;  _ 25 000 UI per i contenuti compresi tra 250 000 e 500 000 UI/kg ;  _ 5 % , in valore relativo , per i contenuti che superano le 500 000 UI/kg .  2 . DETERMINAZIONE DELLA TIAMINA ( ANEURINA , VITAMINA B1 )  1 . Scopo e campo di applicazione  Il metodo permette di determinare il contenuto in tiamina ( aneurina , vitamina B1 ) dei mangimi , dei concentrati e delle premiscele . Il limite inferiore della determinazione è di 5 ppm .  2 . Principio  Il campione viene trattato a caldo con acido solforico diluito e poi idrolizzato per via enzimatica . La soluzione ottenuta è sottoposta ad ossidazione alcalina . Il tiocromo che cosi si forma è estratto con isobutanolo e determinato per fluorimetria .  3 . Reattivi  3.1 . Soluzione tipo di tiamina a 100 ug/ml : sciogliere mg 112,3 di cloridrato di tiamina purissimo , precedentemente seccato sotto vuoto fino a peso costante , in ml 1000 di acido solforico 0,2 N ( 3.2 ) . Al freddo e lontano dalla luce diretta questa soluzione si conserva per un mese .  3.2 . Acido solforico 0,2 N  3.3 . Disolfito di sodio , puro  3.4 . Soluzione al 20 % ( p/v ) di ferricianuro di potassio p . a .  3.5 . Soluzione al 25 % ( p/v ) di idrossido di potassio p . a .  3.6 . Miscela ossidante : mescolare ml 2 della soluzione di ferricianuro di potassio ( 3.4 ) a ml 48 della soluzione di idrossido di potassio ( 3.5 ) . Questa miscela non si conserva più di 4 ore .  3.7 . Isobutanolo , p . a .  3.8 . Soluzione di acetato di sodio p . a . 2,5 N  3.9 . Preparazione multienzimatica contenente proteasi , fosfatasi e amilasi ( per esempio , clarasi )  3.10 . Etanolo al 96 % ( v/v )  4 . Apparecchiatura  4.1 . Bagnomaria  4.2 . Centrifuga ( 3 500 giri/min ) con tubi di ml 30-50 di capacità , provvisti di tappo smerigliato  4.3 . Fluorimetro  5 . Modo di operare  5.1 . Idrolisi enzimatica  Mettere in due palloni tarati da ml 250 e denominati A e B una medesima quantità di materiale prelevato dal campione finemente macinato e contenenti circa ug 100 di tiamina ; aggiungere ml 125 di acido solforico ( 3.2 ) . Al solo pallone A aggiungere , inoltre , ml 1 della soluzione tipo ( 3.1 ) ( tipo interno ) .  Agitare energicamente , porre i palloni in un bagnomaria bollente e tenerveli per 15 minuti agitandoli di tanto in tanto . Lasciare raffreddare fino a 45 * C circa . Aggiungere in ogni pallone ml 20 della soluzione di acetato di sodio ( 3.8 ) e g 0,5 della preparazione multienzimatica ( 3.9 ) ; lasciare riposare per 20 minuti a temperatura ambiente . Aggiungere ml 20 della soluzione di acetato di sodio ( 3.8 ) , portare a volume con acqua , omogeneizzare e filtrare . Raccogliere i filtrari A e B dopo averne scortato i primi ml 15 . Preparare le seguenti soluzioni .  5.1.1 . Soluzione tipo T  Porre in un tubo da centrifuga ( 4.2 . ) ml 5 del filtrato A e mg 10 circa di disolfito di sodio ( 3.3 . ) . Immergere il tubo in un bagnomaria bollente per 15 minuti e lasciarlo poi raffreddare fino a temperatura ambiente .  5.1.2 . Soluzioni A ( tipo interno ) e B ( campione )  Introdurre in un tubo da centrifuga ( 4.2 ) ml 5 del filtrato A ed in altro tubo ( 4.2 ) ml 5 del filtrato B .  5.2 . Ossidazione  Aggiungere alle soluzioni T , A e B ml 5 della miscela ossidante ( 3.6 ) , dopo un minuto , ml 10 di isobutanolo ( 3.7 ) . Tappare i tubi e agitare energicamente per 5 secondi . Lasciare riposare per un minuto e centrifugare per separare le fasi . Prelevare da ogni tubo ml 5 della fase superiore isobutanolica , introdurli rispettivamente in altrettanti palloni tarati da ml 25 , portare a volume con etanolo ( 3.10 ) ed omogeneizzare ( = estratti T , A e B ) .  5.3 . Misurazione della fluorescenza  Effettuare le misure alla lunghezza d'onda alla quale il fluorimetro dà una risposta ottimale alla fluorescenza del tiocromo . Irradiare a circa 365 nm . Azzerare lo strumento con l'estratto T . Misurare la intensità della fluorescenza degli estratti A e B .  6 . Calcolo del risultato  Il contenuto in ug di tiamina per kg di campione è dato dalla fomula :  dove  a = intensità della fluorescenza dell'estratto A ( tipo interno )  b = intensità della fluorescenza dell'estratto B ( campione )c = peso in g delle quantità di sostanza sottoposte all'analisi  d = quantità di tiamina , in ug , aggiunta alla quantità di sostanza sottoposta all'analisi ( tipo interno )  Ripetibilità  La differenza tra i risultati di due determinazioni effettuate in parallelo sullo stesso campione non deve superare :  _ 10 % , in valore relativo , per i contenuti inferiori a 500 mg/kg  _ 5 % , in valore relativo , per i contenuti uguali o superiori a 500 mg/kg .  3 . DETERMINAZIONE DELL'ACIDO ASCORBICO E DELL'ACIDO DEIDROASCORBICO ( VITAMINA C )  1 . Scopo e campo di applicazione  Il metodo permette di determinare la somma degli acidi ascorbico e deidroascorbico ( vitamina C ) nei mangimi , nei concentrati e nelle premiscele . Il limite inferiore della determinazione è di 5 ppm . I prodotti sono suddivisi in due gruppi a seconda del loro presunto contenuto in vitamina C :  Gruppo A : contenuto inferiore a g 10/kg  Gruppo B : contenuto uguale o superiore a g 10/kg  2 . Principio  Il campione , posto in sospensione in una soluzione diluita di acido metafosforico , è estratto con cloroformio . La fase acquosa viene trattata con una soluzione di 2,6-diclorofenol-indofenolo , per trasformare l'acido ascorbico in acido deidroascorbico , e poi con una soluzione di 2,4-dinitrofenilidrazina . L'idrazone che si forma è estratto con una miscela di acetato di etile , acido acetico glaciale e acetone . La soluzione viene cromatografata su colonna di gel di silice , l'eluato è evaporato a secco ed il residuo viene disciolto in acido solforico diluito . La densità ottica della soluzione viene determinata con il fotometro a 509 nm .  Per i prodotti del gruppo A , l'eluato , ottenuto per cromatografia su colonna , viene inoltre cromatografato su strato sottile per isolare l'idrazone .  