b"\n_START_ARTICLE_\nNucleasas con dedos de zinc\n_START_PARAGRAPH_\nLas nucleasas con dedos de zinc (ZFN, del ingl\xc3\xa9s zinc-finger nucleases) son enzimas de restricci\xc3\xb3n artificiales creadas a partir de la fusi\xc3\xb3n del dominio dedo de zinc de uni\xc3\xb3n al ADN con un dominio de ruptura de ADN. _NEWLINE_Los dedos de zinc pueden ser modificados para reconocer secuencias de ADN espec\xc3\xadficas que permitan a las nucleasas con dedos de zinc procesar secuencias \xc3\xbanicas en un genoma completo. Aprovech\xc3\xa1ndose de la maquinaria de reparaci\xc3\xb3n de ADN end\xc3\xb3gena, se pueden usar estos reactivos para modificar el genoma de organismos superiores. Esta caracter\xc3\xadstica las convierte en una valiosa herramienta para la cirug\xc3\xada molecular, que consiste en revertir mutaciones que causan enfermedades. Se pueden modificar los dedos de zinc de forma que reconozcan una secuencia espec\xc3\xadfica cercana a la mutaci\xc3\xb3n causante de la enfermedad e introducir una secuencia silvestre sin la mutaci\xc3\xb3n en la c\xc3\xa9lula. La nucleasa corta en las dos cadenas de ADN y usa la secuencia silvestre como molde para la reparaci\xc3\xb3n celular mediante recombinaci\xc3\xb3n hom\xc3\xb3loga. Las ventajas de utilizar las nucleasas con dedos de zinc para esta finalidad son que reparan la secuencia del gen sin integrar ninguna secuencia en el genoma, la eficiencia es muy alta y no es necesario mantener la expresi\xc3\xb3n de un gen a lo largo del tiempo. Sin embargo, tambi\xc3\xa9n presentan inconvenientes, puesto que probablemente s\xc3\xb3lo puedan aplicarse a terapias ex vivo, tengan alto poder inmunog\xc3\xa9nico y produzcan efectos secundarios, ya que a\xc3\xban queda por demostrar su inocuidad.\n_START_SECTION_\nDominio nucleasa de ADN\n_START_PARAGRAPH_\nUno de los dominios de ruptura inespec\xc3\xadfica de ADN m\xc3\xa1s empleados en los ZFNs es la enzima de restricci\xc3\xb3n Fokl de tipo IIs.\xe2\x80\x8b Este dominio tiene que dimerizarse para poder fragmentar el ADN y, por tanto, son necesarias un par de ZFNs para que reconozcan sitios de ADN no palindr\xc3\xb3micos. Las ZFNs est\xc3\xa1ndar fusionan el dominio nucleasa por el extremo C-Terminal de cada dominio dedo de zinc. Para que los dos dominios de ruptura puedan dimerizar y romper el ADN, se deben unir a la hebra de ADN opuesta con su extremo C-terminal a una distancia concreta. La secuencia de uni\xc3\xb3n entre ambos dominios requiere que el extremo 5' de cada sitio de uni\xc3\xb3n est\xc3\xa9 separado entre 5 y 7 pares de bases.\xe2\x80\x8b\xe2\x80\x8b_NEWLINE_Se han empleado diversas t\xc3\xa9cnicas de ingenier\xc3\xada de prote\xc3\xadnas para mejorar tanto la actividad como la especificidad del dominio nucleasa unida a los dedos de zinc. Por ejemplo, se ha recurrido a la evoluci\xc3\xb3n dirigida para generar una variante de Fokl con actividad nucleasa mejorada, llamada \xe2\x80\x9cSharkey\xe2\x80\x9d. Tambi\xc3\xa9n se ha utilizado el dise\xc3\xb1o basado en la estructura para mejorar actividad espec\xc3\xadfica de Fokl modificando la zona de dimerizaci\xc3\xb3n.\xe2\x80\x8b\xe2\x80\x8b\xe2\x80\x8b\xe2\x80\x8b\n_START_SECTION_\nDominio de uni\xc3\xb3n al ADN\n_START_PARAGRAPH_\nLos dominios de uni\xc3\xb3n al ADN de los dedos de zinc suelen contener entre tres y seis dedos de zinc repetidos y cada uno conoce entre 8 y 18 pares de bases. Si los dedos de zinc son espec\xc3\xadficos de secuencia, entonces un par de ZFNs de tres dedos que reconoce un total de 18 pares de bases te\xc3\xb3ricamente puede reconocer un \xc3\xbanico locus en un genoma de mam\xc3\xadfero. _NEWLINE_Se han desarrollado diversas estrategias para modificar gen\xc3\xa9ticamente los dedos de zinc Cys2His2 de forma que se unan a las secuencias deseadas.\xe2\x80\x8b Entre \xc3\xa9stas se incluyen el ensamblaje modular y las estrategias de selecci\xc3\xb3n que emplean phage display o sistemas de selecci\xc3\xb3n celular."