Na segunda fase, el gliceraldehído tresformar nun compuestu d'alta enerxía, que la so hidrólisis xenera una molécula de ATP, y como se xeneraron 2 molécules de gliceraldehído, llograr en realidad dos molécules de ATP. Esti llogru d'enerxía llograr por aciu l'acoplamientu d'una reacción fuertemente exergónica dempués d'una llevemente endergónica. Esti acoplamientu asocede una vegada más nesta fase, xenerando dos molécules de piruvato. D'esta manera, na segunda fase llógrense 4 molécules de ATP.