3 . Reattivi  3.1 . Soluzione tipo allo 0,05 % di acido L-ascorbico : sciogliere mg 50 di acido L-ascorbico p . a . in circa ml 20 della soluzione di acido metafosforico ( 3.2 ) e portare a ml 100 con acqua . Da prepararsi al momento dell'uso .  3.2 . Soluzioni al 10 % ( p/v ) di acido metafosforico : sciogliere in acqua g 200 di acido metafosforico p . a . , sminuzzati in mortaio , e portare a ml 2000 con acqua . Conserva al 4 * C . Stabile per una settimana .  3.3 . Cloroformio p . a .  3.4 . Soluzione allo 0,5 % ( p/v ) di 2,6-diclorofenol-indofenolo p.a . Da prepararsi al momento dell'uso  3.5 . Coadiuvanti per la filtrazione ( S . ed S . n . 121 analoghi )  3.6 . Soluzione acida al 2 % ( p/v ) di 2,4-dinitrofenilidrazina : sciogliere g 2 di 2,4-dinitrofenilidrazina in ml 100 di acido solforico diluito ( ml 25 di acido solforico p . a . , d : 1,84 , portati a ml 10 con acqua ) . A freddo questa soluzione si conserva una settimana .  3.7 . Azoto oppure  3.8 . Anidride carbonica , in bombole  3.9 . Miscela di acetato di etile p . a./acido acetico glaciale/acetone p . a . 96/2/2 in volume  3.10 . Miscela di diclorometano p . a./acido acetico glaciale : 97 /* 3 in volume  3.11 . Gel di silice , granulometria : mm 0,05-0,2  3.12 . Gel di silice H , secondo Stahl , per cromatografia su strato sottile  3.13 . Acido solforico diluito : porre ml 105 di acqua in un pallone tarato da ml 200 e portare a volume con acido solforico p . a . , d : 1,84  3.14 . Solvente di eluizione per cromatografia su strato sottile : miscelare ml 75 di etere etilico p . a . , ml 25 di acetato di etile p . a . e ml 4,0 di acido acetico al 96 % ( p/v ) . Rinnovarlo dopo 2-3 cromatografie .  4 . Apparecchiatura  4.1 . Bagno termostatico regolato a + 20 * C  4.2 . Centrifuga ( g/m 3 500 ) con tubi di ml 40-50 di capacità , provvisti di tappo smerigliato  4.3 . Apparecchio rotativo per evaporazione sotto vuoto provvisto di palloni da ml 250 .  4.4 . Colonne da cromatografia , in vetro ( altezza : mm 100 , diametro interno mm 20 ) provviste di setto poroso in vetro ( ad esempio tubi di Allihn )  4.5 . Spettrofotometro o colorimetro a filtri , con vaschette di mm 10 di spessore ,  4.6 . Apparecchiatura per cromatografia su strato sottile , con lastre di gel di silice ( 3.12 ) spessore dello strato mm 0,5-0,6 ( vanno bene le lastre pronte per l'impiego ) . Seccare le lastre per 2h30-3 ore in stufa a 120-130 * C .  Lasciare raffreddare e conservare poi in essiccatore almeno 24 ore prima di utilizzarle .  4.7 . Stufa a secco regolata a 120-130 * C .  5 . Modo di procedere  5.1 . Estrazione  Introdurre in due palloni tarati A e B da ml 250 , provvisti di tappo smerigliato , quantità identiche di campione finemente macinato , contenenti circa 200 *g di vitamina C . Aggiungere solo nel pallone A ml 0,4 della soluzione tipo di vitamina C ( 3.1 ) ed omogeneizzare scuotendo leggermente ( tipo interno ) .  Aggiungere in ogni pallone ml 30 di cloroformio ( 3.3 ) e ml 25 della soluzione di acido metafosforico ( 3.2 ) a 4 * C . Agitare brevemente e lasciare poi riposare per 10-15 minuti . Aggiungere ml 25 di acqua , tappare bene i palloni , agitare energicamente per 10 secondi e lasciare riposare per 10-15 minuti nel bagno termostatico ( 4.1 ) . Centrifugare per separare la fase acquosa da quella cloroformica . Proseguire le operazioni simultaneamente sugli estratti acquosi A ( tipo interno ) e B , come descritto qui di seguito .  5.2 . Ossidazione  Prelevare con una pipetta tarata ml 40 della soluzione acquosa sovrastante ( leggermente torbida ) ottenuta in 5.1 , introdurla in un provettone a tappo smerigliato , aggiungervi ml 0,5-1 della soluzione di 2,6-diclorofenolindofenolo ( 3.4 ) e mescolare . Si forma una colorazione rossa , che deve persistere almeno 15 minuti . Aggiungere poi mg 300 circa di coadiuvante della filtrazione ( 3.5 ) , agitare e filtrare su un filtro a pieghe asciutto . Il filtrato puo non essere limpido .  5.3 . Reazione con la 2,4-dinitrofenilidrazina ed estrazione dell'idrazone  Prelevare con una pipetta tarata ml 10 del filtrato ottenuto in 5.2 , introdurli in un tubo da centrifuga ( 4.2 ) , aggiungere ml 2 della soluzione di 2,4-dinitrofenilidrazina ( 3.6 ) e mescolare . Fare passare rapidamente nel tubo una corrente di azoto ( 3.7 ) o di anidride carbonica ( 3.8 ) , tappare il tubo ed immergerlo per circa 15 ore ( una notte ) nel bagno termostatico ( 4.1 ) .  Aggiungere poi ml 3 di acqua , ml 20 della miscela acetato di etile/acido acetico glaciale/acetone ( 3.9 ) e mg 800 circa di coadiuvante della filtrazione ( 3.5 ) .  Tappare il tubo , agitare energicamente per 30 secondi e centrifugare . Introdure ml 15 della fase superiore in un pallone da evaporazione ed evaporare a pressione ridotta nell'evaporatore rotativo ( 4.3 ) , fino ad ottenere un residuo oleoso . Sciogliere il residuo in ml 2 della miscela acetato di etile/acido acetico glaciale/acetone ( 3.9 ) riscaldando a 50 * C ; lasciare raffreddare , aggiungere ml 10 della miscela diclorometano/acido acetico glaciale ( 3.10 ) e mescolare .  5.4 . Cromatografia su colonna  Riempire una colonna per cromatografia ( 4.4 ) , fino all'altezza di mm 30 , di miscela diclorometano/acido acetico glaciale ( 3.10 ) . Mettere in sospensione ( agitando energicamente ) in ml 30 della miscela diclorometano/acido acetico glaciale ( 3.10 ) g 5 di gel di silice ( 3.11 ) ; versare la sospensione nella colonna . Lasciare depositare e assestare poi sotto debole pressione di azoto ( 3.7 ) .  Versare nella colonna la soluzione ottenuta in 5.3 , lavare il pallone con una piccola quantità della miscela diclorometano/acido acetico glaciale ( 3.10 ) e versare nella colonna ; riempire poi quest'ultima con la miscela ( 3.10 ) e proseguire il lavaggio della colonna con la stessa miscela ( 3-4 aliquote di ml 5 circa ) fino ad ottenere un eluato incolore . Eliminare la frazione di eluato colorata in giallo .  Eluire la zona rossastra che sta in testa alla colonna con la miscela acetato di etile/acido acetico glaciale/acetone ( 3.9 ) , raccogliere l'eluato ed evaporarlo a secco .  