linteresse nel valutare la sicurezza del latte crudo , nasce dal fatto che , nellultimo decennio , il consumo di questo prodotto si  diffuso in maniera consistente nellintero territorio nazionale . il costo contenuto , il ridotto impatto ambientale ed il desiderio di naturalit e ritorno alle tradizioni hanno contribuito a consolidare una realt produttiva , in precedenza pressoch assente in italia . dal 2008 ( om 10/12/2008 )  obbligatoria la dicitura prodotto da consumarsi dopo bollitura ; nonostante ci il consumatore non sempre segue tale norma di comportamento e di conseguenza consuma il latte tal quale . nel territorio toscano ed in particolare in quello dellarea compresa tra le province di lucca , livorno , pisa e massa - carrara sono presenti numerose aziende produttrici di latte crudo destinato ai distributori automatici delle stesse zone ; la cessione di latte crudo mediante vendita diretta o mediante macchine erogatrici  disciplinata in dettaglio dallintesa stato regioni del 25 gennaio 2007 ( iso , 2001 ) . al fine di delineare un quadro generale sulla sicurezza di tale prodotto , il presente progetto di ricerca ha voluto indagare in campioni di latte crudo prelevati alle macchine erogatrici o direttamente presso le aziende che effettuano vendita diretta ( 19 aziende controllate ) la presenza sia dei patogeni previsti dalla normativa vigente ( listeria monocytogenes , campylobacter spp . , , escherichia coli o:157 e stafilococchi coagulasi - positivi ) sia di patogeni emergenti quale il genere yersinia . relativamente al genere yersinia , sono stati indagati per tale prodotto , dati relativi a prevalenza , patogenicit e livello di contaminazione . lattenzione verso il genere yersinia nasce dal fatto che , negli ultimi due decenni , si  registrato un incremento nellincidenza delle yersiniosi in diversi paesi europei , collocando la yersiniosi al terzo posto tra le zoonosi pi frequentemente notificate ( european food safety authority , 2009 ) . nellambito dei piani di sorveglianza previsti dalle asl di competenza dei territori dellarea vasta della toscana nord occidentale che comprende , 5 asl ( asl 1 di massa e carrara , asl 2 di lucca , asl 5 di pisa , asl 6 di livorno e asl 12 di viareggio ) sono stati analizzati 127 campioni di latte crudo bovino , nel periodo che va da maggio 2010 ad aprile 2013 , dai distributori a cui afferisce il latte prodotto dalle aziende dello stesso territorio . nei tre anni , sono state controllate complessivamente 19 aziende produttrici di latte crudo destinato ai distributori automatici delle stesse zone . i campioni di latte crudo , prelevati in 5 unit campionarie , per un totale di 635 campioni totali , sono stati analizzati per le ricerche previste dalla normativa vigente ( ministero della salute , 2008 ; repubblica italiana , 2007 ) : numerazione degli stafilococchi coagulasi positivi ( iso , 1999 ) e ricerca di : campylobacter spp . ( iso , 2002 ) , l. monocytogenes ( iso , 2005 ) ed e. coli o:157 ( iso , 2001 ) tutte eseguite con metodi ufficiali accreditati . inoltre la presenza e la conta del genere yersinia sono state effettuate in singolo con metodo ufficiale ( iso , 2003 ) e con metodo most probable number ( mpn ) ( usda , 2008 ) . lidentificazione degli isolati del genere yersinia , sono stati identificati con test biochimici ( kit miniaturizzato api 20e biomerieux e macrometodo ) e confermati con test sierologici ( sieroagglutinazione rapida con sieri monovalenti per i gruppi o:1,o:2,o:3,o:5,o:8,o:9 ) dal momento che la maggior parte delle infezioni umane ,  sostenuta dai sierotipi o:8 , o:9 , o:3 ( biotipi 3 e 4 ) , o:5,27 ( asplund et al . , 1998 ) e con metodi molecolari ( pcr con protocollo interno delliss ) ricercando i geni di patogenicit , ail e yst . per quanto riguarda la ricerca dei patogeni previsti dalla normativa vigente , una sola unit campionaria su 5 di un campione  risultata positiva per e. coli o157 , peraltro risultato non produttore di verocitotossina e solo cinque campioni sono risultati superiori ai limiti per stafilococchi coagulasi positivi . per la ricerca di yersinia , un totale di 38 campioni su 127 sono risultati positivi ( 29,9% ) : un totale di 39 isolati sono stati ottenuti ; dopo conferma biochimica , un numero pari a 30 isolati sono stati confermati come appartenenti alla specie y. enterocolitica , sei alla specie y. frederiksenii e tre a y. kristensenii ( tabella 1 ) . i 30 isolati di y. enterocolitica sono stati sottoposti a tipizzazione sierologica e i sierogruppi prevalenti sono risultati o:5 ( 16,6% ) e o:8 ( 13,3% ) ; la maggior parte di essi ( 70% ) sono risultati non appartenenti ai gruppi o:1,o:2,o:3,o:5,o:8,o:9 ( tabella 2 ) . nessun isolato  risultato per patogeno , dal momento che allanalisi molecolare nessuno aveva i markers genetici ail e yst , indicativi di enteropatogenicit . la conta di y. enterocolitica , y. frederiksenii e y. kristensenii ha evidenziato valori compresi tra 0.03 e 24 mpn / ml . dai dati relativi al conteggio di yersinia enterocolitica nei campioni risultati positivi , si pu considerare che quando  presente , lo  a concentrazioni relativamente basse , infatti abbiamo riscontrato valori che variano tra 0.03 e 24 mpn / ml , mentre in letteratura si riporta una dose infettante molto pi alta , di almeno10 batteri ( fleming e hunt , 2006 ) . concludendo quindi , considerata la ristrettezza dei criteri microbiologici stabiliti dalle norme per tale prodotto , sia in considerazione dei risultati ottenuti , sia per il fatto non trascurabile che tale prodotto  da consumarsi previa bollitura ,  possibile tracciare un quadro generale rassicurante sulla qualit igienico - sanitaria del latte crudo bovino prodotto e distribuito almeno in questa parte del territorio toscano .
raw milk consumption in italy has increased over the last few years and although raw milk is characterised by cold chain , short shelf - life and the duty of boiling before domestic consumption , it is still considered a hazard . from 2010 to 2013 a monitoring survey of raw milk sold through vending machines was carried out to investigate the occurrence of several foodborne pathogens stipulated in the national legal requirements , i.e. listeria monocytogenes , campylobacter spp . , salmonella spp . 
 , escherichia coli o:157 and coagulase - positive staphylococci . 
 a total of 127 raw milk samples were collected from 19 dairy herds in tuscany region , italy . 
 in addition , the milk samples were tested for the presence and count of yersinia genus . 
 results shown that only one sample was positive for non verocytotoxin - producing e. coli o:157 , whereas a total of 38 samples ( 29.9% ) were postive for yersinia genus ; of the total 39 isolated bacteria , 23.6% were y. enterocolitica , 2.4% y. kristenseni and 4.7% y. frederiksenii . 
 none isolate was enteropathogenic ; serotypes o:5 and o:8 were found in 16.6 and 13.3% of the isolates respectively , whereas none of the serotypes tested was detected in 70% of the isolates . 
 the most probable number method revealed a count value between 0.03 and 24 mpn / ml . 
 based on these data a general assurance on health safety of raw milk produced and sold in tuscany could be assessed .