b'\n_START_ARTICLE_\nM\xc3\xa9todo de Sanger\n_START_PARAGRAPH_\nEn 1975, Frederick Sanger desarroll\xc3\xb3 el m\xc3\xa9todo de secuenciaci\xc3\xb3n de ADN conocido como m\xc3\xa9todo de Sanger. Dos a\xc3\xb1os m\xc3\xa1s tarde emple\xc3\xb3 esta t\xc3\xa9cnica para secuenciar el genoma del bacteri\xc3\xb3fago Phi-X174, el primer \xc3\xa1cido nucleico secuenciado totalmente en la historia.  Realiz\xc3\xb3 este trabajo manualmente, sin ayuda de ning\xc3\xban automatismo. Este trabajo fue base fundamental para proyectos tan ambiciosos como el Proyecto Genoma Humano, y por \xc3\xa9l se le concedi\xc3\xb3 su segundo Premio Nobel en 1980, que comparti\xc3\xb3 con Walter Gilbert._NEWLINE_El m\xc3\xa9todo de secuenciaci\xc3\xb3n por didesoxinucle\xc3\xb3tidos, m\xc3\xa1s conocido como el m\xc3\xa9todo Sanger se basa en el proceso biol\xc3\xb3gico de la replicaci\xc3\xb3n del ADN. El m\xc3\xa9todo de secuenciaci\xc3\xb3n ideado por Sanger se basa en el empleo de dideoxinucle\xc3\xb3tidos que carecen del grupo hidroxilo del carbono 3\', de manera que cuando uno de estos nucle\xc3\xb3tidos se incorpora a una cadena de ADN en crecimiento, esta cadena no puede continuar elong\xc3\xa1ndose. Esto sucede porque la ADN polimerasa necesita un grupo terminal 3\xe2\x80\x99 OH para a\xc3\xb1adir el siguiente nucle\xc3\xb3tido y el dideoxinucle\xc3\xb3tido incorporado carece de este grupo hidroxilo. _NEWLINE_El m\xc3\xa9todo comienza una vez que se a\xc3\xadsla y se clona el ADN que se desea secuenciar. Este DNA se desnaturaliza y se emplea una sola hebra para la secuenciaci\xc3\xb3n. En la secuenciaci\xc3\xb3n se utiliza un cebador (denominado \xe2\x80\x9cprimer\xe2\x80\x9d en ingl\xc3\xa9s), que se encarga de suministrar el terminal 3\xe2\x80\x99OH que necesita la ADN polimerasa para comenzar a elongar. Se preparan cuatro tubos de reacci\xc3\xb3n, cada uno con el ADN molde de hebra sencilla que se desea secuenciar, con ADN polimerasa, con el \xe2\x80\x9cprimer\xe2\x80\x9d y con los cuatro nucle\xc3\xb3tidos trifosfatados._NEWLINE_A cada tubo se le a\xc3\xb1ade una peque\xc3\xb1a proporci\xc3\xb3n de un dideoxinucle\xc3\xb3tido trifosfato; un tubo con ddATP, otro con ddTTP, el tercero con ddGTP y el cuarto con ddCTP. En cada uno de estos tubos se producen cadenas de ADN de distintas longitudes, todas las cuales terminan en el lugar en el que se incorpor\xc3\xb3 el dideoxinucle\xc3\xb3tido correspondiente a\xc3\xb1adido al tubo. Los productos de las 4 reacciones, cada una conteniendo una peque\xc3\xb1a cantidad de uno de los cuatro dideoxinucle\xc3\xb3tidos, se cargan en un gel de poliacrilamida y se someten a electroforesis. As\xc3\xad obtendremos un patr\xc3\xb3n de bandas en orden, del cual es posible deducir la secuencia del ADN introducido.\n_START_SECTION_\nSecuenciaci\xc3\xb3n Sanger por electroforesis capilar\n_START_PARAGRAPH_\nLa secuenciaci\xc3\xb3n por el m\xc3\xa9todo de Sanger m\xc3\xa1s llevada a cabo en la actualidad, emplea la electroforesis capilar, permitiendo su automatizaci\xc3\xb3n._NEWLINE_Implica una previa fragmentaci\xc3\xb3n del ADN a secuenciar, seguido de la amplificaci\xc3\xb3n de estos fragmentos mediante la reacci\xc3\xb3n en cadena de la polimerasa (PCR). A continuaci\xc3\xb3n se adopta el m\xc3\xa9todo Sanger: cada fragmento acabado en didesoxinucle\xc3\xb3tido est\xc3\xa1 marcado fluorescentemente, de manera que cada didesoxinucle\xc3\xb3tido (ddATP, ddCTP, ddGTP, ddTTP) implica un color de fluor\xc3\xb3foro diferente. De este modo, se produce una "escalera" de ADN de fragmentos que difieren en una base de longitud._NEWLINE_Posteriormente, cada fragmento marcado se separar\xc3\xa1 por tama\xc3\xb1o por electroforesis capilar, con detecci\xc3\xb3n automatizada de los fragmentos de ADN marcados fluorescentemente, proporcionando la secuencia ordenada de los fragmentos en cromatogramas._NEWLINE_La secuencia del ADN inicial a partir de los fragmentos de ADN secuenciados, se deduce bioinform\xc3\xa1ticamente por an\xc3\xa1lisis de secuencias solapadas de los fragmentos de ADN.\n_START_SECTION_\nAplicaciones de la secuenciaci\xc3\xb3n por electroforesis capilar\n_START_PARAGRAPH_\nLa secuenciaci\xc3\xb3n de ADN por electroforesis capilar incluye las siguiente aplicaciones: detecci\xc3\xb3n de SNPs ("single nucleotide polymorphisms"), an\xc3\xa1lisis de polimorfismos de conformaci\xc3\xb3n de cadena simple  (SSCP) y an\xc3\xa1lisis de las repeticiones cortas en t\xc3\xa1ndem (STR).'