5.4.1 . Per i prodotti del gruppo A ( contenuti in vitamina C inferiori a g 10/kg ) , sciogliere il residuo in ml 2 della miscela acetato di etile/acido acetico glaciale/acetone ( 3.9 ) e procedere immediatamente alla cromatografia su strato sottile come descritto in 5.5 .  5.4.2 . Per i prodotti del gruppo B ( contenuti in vitamina C uguali o superiori a g 10/kg ) , riprendere il residuo oleoso con ml 4,0 di acido solforico diluito ( 3.13 ) , agitare energicamente per scioglierlo completamente e provvedere alla misurazione della densità ottica come descritto in 5.6 .  5.5 . Cromatografia su strato sottile  Effettuare in doppio le operazioni indicate qui appresso . Deporre sulla lastra ( 4.6 ) sotto forma lineare ml 0,5 della soluzione ottenuta in 5.4.1 . Sviluppare per 20 minuti almeno col solvente di eluizione ( 3.14 ) , in vaschetta saturata , fino alla separazione netta della zona dell'idrazone colorato in rosa . Lasciare asciugare all'aria . Delimitare la zona rosa , raschiarla con una spatola e trasferire quantitativamente la massa polverulenta in una colonna per cromatografia ( 4.4 ) .  Eluire successivamente una volta con ml 2 e 2 volte con ml 1,5 della miscela acetato di etile/acido acetico glaciale/acetone ( 3.9 ) . Raccogliere l'eluato in un piccolo pallone ( l'ultima frazione deve essere incolore ) . Evaporare a secco , riprendere il residuo oleoso con ml 4,0 di acido solforico diluito ( 3.13 ) , agitare energicamente per sciogliere completamente il residuo e procedere alla misurazione della densità ottica .  5.6 . Misura della densità ottica  Misurare la densità ottica con il fotometro a 509 nm , 20-30 minuti dopo aver sciolto il residuo in acido solforico . Effettuare le misure in raffronto con l'acido solforico diluito ( 3.13 ) .  5.7 . Prova in bianco  Eseguire una prova in bianco applicando lo stesso modo di operare , in assenza del campione .  6 . Calcolo del risultato  Il contenuto in g di vitamina C per kg di campione è dato dalla formula : d . b / ( a - b ) c ( c - a ) per 2 / ( b - c ) per 10d  dove  a = densità ottica del bianco  b = densità ottica della soluzione del tipo interno  c = densità ottica della soluzione in esame  d = peso in g della quantità di sostanza sottoposta ad analisi .  Ripetibilità  La differenza tra i risultati di due determinazioni effettuate in parallelo sullo stesso campione non debbono superare :  _ 10 % , in valore relativo , per i contenuti in vitamina C inferiori a g 10 per kg :  _ 5 % , in valore relativo , per i contenuti uguali o superiori a g 10/kg .


Avis juridique important

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31982L0891

Sesta direttiva 82/891/CEE del Consiglio, del 17 dicembre 1982, basata sull'articolo 54, paragrafo 3, lettera g), del Trattato e relativa alle scissioni delle società per azioni

Gazzetta ufficiale n. L 378 del 31/12/1982 pag. 0047 - 0054 edizione speciale finlandese: capitolo 17 tomo 1 pag. 0041  edizione speciale spagnola: capitolo 17 tomo 1 pag. 0111  edizione speciale svedese/ capitolo 17 tomo 1 pag. 0041  edizione speciale portoghese: capitolo 17 tomo 1 pag. 0111

++++SESTA DIRETTIVA DEL CONSIGLIO  del 17 dicembre 1982  basata sull ' articolo 54 , paragrafo 3 , lettera g ) , del trattato e relativa alle scissioni delle società per azioni  ( 82/891/CEE )  IL CONSIGLIO DELLE COMUNITÀ EUROPEE ,  visto il trattato che istituisce la Comunità economica europea , in particolare l ' articolo 54 , paragrafo 3 , lettera g ) ,  vista la proposta della Commissione ( 1 ) ,  visto il parere del Parlamento europeo ( 2 ) ,  visto il parere del Comitato economico e sociale ( 3 ) ,  considerando che il coordinamento previsto dall ' articolo 54 , paragrafo 3 , lettera g ) , e dal programma generale per la soppressione delle restrizioni alla libertà di stabilimento ( 4 ) è stato iniziato con la direttiva 68/151/CEE ( 5 ) ;  considerando che tale coordinamento è stato proseguito con la direttiva 77/91/CEE ( 6 ) , per quanto riguarda la costituzione della società per azioni nonchù la salvaguardia e le modificazioni del capitale sociale della stessa , con la direttiva 78/660/CEE ( 7 ) , per quanto riguarda i conti annuali di taluni tipi di società , e con la direttiva 78/855/CEE ( 8 ) , per quanto riguarda le fusioni delle società per azioni ;  considerando che la direttiva 78/855/CEE ha disciplinato soltanto le fusioni delle società per azioni e alcune operazioni assimilate ; che tuttavia la proposta della Commissione contemplava altresì l ' operazione di scissione ; che i pareri del Parlamento europeo e del Comitato economico e sociale erano anche a favore di una regolamentazione di tali operazioni ;  considerando che , a causa delle simiglianze esistenti tra le operazioni di fusione e di scissione , il rischio che le garanzie fornite nei confronti delle fusioni dalla direttiva 78/855/CEE siano eluse potrà essere evitato soltanto introducendo una protezione equivalente in caso di scissione ;  considerando quindi che la tutela degli interessi dei soci e dei terzi richiede un coordinamento delle legislazioni degli Stati membri riguardanti le scissioni di società per azioni , nella misura in cui gli Stati membri autorizzano tale operazione ;  considerando che nel quadro di questo coordinamento è particolarmente importante assicurare agli azionisti delle società partecipanti alla scissione un ' informazione adeguata e quanto più obiettiva possibile , nonchù garantire un ' appropriata tutela dei loro diritti ;  considerando che la tutela dei diritti dei lavoratori in caso di trasferimenti di imprese , di stabilimenti o di parti di stabilimenti è attualmente disciplinata dalla direttiva 77/187/CEE ( 9 ) ;  considerando che i creditori , obbligazionisti o no , ed i portatori di altri titoli delle società partecipanti alla scissione devono essere tutelati onde evitare che la realizzazione della fusione li leda ;  considerando che la pubblicità prevista dalla direttiva 68/151/CEE deve essere estesa alle operazioni relative alla scissione affinchù i terzi ne siano sufficientemente informati ;  considerando che è