b'\n_START_ARTICLE_\nPromotore (biologia)\n_START_PARAGRAPH_\nIn biologia un promotore (o primer) \xc3\xa8 una regione di DNA costituita da specifiche sequenze dette consenso, alla quale si lega la RNA polimerasi per iniziare la trascrizione di un gene, o di pi\xc3\xb9 geni (operone).\n_START_SECTION_\nStruttura dei promotori\n_START_PARAGRAPH_\nI promotori, costituiti da DNA a doppia elica, si trovano generalmente a monte del gene di cui iniziano la trascrizione e sono lunghi circa 200 bp; l\'RNA polimerasi riconosce il DNA a doppia elica e si lega ad esso, anche se soltanto un\'elica verr\xc3\xa0 utilizzata come stampo per la trascrizione. I promotori pi\xc3\xb9 efficienti sono chiamati promotori forti, dove per forza di un promotore s\'intende il numero di trascritti a cui esso pu\xc3\xb2 dare inizio in un dato tempo. I promotori sono costituiti da sequenze nucleotidiche di basi intervallate da corte sequenze che funzionano come moduli di controllo per l\'espressione genica. Sono proprio questi moduli a caratterizzare i promotori: vi sono quelli costitutivi, i cui elementi di controllo possono legarsi ubiquitariamente a fattori di trascrizione differenti (geni housekeeping), e quelli che rispondono a fattori specifici che ne regolano l\'espressione genica._NEWLINE_I promotori di tutti i geni che codificano per proteine sono stati analizzati confrontando le sequenze di DNA a monte di numerosi geni strutturali e verificando l\'eventuale presenza di regioni con sequenze simili. I risultati di questi tipi di esperimenti indicano che i promotori dei geni che codificano per proteine contengono elementi promotori basali ed elementi promotori prossimali.\n_START_SECTION_\nTipi di promotore\n_START_PARAGRAPH_\nI promotori sono divisibili in costitutivi e inducibili. I promotori costitutivi sono spesso associati a regioni "enhancer", che sono in grado di fare aumentare l\'attivit\xc3\xa0 trascrizionale da 10 a 200 volte, rispetto alla trascrizione in assenza di tale sequenza._NEWLINE_L\'enhancer \xc3\xa8 costituito da una serie di moduli per l\'associazione con proteine specifiche che la rendono per struttura molto simile ad un promotore. Spesso si trovano in una regione molto lontana rispetto al promotore del gene a cui sono associati. Alcuni enhancer virali sono specifici per un dato ospite, mentre altri (SV40, LTR di RSV e CMV) sono attivi in differenti tipi cellulari di varie specie. Essi sono i determinanti temporali e spaziali dell\'espressione di un gene. Esempi di promotori costitutivi sono: il promotore dei geni precoci di SV40; il promotore maggiore dei geni della regione tardiva dell\'adenovirus; il promotore del Raus Sarcoma Virus (RSV); il promotore immediato dei geni precoci del citomegalovirus (CMV). _NEWLINE_I promotori inducibili nei mammiferi sono sotto il controllo di specifici enhancer che, a seguito di stimoli cio\xc3\xa8 di fattori trascrizionali specifici, vengono attivati. Questi promotori sono molto sfruttati in ingegneria genetica, quando \xc3\xa8 necessario controllare il livello di espressione dei geni esogeni._NEWLINE_Per utilizzare i promotori inducibili \xc3\xa8 necessario uno studio approfondito del sistema da usare. Infatti, l\'elemento induttore potrebbe agire, oltre che sul promotore del gene da esprimere, anche altrove, generando risposte generali spesso vantaggiose. Un esempio di promotore inducibile \xc3\xa8 quello del \xce\xb2-interferone, che \xc3\xa8 indotto nei fibroblasti da un\'infezione virale e non risulta funzionale in tutti i tipi cellulari. Per adattarlo a vari tipi cellulari \xc3\xa8 necessario pretrattare con interferone le cellule, in modo da indurre la sintesi della proteina che riconosce l\'enhancer specifico. _NEWLINE_Un altro esempio di promotore inducibile \xc3\xa8 quello delle metallotionine, che contiene diversi elementi MRE (metal regulatores elements), che rispondono ai metalli pesanti, come cadmio e zinco. L\'inserzione di pi\xc3\xb9 copie di questi elementi a monte del promotore genetico pu\xc3\xb2 comportare un\'induzione Zn-dipendente del gene clonato._NEWLINE_Altri promotori inducibili sono ad esempio: quello delle Heat-Shock protein, attivato in seguito ad uno stress; quello inducibile dai glucocorticoidi, in cui \xc3\xa8 il complesso recettore-ormone a traslocare nel nucleo e ad agire direttamente da fattore trascrizionale; quello dipendente dall\'espressione dell\'antibiotico tetraciclina, che rappresenta un sistema di controllo dell\'espressione genica batterica, trasportato anche negli eucarioti.