lirraggiamento rappresenta una tecnologia di conservazione che consiste nel sottoporre lalimento a specifiche dosi di radiazioni ionizzanti ( raggi x , raggi gamma o fasci di elettroni ) che consentono di inattivare il materiale genetico delle cellule microbiche e inibire lattivit degli enzimi degradativi presenti negli alimenti ; in questo modo  possibile migliorare la sicurezza e la qualit igienica degli alimenti e rallentarne il deterioramento . in europa il trattamento con radiazioni ionizzanti  disciplinato dalle direttive quadro 1999/2/ce e 1999/3/ce ( commissione europea , 1999a , 1999b ) attuate nel nostro paese mediante il dl.vo 30 gennaio 2001 , n 94 ( repubblica italiana , 2001 ) . la direttiva 1999/3/ce prevede ladozione di un elenco comunitario di alimenti e loro ingredienti che ad esclusione di tutti gli altri , possono essere trattati con radiazioni ionizzanti e che tale elenco possa essere aggiornato gradualmente . allo stato attuale tale elenco prevede una sola categoria di alimenti , erbe , spezie e condimenti vegetali , che possono essere irradiati ad una dose massima di 10 kgy . in attesa che lelenco venga completato ogni stato membro pu mantenere le autorizzazioni nazionali vigenti , a condizione che lirraggiamento e limmissione sul mercato dei prodotti alimentari abbia ricevuto il parere favorevole da parte del comitato scientifico dellalimentazione ( tabella 1 ) . la direttiva quadro 1999/2/ce ( commissione europea , 1999a ) stabilisce che tutti gli alimenti e / o ingredienti sottoposti al trattamento con radiazioni ionizzanti , debbano riportare la dicitura irradiato o trattato con radiazioni ionizzanti : in etichetta , nel caso di prodotti o ingredienti confezionati o , qualora si tratti di prodotti sfusi , sui documenti che accompagnano tali prodotti . ciascun stato membro  tenuto ad effettuare controlli sugli impianti di irraggiamento e sugli alimenti in fase di commercializzazione al fine di verificare che i controlli sugli alimenti irradiati devono essere effettuati mediante metodi analitici validati o quando possibile standardizzati conformi ai criteri stabiliti dalle norme europee . nel 1993 la commissione europea ha dato mandato al comitato europeo di normazione di standardizzare i metodi di analisi proposti a livello internazionale . ad oggi sono stati standardizzati 10 metodi applicabili alla maggior parte degli alimenti autorizzati allirraggiamento . ciascuno di questi metodi  applicabile a specifiche categorie di alimenti ( tabella 2 ) . scopo del lavoro  stato quello di verificare lapplicabilit e lefficacia del metodo di screening microbiologico per lidentificazione di erbe e spezie irradiate tramite direct epifluorescence filter technique ( deft)/aerobic plate count ( apc ) ( en 13783:2001 ; iso , 2001a ) allinterno di diversi laboratori partecipanti al progetto , applicando tale metodo a campioni di erbe e spezie irradiate e non irradiate . sono stati acquistati presso punti vendita al dettaglio campioni di erbe e spezie essiccate , nello specifico : origano , pepe nero , peperoncino , menta , salvia , semi di finocchio , timo , th nero , caff macinato , cacao amaro , anice stellato e semi di sesamo . tali matrici sono state esaminate nella forma non irradiata e poi fatte irradiare mediante un irraggiatore a raggi x a tre diverse dosi ( 3 , 6 , 10 kgy ) per un totale di 14 campioni non irradiati e 100 campioni irradiati . i campioni sono stati suddivisi in aliquote omogenee , ciascuna analizzata con il metodo deft / apc dai diversi laboratori che hanno preso parte al progetto : sezione microbiologia alimentare , asl milano , unit operativa di biologia arpa verona , direzione operativa produzioni zootecniche izs lazio e toscana . il metodo deft / apc ( en 13783:2001 ; iso , 2001a ) si basa sulla comparazione dei valori ottenuti tramite conta diretta su piastra dei batteri aerobi mesofili ( apc ) in base alla norma di riferimento iso 4833 ( iso , 1991 ) , e quelli ottenuti con la conta diretta su filtro con microscopio a epifluorescenza ( deft ) . nello specifico , si sfrutta il fenomeno per cui lirraggiamento influenza la vitalit dei microrganismi ( la carica batterica diminuisce ) ma non la loro capacit di essere colorati con larancio di acridina . una porzione di 5 g di campione viene sospesa in 45 ml di acqua peptonata salina sterile , agitata vigorosamente per circa 30 secondi e poi filtrata attraverso carta filtro sterile . vengono preparate diverse diluizioni del campione come indicato dalla norma di riferimento en 13783:2001 ( iso , 2001a ) . un volume di 2 ml di campione viene filtrato su una membrana , in modo da trattenere i microrganismi , poi trattata con il colorante arancio di acridina il quale colora in maniera differenziale il materiale nucleare dei microrganismi . al microscopio ad epifluorescenza con lunghezza donda compresa fra 450 e 490 nm le cellule batteriche vitali e quelle uccise dal trattamento irradiante , per cui attive prima del trattamento , mostrano una fluorescenza arancione