b'\n_START_ARTICLE_\nMicroscopio de fluorescencia de reflexi\xc3\xb3n interna total\n_START_SECTION_\nAntecedentes\n_START_PARAGRAPH_\nEn la biolog\xc3\xada celular y la biolog\xc3\xada molecular, un gran n\xc3\xbamero de eventos moleculares en la superficie celular, tales como la adhesi\xc3\xb3n celular, la uni\xc3\xb3n de las c\xc3\xa9lulas por acci\xc3\xb3n de las hormonas, la secreci\xc3\xb3n de neurotransmisores, y la din\xc3\xa1mica de la membrana celular, han sido estudiados con microscopios de fluorescencia convencionales. Sin embargo, los fluor\xc3\xb3foros que est\xc3\xa1n ligados a la superficie de la muestra y aquellos en el medio circundante, existen en un estado de equilibrio. Cuando estas mol\xc3\xa9culas son excitadas y detectadas con microscopio de fluorescencia convencional, la fluorescencia resultante de dichos fluor\xc3\xb3foros ligados a la superficie es frecuentemente opacada por la fluorescencia de fondo debida a la mayor abundancia de las mol\xc3\xa9culas que no est\xc3\xa1n ligadas.\n_START_SECTION_\nInformaci\xc3\xb3n general\n_START_PARAGRAPH_\nLa idea de utilizar la reflexi\xc3\xb3n total interna para iluminar las c\xc3\xa9lulas en contacto con la superficie del vidrio fue descrita por primera vez por E.J. Ambrose en 1956.\xe2\x80\x8b Para resolver este problema, el TIRFM fue desarrollado por Daniel Axelrod\xe2\x80\x8b de la Universidad de M\xc3\xadchigan, en la ciudad Ann Arbor, en la d\xc3\xa9cada de 1980. Un TIRFM utiliza una onda evanescente para iluminar selectivamente y excitar fluor\xc3\xb3foros en regiones restringidas de la muestra que son inmediatamente adyacentes a la interfaz de cristal y agua. La onda evanescente es generada solamente cuando la luz incidente es reflejada internamente en su totalidad en la interfaz  de cristal y agua. El campo electromagn\xc3\xa9tico evanescente decae exponencialmente desde la interfaz, y por tanto penetra a una profundidad de \xc3\xbanicamente 100 nm aproximadamente dentro del medio de la muestra. Por esta raz\xc3\xb3n el TIRFM permite una visualizaci\xc3\xb3n selectiva de las regiones de la superficie como la membrana plasm\xc3\xa1tica basal (que tiene cerca de 7,5 nm de espesor) de c\xc3\xa9lulas como las mostradas en la figura de arriba. No obstante, hay que notar que la regi\xc3\xb3n visualizada es  de por lo menos unos cientos de nan\xc3\xb3metros de ancho, as\xc3\xad que la zona citoplasm\xc3\xa1tica ubicada inmediatamente debajo de la membrana plasm\xc3\xa1tica es necesariamente visualizada junto con la susodicha membrana plasm\xc3\xa1tica durante la microscop\xc3\xada TIRF. La visualizaci\xc3\xb3n selectiva de la membrana plasm\xc3\xa1tica hace que las caracter\xc3\xadsticas y los eventos sobre la membrana plasm\xc3\xa1ticas en c\xc3\xa9lulas vivas se vean con una alta resoluci\xc3\xb3n axial._NEWLINE_El TIRFM tambi\xc3\xa9n puede ser usado para observar la fluorescencia de una sola mol\xc3\xa9cula,\xe2\x80\x8b\xe2\x80\x8b convirti\xc3\xa9ndose as\xc3\xad en una herramienta importante de la biof\xc3\xadsica y la biolog\xc3\xada cuantitativa.'