\n_START_SECTION_\nPromotori eucariotici e procariotici\n_START_PARAGRAPH_\nNegli Eucarioti generalmente un unico promotore controlla l\'espressione di un solo gene; si parla infatti di mRNA monocistronici._NEWLINE_Al contrario, nei Procarioti uno stesso promotore controlla l\'espressione di pi\xc3\xb9 geni che codificano per proteine funzionalmente correlate, come ad esempio l\'operone lac in cui uno stesso promotore permette la trascrizione dei geni che codificano per enzimi(\xc3\x9f-galattosidasi, transacetilasi e lattosio permeasi) che permettono ai batteri di metabolizzare il lattosio. Quindi, nei Procarioti si parla di mRNA policistronici._NEWLINE_Inoltre, nei Procarioti il riconoscimento del promotore \xc3\xa8 mediato dall\'oloenzima, un complesso costituito dall\'RNA polimerasi (core) e i fattori \xcf\x83 che permettono l\'individuazione di promotori specifici. Ad esempio, in E.coli, in condizioni fisiologiche, \xc3\xa8 maggiormente espresso il fattore \xcf\x8370 che consente la trascrizione dei geni housekeeping (costitutivi)._NEWLINE_In condizioni di stress, invece, nella cellula vengono espressi fattori \xcf\x83 alternativi che permettono alla cellula di sopravvivere alle condizioni avverse._NEWLINE_Durante lo shock termico (heat shock), ad esempio, aumentano i livelli d\'espressione del fattore \xcf\x8332 che si associa all\'RNA polimerasi andando cos\xc3\xac a legare promotori specifici per l\'espressione  di proteine necessarie alla sopravvivenza.\n_START_SECTION_\nPromotore Alternativo\n_START_PARAGRAPH_\nAlcuni geni hanno dei promotori alternativi, ovvero siti di legame della RNA polimerasi su uno stesso gene opzionale rispetto a quello principale._NEWLINE_Essi danno origine a diverse versioni del trascritto a partire dallo stesso gene e permettono di ottenere una molecola di RNA che differisce all\'estremit\xc3\xa0 5\' da quella relativa al promotore principale._NEWLINE_I promotori alternativi sono presenti nel 23% geni umani (in media dal 10-20%) e a partire da un primo enhancer, che pu\xc3\xb2 avere parti alternative, permettono ad una singola cellula di sintetizzare proteine simili con caratteristiche biochimiche leggermente differenti._NEWLINE_Difetti nel funzionamento dei promotori alternativi, possono essere causa di gravi malattie genetiche._NEWLINE_Un esempio significativo \xc3\xa8 la \'distrofia muscolare di Duchenne\', dovuta alla mutazione del gene distrofina, che governa la produzione della omonima proteina, componente fondamentale della struttura delle fibre muscolari scheletriche e cardiache.\n_START_SECTION_\nAnalisi di un promotore: geni reporter\n_START_PARAGRAPH_\nEsistono diversi metodi per lo studio dei promotori come: l\'uso dei geni reporter, l\'analisi per delezione e la mutagenesi linker-scanning._NEWLINE_I sistemi dei geni reporter sono usati per lo studio di regioni promotrici o enhancer e della loro interazione con elementi trans-regolatori._NEWLINE_L\'attivit\xc3\xa0 promotrice e il ruolo funzionale degli elementi di controllo presenti, si valuta clonando la regione a monte del gene reporter, che \xc3\xa8 generalmente contenuta in un plasmide d\'espressione. Questi, dopo ricombinazione, vengono introdotti in linee cellulari in cui si valuta poi la concentrazione della proteina reporter prodotta o della sua attivit\xc3\xa0 enzimatica._NEWLINE_I geni reporter codificano per proteine con attivit\xc3\xa0 enzimatica specifica che risponde a diverse caratteristiche: deve essere assente nella specie in esame e facilmente distinguibile da ogni attivit\xc3\xa0 enzimatica simile nella cellula; non deve dare competizione o interferenza con altre attivit\xc3\xa0 enzimatiche cellulari; il saggio, inoltre, deve essere semplice, rapido e riproducibile._NEWLINE_Nei saggi di cellule eucariotiche i geni reporter pi\xc3\xb9 usati sono quelli che codificano per enzimi batterici: CAT (cloramfenicolo acetil-trasferasi), in cui si ha una reazione di trasferimento di gruppi acetile dall\'acetilCoA al cloramfenicolo, inattivandolo, cio\xc3\xa8 il cloramfenicolo acetilato non \xc3\xa8 pi\xc3\xb9 in grado di legare il sito peptidico dei ribosomi. L\'analisi condotta \xc3\xa8 una cromatografia su strato sottile; \xce\xb2-galattosidasi che catalizza l\'idrolisi del lattosio in glucosio e galattosio e come transgalattosidasi trasforma il lattosio in allolattosio. si utilizzano substrati cromogenici o ferogenici; LUC (luciferasi) che \xc3\xa8 un enzima, derivato dalle lucciole che catalizza una reazione che produce bioluminescenza. La luce emessa pu\xc3\xb2 essere misurata con un luminometro, GFP (Green Fluorescent Protein) che \xc3\xa8 una proteina verde isolata dalla medusa Aequorea victoria, in grado di emettere fluorescenza verde in seguito all\'irraggiamento con UV o luce blu. Il cromoforo formato \xc3\xa8 un prodotto post-traduzionale del gene. Dunque se il gene per la GFP viene introdotto in un vettore d\'espressione la protein espressa nell\'ospite non richiede la presenza di particolari cofattori per manifestare la fluorescenza; GUS (\xce\xb2-glucoronidasi).'