necessario estendere le garanzie previste in favore dei soci e dei terzi , nel quadro della procedura di scissione , a talune operazioni giuridiche che , in certi settori essenziali , hanno delle caratteristiche analoghe a quelle della scissione affinchù questa tutela non possa essere elusa ;  considerando che , in vista di garantire la sicurezza giuridica nelle relazioni sia fra le società partecipanti alla scissione che fra queste ed i terzi nonchù fra gli azionisti , bisogna limitare i casi di nullità e stabilire da una parte il principio della sanatoria ogni volta che essa è possibile e , dall ' altra , un termine breve per l ' esercizio dell ' azione di nullità ,  HA ADOTTATO LA PRESENTE DIRETTIVA :  Articolo 1  1 . Se gli Stati membri permettono per le società di cui all ' articolo 1 , paragrafo 1 , della direttiva 78/855/CEE , soggette alla loro legislazione , l ' operazione di scissione mediante incorporazione , definita all ' articolo 2 della presente direttiva , essi sottopongono tale operazione al capitolo I della presente direttiva .  2 . Se gli Stati membri permettono per le società di cui al paragrafo 1 l ' operazione di scissione tramite costituzione di nuove società , definita all ' articolo 21 , paragrafo 1 , essi sottopongono tale operazione al capitolo II .  3 . Se gli Stati membri permettono per le società di cui al paragrafo 1 l ' operazione con la quale una scissione mediante incorporazione , definita all ' articolo 2 , paragrafo 1 , è combinata con una scissione mediante costituzione di nuove società , definita all ' articolo 21 , paragrafo 1 , essi sottopongono tale operazione al capitolo I ed all 'articolo 22 .  4 . È d ' applicazione l ' articolo 1 , paragrafi 2 e 3 , della direttiva 78/855/CEE .  CAPITOLO I  Scissione mediante incorporazione  Articolo 2  1 . Ai sensi della presente direttiva si intende per scissione mediante incorporazione l ' operazione con la quale una società , tramite uno scioglimento senza liquidazione , trasferisce a più società l ' intero patrimonio attivo e passivo mediante l ' attribuzione agli azionisti della società scissa di azioni delle società beneficiarie dei conferimenti risultanti dalla scissione , in seguito denominate « società beneficiarie » , e eventualmente di un conguaglio in denaro non superiore al 10 % del valore nominale delle azioni attribuite o , in mancanza di valore nominale , del loro equivalente contabile .  2 . È d ' applicazione l ' articolo 3 , paragrafo 2 , della direttiva 78/855/CEE .  3 . Laddove la presente direttiva rinvia alla direttiva 78/855/CEE , l ' espressione « società partecipanti alla fusione » designa le società che partecipano alla scissione , l ' espressione « società incorporata » designa la società oggetto di scissione , l ' espressione « società incorporante » designa ciascuna delle società beneficiarie e l ' espressione « progetto di fusione » designa il progetto di scissione .  Articolo 3  1 . Gli organi di amministrazione o di direzione delle società partecipanti alla scissione redigono per iscritto un progetto di scissione .  2 . Il progetto di scissione indica almeno :  a ) il tipo , la denominazione e la sede sociale delle società partecipanti alla scissione ;  b ) il rapporto di cambio delle azioni e , eventualmente , l ' importo del conguaglio ;  c ) le modalità di assegnazione delle azioni delle società beneficiarie ;  d ) la data a decorrere dalla quale tali azioni danno diritto al dividendo , nonchù ogni modalità particolare relativa a tale diritto ;  e ) la data a decorrere dalla quale le operazioni della società scissa si considerano , dal punto di vista contabile , compiute per conto dell ' una o dell ' altra società beneficiaria ;  f ) i diritti accordati dalle società beneficiarie ai titolari di azioni fornite di diritti speciali e ai portatori di titoli diversi dalle azioni ovvero le disposizioni proposte nei loro confronti ;  g ) tutti i vantaggi particolari attribuiti agli esperti di cui all ' articolo 8 , paragrafo 1 , nonchù ai membri degli organi di amministrazione , di direzione , di vigilanza o di controllo delle società partecipanti alla scissione ;  h ) la descrizione e la ripartizione esatte degli elementi del patrimonio attivo e passivo da trasferire a ciascuna delle società beneficiarie ;  i ) la ripartizione tra gli azionisti della società scissa delle azioni delle società beneficiarie nonchù il criterio sul quale si basa tale ripartizione .  3 . a ) Se un elemento del patrimonio attivo non è attribuito nel progetto di scissione e l ' interpretazione di quest ' ultimo non permette di deciderne la ripartizione , questo elemento o il suo controvalore è ripartito tra tutte le società beneficiarie proporzionalmente all ' attivo netto attribuito a ciascuna di dette società nel progetto di scissione .  b ) Se un elemento del patrimonio passivo non è attribuito nel progetto di scissione e l ' interpretazione di quest ' ultimo non permette di deciderne la ripartizione , ciascuna delle società beneficiarie ne è solidalmente responsabile . Gli Stati membri possono prevedere che questa responsabilità solidale sia limitata all ' attivo netto attribuito a ciascuna società beneficiaria .  Articolo 4  Per ciascuna delle società partecipanti alla scissione , il progetto di scissione deve essere reso pubblico secondo le modalità previste dalla legislazione di ciascuno Stato membro , conformemente all ' articolo 3 della direttiva 68/151/CEE ( 10 ) , almeno un mese prima della data di riunione dell ' assemblea generale che deve deliberare sul progetto di scissione .  Articolo 5  1 . La scissione deve essere approvata per lo meno dall ' assemblea generale di ciascuna delle società partecipanti alla scissione . L ' articolo 7 della direttiva 78/855/CEE è applicabile per quanto riguarda la maggioranza richiesta per tali decisioni , la loro portata e la necessità di una votazione separata .  