b'\n_START_ARTICLE_\nTrasfezione\n_START_SECTION_\nApplicazioni\n_START_PARAGRAPH_\nLa trasfezione \xc3\xa8 utile in tutti gli studi di genetica e biologia molecolare che vogliano ottenere informazioni sull\'attivit\xc3\xa0 e la funzione di determinati geni. Questo pu\xc3\xb2 essere fatto, generalmente, in due modi: sovraesprimendo il gene in questione oppure silenziandolo._NEWLINE_Nel primo caso si induce quindi una produzione superiore al normale del prodotto genico inserendo ulteriori copie dello stesso gene, ad esempio. Nel secondo caso il gene invece sar\xc3\xa0 "bloccato". Due sono i metodi per silenziare un gene. Tramite la formazione di sistemi knock out, che scambiano il gene nella cellula con uno, quello esogeno, inattivo; la tecnica si basa sulla ricombinazione delle regioni fiancheggianti il gene di interesse. Tramite inserimento di siRNA (RNA interference)._NEWLINE_In tutti i casi le colture trasfette saranno seguite e saranno analizzate le eventuali conseguenze.\n_START_SECTION_\nTrasfezione transiente e stabile\n_START_PARAGRAPH_\nA seconda del destino in cui incorre il vettore inserito si pu\xc3\xb2 distinguere tra trasfezione transiente e trasfezione stabile. La trasfezione \xc3\xa8 transiente quando il vettore resta nella cellula come frammento extracromosomico, cio\xc3\xa8 non si integra nel genoma cellulare; in questo caso le propriet\xc3\xa0 indotte dalla trasfezione permangono per breve tempo, di solito scompaiono prima delle 72 ore. La trasfezione \xc3\xa8 stabile, invece, quando il DNA esogeno si integra stabilmente nel genoma: l\'effetto quindi rimane per l\'intera vita della cellula e saranno trasmesse anche alle cellule che ne derivano._NEWLINE_La trasfezione transiente \xc3\xa8 certamente pi\xc3\xb9 rapida, facile ed economica ma ovviamente permette studi limitati nel tempo. La trasfezione stabile si ritiene necessaria ogni volta che l\'effetto genico \xc3\xa8 a medio-lungo termine: ad esempio quando si studiano geni che si ritengono connessi ai processi di differenziamento cellulare.\n_START_SECTION_\nMetodi di trasfezione\n_START_PARAGRAPH_\nConsiderando il caso pi\xc3\xb9 generale, l\'introduzione di DNA, il problema che si pone riguarda il fatto che sia l\'acido nucleico che la membrana cellulare sono carichi negativamente: il DNA, per forze di repulsione elettrostatiche, quindi, non interagir\xc3\xa0 mai spontaneamente con la membrana. Molti metodi di trasfezione servono infatti per mascherare i gruppi anionici del DNA.\n_START_SECTION_\nMetodi chimici\n_START_PARAGRAPH_\nUno dei metodi pi\xc3\xb9 semplici e meno costosi \xc3\xa8 quello che utilizza il fosfato di calcio, sviluppato per la prima volta da S. Bacchetti e F.L. Graham nel 1977. La procedura prevede il mescolamento di una soluzione tampone HEPES contenente ioni fosfato insieme a una soluzione di cloruro di calcio (CaCl2) e il DNA da trasfettare. Il mescolamento delle due soluzioni produce un precipitato di calcio fosfato, che andr\xc3\xa0 a legare la molecola di DNA. Il precipitato viene prelevato, risospeso e aggiunto al terreno di coltura (di solito una coltura mono strato). Con un processo ancora non ben noto le cellule legano il precipitato e permettono l\'ingresso del DNA. La precipitazione pu\xc3\xb2 avvenire anche con Dietil-ammino-etil-destrano._NEWLINE_Un altro metodo biologico molto efficace sfrutta i liposomi, piccole vescicole lipidiche che inglobano il DNA e sono indotte ad entrare con esso nella cellula simulando i processi di endocitosi cellulare._NEWLINE_Altro metodo prevede l\'uso di dendrimeri, molecole altamente ramificate che si legano al DNA e lo trasportano nella cellula.\n_START_SECTION_\nMetodi fisici\n_START_PARAGRAPH_\nIl metodo tra i pi\xc3\xb9 usati \xc3\xa8 la elettroporazione, che consiste nell\'applicare una differenza di potenziale ai lati della cuvetta che contiene la soluzione con le cellule e il DNA da inserire: lo shock elettrico provoca la formazione di pori nella membrana che permettono l\'ingresso del materiale genetico. Ha come difetto l\'alta percentuale (%) di cellule che non sopravvivono in seguito al trattamento._NEWLINE_Altro metodo \xc3\xa8 la microiniezione: l\'inserimento del materiale tramite un sottile ago direttamente nella cellula. Per ovvi motivi pratici \xc3\xa8 pi\xc3\xb9 frequentemente usato in clinica, in tecniche come la fecondazione artificiale, che non in laboratorio dove si lavora con un alto numero di cellule._NEWLINE_Un approccio diretto alla trasfezione \xc3\xa8 poi il metodo cosiddetto del cannone genico dove il DNA \xc3\xa8 accoppiato a un solido inerte (di solito di oro) che \xc3\xa8 "sparato" direttamente nella cellula.\n_START_SECTION_\nMetodi tramite virus\n_START_PARAGRAPH_\nIl DNA pu\xc3\xb2 infine essere inserito tramite trasduzione, trasportata quindi da un virus. Sono usati principalmente adenovirus, retrovirus e lentivirus.'