2 . Se le azioni delle società beneficiarie sono attribuite agli azionisti della società scissa non proporzionalmente ai loro diritti nel capitale di tale società , gli Stati membri possono prevedere che gli azionisti minoritari di quest ' ultima possano esercitare il diritto di far acquistare le loro azioni . In questo caso hanno il diritto di ottenere una contropartita corrispondente al valore delle loro azioni . In caso di disaccordo su questa contropartita , essa deve poter essere stabilita da un giudice .  Articolo 6  La legislazione di uno Stato membro può non imporre la deliberazione di approvazione della scissione da parte dell ' assemblea generale di una società beneficiaria se sono soddisfatte le seguenti condizioni :  a ) la pubblicità prescritta all ' articolo 4 è fatta , per la società beneficiaria , almeno un mese prima della data di riunione dell ' assemblea generale della società scissa che deve deliberare sul progetto di scissione ;  b ) tutti gli azionisti della società beneficiaria hanno il diritto , almeno un mese prima della data di cui alla lettera a ) , di prendere visione , presso la sede sociale di tale società , dei documenti indicati nell ' articolo 9 , paragrafo 1 ;  c ) uno o più azionisti della società beneficiaria che dispongono di azioni per una percentuale minima del capitale sottoscritto devono avere il diritto di ottenere la convocazione di un ' assemblea generale della società beneficiaria che deve deliberare sulla scissione . Tale percentuale minima non può essere fissata a più del 5 % . Tuttavia , gli Stati membri possono prevedere che le azioni senza diritto di voto siano escluse dal calcolo di questa percentuale .  Articolo 7  1 . Gli organi di amministrazione o di direzione di ciascuna delle società partecipanti alla scissione redigono ciascuno una relazione scritta particolareggiata che illustra e giustifica , sotto il profilo giuridico ed economico , il progetto di scissione e in particolare il rapporto di cambio delle azioni , nonchù il criterio per la loro ripartizione .  2 . La relazione indica le eventuali difficoltà particolari di valutazione .  Essa menziona inoltre l ' elaborazione della relazione riguardante la verifica dei conferimenti non in contanti di cui all ' articolo 27 , paragrafo 2 , della direttiva 77/91/CEE ( 11 ) , per le società beneficiarie , nonchù il registro presso il quale tale relazione dev ' essere depositata .  3 . Gli organi di direzione o di amministrazione della società scissa devono informare l ' assemblea generale della società scissa nonchù gli organi di direzione o di amministrazione delle società beneficiarie , affinchù informino l ' assemblea generale della loro società in merito ad ogni modifica importante del patrimonio attivo e passivo intervenuta tra la data di elaborazione del progetto di scissione e la data di riunione dell ' assemblea generale della società scissa che deve deliberare sul progetto di scissione .  Articolo 8  1 . Per ciascuna delle società partecipanti alla scissione , uno o più esperti indipendenti da queste , designati o abilitati da una autorità giudiziaria o amministrativa , esaminano il progetto di scissione e redigono una relazione scritta destinata agli azionisti . Tuttavia , la legislazione di uno Stato membro può prevedere la designazione di uno o più esperti indipendenti per tutte le società partecipanti alla scissione se tale designazione , su richiesta congiunta di tali società , è fatta da un ' autorità giudiziaria o amministrativa . Gli esperti possono essere , secondo la legislazione dei singoli Stati membri , persone fisiche o giuridiche ovvero società .  2 . Si applica l ' articolo 10 , paragrafi 2 e 3 , della direttiva 78/855/CEE .  3 . Gli Stati membri possono prevedere che la relazione sulla verifica dei conferimenti non in contanti , di cui all ' articolo 27 , paragrafo 2 , della direttiva 77/91/CEE , e la relazione sul progetto di scissione , di cui al paragrafo 1 del presente articolo siano redatte dallo stesso o dagli stessi esperti .  Articolo 9  1 . Almeno un mese prima della data di riunione dell ' assemblea generale che deve deliberare sul progetto di scissione , ogni azionista ha il diritto di prendere visione , presso la sede sociale , almeno dei documenti seguenti :  a ) il progetto di scissione ;  b ) i conti annuali , nonchù le relazioni di gestione degli ultimi tre esercizi delle società partecipanti alla scissione ;  c ) una situazione contabile riferita a una data che non deve essere anteriore al primo giorno del terzo mese precedente la data del progetto di scissione , qualora gli ultimi conti annuali si riferiscano ad un esercizio chiuso oltre sei mesi prima di tale data ;  d ) le relazioni degli organi di amministrazione o di direzione delle società partecipanti alla scissione previste all ' articolo 7 , paragrafo 1 ;  e ) le relazioni degli esperti previste all ' articolo 8 .  2 . La situazione contabile di cui al paragrafo 1 , lettera c ) , è redatta secondo gli stessi metodi e secondo gli stessi criteri di presentazione dell ' ultimo stato patrimoniale annuale .  Tuttavia la legislazione di uno Stato membro può prevedere :  a ) che non è necessario procedere ad un nuovo inventario reale ;  b ) che le valutazioni contenute nell ' ultimo stato patrimoniale sono modificate soltanto in ragione dei movimenti delle scritture contabili ; occorre peraltro tener conto :  - degli ammortamenti e accantonamenti provvisori ,  - delle modificazioni sostanziali del valore reale che non appaiono nelle scritture contabili .  3 . Copia integrale o , se lo desiderano , parziale dei documenti indicati al paragrafo 1 , deve essere rilasciata gratuitamente agli azionisti che ne facciano richiesta .  Articolo 10  Gli Stati membri possono permettere che non siano applicati l ' articolo 7 , l ' articolo 8 , paragrafi 1 e 2 , e l ' articolo 9 , paragrafo 1 , lettere c ) , d ) ed e ) , qualora tutti gli azionisti e i portatori di altri titoli che danno diritto a voto , delle società partecipanti alla scissione , vi abbiano rinunciato .  Articolo 11  La tutela dei diritti dei lavoratori di ciascuna delle società partecipanti alla scissione è disciplinata conformemente alla direttiva 77/187/CEE ( 12 ) .  Articolo 12  1 . Le legislazioni degli Stati membri devono prevedere un adeguato sistema di tutela degli interessi dei creditori delle società partecipanti alla scissione per i crediti che siano anteriori alla pubblicazione del progetto di scissione e che non siano ancora scaduti al momento della pubblicazione .  2 . A tal fine le legislazioni degli Stati membri prevedono , quanto meno , che tali creditori abbiano il diritto di ottenere adeguate garanzie , qualora le situazioni finanziarie della società scissa e della società cui sarà trasferito l ' obbligo conformemente al progetto di scissione rendano necessaria tale tutela e qualora detti creditori non dispongano già di tali garanzie .  3 . Nella misura in cui non sia stato soddisfatto un creditore della società alla quale è stato trasferito l ' obbligo , conformemente al progetto di scissione , le società beneficiarie sono solidalmente responsabili di questo obbligo . Gli Stati membri possono limitare questa responsabilità all ' attivo netto attribuito ad ogni società diversa da quella cui l ' obbligo è stato trasferito . Gli Stati membri possono non applicare il presente paragrafo , qualora conformemente all ' articolo 23 l ' operazione di scissione sia sottoposta al controllo di un ' autorità giudiziaria e qualora la maggioranza dei creditori , rappresentativa dei tre quarti dell ' importo dei crediti , o una maggioranza di una categoria di creditori della società scissa , rappresentativa dei tre quarti dell ' importo dei crediti , abbia rinunciato , in un ' assemblea tenuta conformemente all ' articolo 23 , paragrafo 1 , lettera c ) , ad invocare la responsabilità solidale .  4 . Si applica l ' articolo 13 , paragrafo 3 , della direttiva 78/855/CEE .  5 . Fatte salve le disposizioni relative all ' esercizio collettivo dei loro diritti , i paragrafi da 1 a 4 sono applicabili agli obbligazionisti delle società partecipanti alla scissione a meno che la scissione sia stata approvata dall ' assemblea degli obbligazionisti , se la legislazione nazionale la prevede , oppure dai singoli obbligazionisti .  6 . Gli Stati membri possono prevedere che le società beneficiarie siano vincolate solidalmente per gli obblighi della società scissa . In tal caso essi possono non applicare i paragrafi precedenti .  7 . Se uno Stato membro combina il sistema di tutela dei creditori di cui ai paragrafi da 1 a 5 con la responsabilità solidale delle società beneficiarie di cui al paragrafo 6 , esso può limitare questa responsabilità all ' attivo netto attribuito a ciascuna di queste società .  Articolo 13  I portatori di titoli diversi dalle azioni , forniti di diritti speciali , devono beneficiare , nelle società beneficiarie contro le quali tali titoli possono essere opposti conformemente al progetto di scissione , di diritti almeno equivalenti a quelli di cui beneficiavano nella società scissa , a meno che la modifica dei loro diritti sia stata approvata da una assemblea dei portatori di detti titoli , se la legislazione nazionale prevede questa assemblea , oppure dai singoli portatori di detti titoli , o anche a meno che tali portatori abbiano il diritto di ottenere il riscatto dei loro titoli .  Articolo 14  Se la legislazione di uno Stato membro non prevede per le scissioni un controllo preventivo di legittimità , giudiziario o amministrativo , ovvero se tale controllo non verte su tutti gli atti necessari alla scissione , si applica l ' articolo 16 della direttiva 78/855/CEE .  Articolo 15  Le legislazioni degli Stati membri determinano la data alla quale la scissione ha efficacia .  Articolo 16  1 . Per ognuna delle società partecipanti alla scissione , la scissione deve essere resa pubblica secondo le modalità previste dalla legislazione di ciascuno Stato membro , conformemente all ' articolo 3 della direttiva 68/151/CEE .  2 . Qualunque società beneficiaria può adempiere le formalità di pubblicità relativa alla società scissa .  Articolo 17  1 . La scissione produce ipso jure e simultaneamente e seguenti effetti :  a ) il trasferimento , tanto tra la società scissa e le società beneficiarie , quanto nei confronti dei terzi , dell ' intero patrimonio attivo e passivo della società scissa alle società beneficiarie ; questo trasferimento è fatto per parti conformemente alla ripartizione prevista dal progetto di scissione o dall ' articolo 3 , paragrafo 3 ;  b ) gli azionisti della società scissa divengono azionisti di una o delle società beneficiarie conformemente alla ripartizione prevista dal progetto di scissione ;  c ) la società scissa si estingue .  2 . Nessuna azione di una società beneficiaria è scambiata in sostituzione delle azioni della società scissa detenute :  a ) dalla società beneficiaria stessa o da una persona che agisce a proprio nome , ma per conto della società ;  b ) oppure dalla società scissa stessa o da una persona che agisce a proprio nome , ma per conto della società .  3 . Sono salve le legislazioni degli Stati membri che richiedono formalità particolari ai fini dell ' opponibilità ai terzi del trasferimento di taluni beni , diritti e obblighi apportati dalla società scissa . La o le società beneficiarie cui sono trasferiti tali beni , diritti o obblighi conformemente al progetto di scissione o all ' articolo 3 , paragrafo 3 , possono procedere esse stesse a tali formalità ; tuttavia la legislazione degli Stati membri può permettere alla società scissa di continuare a procedere a tali formalità durante un periodo limitato che non può essere fissato , salvo casi eccezionali , a più di sei mesi dopo la data in cui la scissione ha efficacia .  Articolo 18  Le legislazioni degli Stati membri disciplinano almeno la responsabilità civile nei confronti degli azionisti della società scissa , dei membri dell ' organo di amministrazione o di direzione di questa società in conseguenza di irregolarità di membri di detto organo commesse nella preparazione e nella realizzazione della scissione , nonchù la responsabilità civile degli esperti incaricati di redigere per questa società la relazione prevista dall ' articolo 8 in conseguenza di irregolarità commesse da detti esperti nell ' esercizio delle loro funzioni .  Articolo 19  1 . Le legislazioni degli Stati membri possono disciplinare il regime di nullità della scissione solo alle condizioni seguenti :  a ) la nullità dev ' essere dichiarata con sentenza ;  b ) una scissione efficace ai sensi dell ' articolo 15 può essere dichiarata nulla solo se è mancato il controllo preventivo di legittimità , giudiziario o amministrativo , oppure l ' atto pubblico , o se si è accertato che la deliberazione dell ' assemblea generale è nulla o annullabile in virtù del diritto nazionale ;  c ) l ' azione di nullità non può essere proposta decorsi sei mesi dalla data alla quale la scissione è opponibile a chi vuol far valere la nullità oppure se la nullità è stata sanata ;  d ) quando è ancora possibile eliminare l ' irregolarità suscettibile di provocare la nullità della scissione , il giudice competente assegna alle società interessate un termine di sanatoria ;  e ) la sentenza che dichiara la nullità della scissione è resa pubblica secondo le modalità previste dalla legislazione di ciascuno Stato membro , conformemente all ' articolo 3 della direttiva 68/151/CEE ;  f ) l ' opposizione di terzo , se prevista dalla legislazione di uno Stato membro , non può essere proposta oltre sei mesi dalla data in cui la sentenza è resa pubblica conformemente alla direttiva 68/151/CEE ;  g ) la sentenza che dichiara la nullità della scissione non pregiudica per sù stessa la validità degli obblighi delle società beneficiarie o degli obblighi assunti nei confronti di esse anteriori alla pubblicità della sentenza e posteriori alla data indicata all ' articolo 15 ;  h ) ciascuna delle società beneficiarie è responsabile degli obblighi sorti a suo carico dopo la data in cui la scissione ha preso effetto e prima della data in cui è stata pubblicata la decisione di nullità della scissione . Anche la società scissa è responsabile di tali obblighi ; gli Stati membri possono prevedere che tale responsabilità sia limitata all ' attivo netto attribuito alla società beneficiaria a carico della quale è sorto l ' obbligo .  2 . In deroga al paragrafo 1 , lettera a ) , la legislazione di uno Stato membro può anche far dichiarare la nullità della scissione da parte di un ' autorità amministrativa qualora sia possibile fare ricorso contro tale atto dinanzi ad un ' autorità giudiziaria . Le lettere b ) , d ) , e ) , f ) , g ) e h ) si applicano per analogia all ' autorità amministrativa . Questa procedura di nullità non potrà più essere intrapresa dopo la scadenza di un termine di sei mesi a decorrere dalla data di cui all ' articolo 15 .  3 . Sono salve le legislazioni degli Stati membri relative alla nullità di una scissione dichiarata in seguito ad un controllo della scissione diverso dal controllo preventivo di legittimità giudiziario o amministrativo .  Articolo 20  Se le società beneficiarie sono , nel loro insieme , titolari di tutte le azioni della società scissa e degli altri titoli della stessa che danno diritto di voto nell ' assemblea generale , gli Stati membri possono , fatto salvo l ' articolo 6 , non imporre l ' approvazione del progetto di scissione da parte dell ' assemblea generale della società scissa se sono soddisfatte almeno le condizioni seguenti :  a ) è fatta per ciascuna delle società che partecipano all ' operazione la pubblicità prescritta all ' articolo 4 , almeno un mese prima che l ' operazione sia produttiva di effetti ;  b ) tutti gli azionisti delle società che partecipano all ' operazione hanno il diritto , almeno un mese prima che l ' operazione sia produttiva di effetti , di prendere conoscenza nella sede sociale della loro società dei documenti indicati all ' articolo 9 , paragrafo 1 . L ' articolo 9 , paragrafi 2 e 3 , si applica ugualmente ;  c ) uno o più azionisti della società scissa che dispongono di azioni per una percentuale minima del capitale sottoscritto devono avere il diritto di ottenere la convocazione di un ' assemblea generale della società scissa perchù l ' assemblea deliberi sulla scissione . Questa percentuale minima non può essere fissata a più del 5 % . Tuttavia , gli Stati membri possono prevedere che le azioni senza diritto di voto siano escluse dal calcolo della percentuale ;  d ) in mancanza di convocazione dell ' assemblea generale della società scissa che deve deliberare sulla scissione , l ' informazione di cui all ' articolo 7 , paragrafo 3 , riguarda qualsiasi modifica importante del patrimonio attivo e passivo avvenuta dopo la data di compilazione del progetto di scissione .  CAPITOLO II  Scissione mediante costituzione di nuove società  Articolo 21  1 . Ai sensi della presente direttiva si intende per scissione mediante costituzione di nuove società l ' operazione con la quale una società , tramite il suo scioglimento senza liquidazione , trasferisce a più società di nuova costituzione l ' intero patrimonio attivo e passivo mediante l ' attribuzione agli azionisti della società scissa di azioni delle società beneficiarie e , eventualmente , di un conguaglio in danaro non superiore al 10 % del valore nominale delle azioni attribuite o , in mancanza di valore nominale , del loro equivalente contabile .  2 . È d ' applicazione l ' articolo 4 , paragrafo 2 , della direttiva 78/855/CEE .  Articolo 22  1 . Alla scissione mediante costituzione di nuove società sono applicabili gli articoli 3 , 4 , 5 e 7 , l ' articolo 8 , paragrafi 1 e 2 , gli articoli da 9 a 19 della presente direttiva , fatti salvi gli articoli 11 e 12 della direttiva 68/151/CEE . A tal fine l ' espressione « società partecipanti alla scissione » designa la società scissa e l ' espressione « società beneficiaria » designa ciascuna delle nuove società .  2 . Il progetto di scissione menziona , oltre alle indicazioni previste all ' articolo 3 , paragrafo 2 , il tipo , la denominazione e la sede sociale di ciascuna delle nuove società .  3 . Il progetto di scissione e , se sono oggetto di un atto separato , l ' atto costitutivo o il progetto di atto costitutivo e lo statuto o il progetto di statuto di ciascuna delle nuove società sono approvati dall ' assemblea generale della società scissa .  4 . Gli Stati membri possono prevedere che la relazione sulla verifica dei conferimenti non in contanti , conformemente all ' articolo 10 della direttiva 77/91/CEE , nonchù la relazione sul progetto di scissione , di cui all ' articolo 8 , paragrafo 1 , della presente direttiva , siano redatte dallo stesso o dagli stessi esperti .  5 . Gli Stati membri possono prevedere che non si applichino nù l ' articolo 8 , nù l ' articolo 9 per quanto concerne la relazione degli esperti qualora le azioni di ciascuna delle nuove società siano attribuite agli azionisti della società scissa proporzionalmente ai loro diritti nel capitale di tale società .  CAPITOLO III  Scissione soggetta al controllo dell ' autorità giudiziaria  Articolo 23  1 . Gli Stati membri possono applicare il paragrafo 2 se l ' operazione di scissione è soggetta al controllo di un ' autorità giudiziaria che ha il potere :  a ) di convocare l ' assemblea generale degli azionisti della società scissa al fine di deliberare sulla scissione ;  b ) di assicurarsi che gli azionisti di ciascuna società che partecipa alla scissione abbiano ricevuto o possano procurarsi almeno i documenti di cui all ' articolo 9 entro un termine che consenta loro di esaminarli in tempo utile prima della data della riunione dell ' assemblea generale della loro società che deve deliberare sulla scissione ; qualora uno Stato membro si avvalga della facoltà di cui all ' articolo 6 , il termine deve essere sufficiente per consentire agli azionisti delle società beneficiarie di esercitare i diritti che l ' articolo 6 summenzionato conferisce loro ;  c ) di convocare qualsiasi assemblea di creditori di ciascuna società che partecipa alla scissione per deliberare in merito alla stessa ;  d ) di assicurarsi che i creditori di ciascuna società che partecipa alla scissione abbiano ricevuto o possano procurarsi almeno il progetto di scissione entro un termine che consenta loro di esaminarlo in tempo utile prima della data di cui alla lettera b ) ;  e ) di approvare il progetto di scissione .  2 . Se l ' autorità giudiziaria costata che sono soddisfatte le condizioni di cui al paragrafo 1 , lettere b ) e d ) , e non è arrecato alcun pregiudizio agli azionisti e ai creditori , essa può dispensare le società che partecipano alla scissione dall ' applicazione :  a ) dell ' articolo 4 , purchù l ' adeguato sistema di tutela degli interessi dei creditori di cui all ' articolo 12 , paragrafo 1 , copra tutti i crediti , indipendentemente dalla data a cui essi risalgono ;  b ) delle condizioni di cui all ' articolo 6 , lettere a ) e b ) , qualora uno Stato membro si avvalga della facoltà prevista in detto articolo ;  c ) dell ' articolo 9 per quanto concerne il termine e le modalità fissate per permettere agli azionisti di prendere conoscenza dei documenti a cui detto articolo si riferisce .  CAPITOLO IV  Altre operazioni assimilate alla scissione  Articolo 24  Quando la legislazione di uno Stato membro permette , per una delle operazioni di cui all ' articolo 1 , che il conguaglio in contanti sia superiore al 10 % , si applicano i capitoli I , II e III .  Articolo 25  Quando la legislazione di uno Stato membro permette una delle operazioni di cui all ' articolo 1 , senza che la società scissa si estingua , sono applicabili i capitoli I , II e III , salvo l ' articolo 17 , paragrafo 1 , lettera c ) .  CAPITOLO V  Disposizioni finali  Articolo 26  1 . Gli Stati membri mettono in vigore le disposizioni legislative , regolamentari e amministrative necessarie per conformarsi alla presente direttiva anteriormente al 1° gennaio 1986 , semprechù a questa data essi permettano operazioni cui si applica la presente direttiva . Essi ne informano immediatamente la Commissione .  2 . Se uno Stato membro , dopo la data prevista al paragrafo 1 , permette l ' operazione di scissione , esso mette in vigore le disposizioni di cui al paragrafo 1 alla data in cui permette tale operazione . Esso ne informa immediatamente la Commissione .  3 . Tuttavia può essere previsto un termine di cinque anni a decorrere dall ' entrata in vigore delle disposizioni di cui al paragrafo 1 per l ' applicazione di dette disposizioni alle « unregistered companies » nel Regno Unito e in Irlanda .  4 . Gli Stati membri possono non applicare gli articoli 12 e 13 per quanto riguarda i detentori di obbligazioni e di altri titoli convertibili in azioni qualora , al momento dell ' entrata in vigore delle disposizioni indicate al paragrafo 1 o 2 , le condizioni di emissione abbiano già fissato la posizione di tali detentori in caso di scissione .  5 . Gli Stati membri possono non applicare la presente direttiva alle scissioni o alle operazioni assimilate , per la preparazione o la realizzazione delle quali sia già , al momento dell ' entrata in vigore delle disposizioni indicate ai paragrafi 1 e 2 , intervenuto un atto o realizzata una formalità , secondo le prescrizioni della legge nazionale .  Articolo 27  Gli Stati membri sono destinatari della presente direttiva .  Fatto a Bruxelles , addì 17 dicembre 1982 .  Per il Consiglio  Il Presidente  H . CHRISTOPHERSEN  ( 1 ) GU n . C 89 del 14 . 7 . 1970 , pag . 20 .  ( 2 ) GU n . C 129 dell ' 11 . 12 . 1972 , pag . 50 , e GU n . C 95 del 28 . 4 . 1975 , pag . 12 .  ( 3 ) GU n . C 88 del 6 . 9 . 1971 , pag . 18 .  ( 4 ) GU n . 2 del 15 . 1 . 1962 , pag . 36/62 .  ( 5 ) GU n . L 65 del 14 . 3 . 1968 , pag . 8 .  ( 6 ) GU n . L 26 del 31 . 1 . 1977 , pag . 1 .  ( 7 ) GU n . L 222 del 14 . 8 . 1978 , pag . 11 .  ( 8 ) GU n . L 295 del 20 . 10 . 1978 , pag . 36 .  ( 9 ) GU n . L 61 del 5 . 3 . 1977 , pag . 26 .  ( 10 ) GU n . L 65 del 14 . 3 . 1968 , pag . 9 .  ( 11 ) GU n . L 26 del 31 . 1 . 1977 , pag . 1 .  ( 12 ) GU n . L 61 del 5 . 3 . 1977 , pag . 26 .