e giallo / arancione , mentre quelle che erano gi morte prima del trattamento mostrano una fluorescenza verde e non vengono conteggiate . in parallelo , una seconda porzione del campione in esame si utilizza per la conta diretta in piastra dei batteri aerobi mesofili in base alla norma di riferimento iso 4833 ( iso , 1991 ) , la quale prevede la semina del campione e sue diluizioni in terreno plate count agar , incubazione delle piastre a 30c per 72 ore , lettura e calcolo delle unit formanti colonia ( ufc)/g di campione . la conta apc in piastra fornisce il numero di microrganismi vitali dopo una possibile irradiazione mentre la conta deft il numero totale dei microrganismi presenti nel campione la differenza ( dc ) tra i due conteggi ( deft / g e ufc / g trasformati in log ) permette di distinguere le cellule che erano vitali prima del trattamento ma che sono state inattivate dal processo irradiante . tuttavia , come specificato nella norma di riferimento , il metodo deft / apc non  specifico per lirraggiameto , tali differenze possono anche essere indotte da altri trattamenti ( ad esempio trattamenti termici o affumicamento ) che hanno come scopo luccisione dei batteri , ci rende quindi necessaria la conferma dei risultati positivi tramite un altro metodo standardizzato per provare che le spezie siano state effettivamente sottoposte ad irraggiamento ( tabella 2 ) . utilizzando un valore limite di 4 log , la probabilit di avere dei campioni falsamente positivi  bassa ;  stato per dimostrato con campioni di basilico che tale valore pu dare risultati falsamente negativi . va inoltre fatto presente che nel caso in cui la carica batterica mesofila del campione risulti essere < 10 ufc / g , il metodo non pu essere applicato . il 50% dei campioni non sottoposti al trattamento di irraggiamento , analizzati con il metodo deft / apc , sono risultati effettivamente non irraggiati ; per il restante 50% il metodo  risultato non applicabile in base alla norma en 13783:2001 ( iso , 2001a ) , a causa di un valore ufc / g < 10 nel conteggio apc . per i campioni irradiati sperimentalmente , il metodo  risultato non applicabile ( ufc / g < 10 ) per il 96% dei casi , per il 4% ha dato invece dei falsi negativi ( dc<4 ) : 1 campione di menta irraggiato a 3 kgy , 1 campione di peperoncino irraggiato a 3 kgy , e 2 campioni di peperoncino irraggiati a 6 kgy . dallanalisi dei dati raccolti dai tre gruppi di ricerca partecipanti al lavoro si  potuto riscontrare in generale che il valore deft log risulta pi o meno simile non solo se si aumenta la dose di irraggiamento , in accordo con il metodo ufficiale , ma anche per lo stesso campione non irradiato . la carica batterica , al contrario , tende a diminuire allaumentare della dose di irraggiamento . dai nostri dati si evince che gi una dose di trattamento di 3 kgy  sufficiente ad abbassare la carica batterica del prodotto molto al di sotto del limite stabilito dalla norma en 13783:2001 ( iso , 2001a ) . nella maggior parte dei casi infatti , anche per campioni non irradiati , in base alla norma en 13783:2001 ( iso , 2001a ) , il metodo non  risultato applicabile a causa di una carica batterica bassa allinterno del campione ( ufc / g < 10 ) ; contestualmente si sono verificati casi in cui il valore dc , a dosi di irraggiamento di 3 e 6 kgy ,  risultato < 4 a rappresentare un altro dei limiti di questo metodo e cio la possibilit che si verifichino casi di falsi negativi . in relazione al lavoro da noi svolto sarebbe interessante verificare in un futuro lapplicabilit del metodo anche nei casi in cui la carica batterica risulti < 10 ufc / g . abbiamo infatti notato che un approccio di questo genere potrebbe essere ben applicato nel caso di campioni non irraggiati dove , in base ai nostri dati , aumenta il numero di campioni correttamente identificati ed i possibili falsi positivi verrebbero comunque sottoposti ad analisi di conferma come stabilito dalla norma di riferimento del metodo . allo stesso tempo per , per i campioni irraggiati , si  verificato un aumento del numero di falsi negativi . in conclusione , allo stato attuale , le problematiche di cui sopra limitano molto lapplicabilit del metodo deft / apc , nonostante la sua facilit di esecuzione e i basti costi .
irradiation is a preservation technology used to improve the safety and hygienic quality of food . 
 aim of this study was to assess the applicability and validity of the microbiological screening method direct epifluorescence filter technique ( deft)/aerobic plate count ( apc ) ( en 13783:2001 ) for the identification of irradiated herbs and spices . 
 tests on non - irradiated and irradiated samples of dried herbs and spices were performed . 
 the method was based on the comparison of apc and count obtained using deft . in accordance with the standard reference , this method is not applicable to samples with apc<103 colony forming units ( cfu)/g and this is its main limit . 
 the results obtained in our laboratories showed that in 50% of cases of non - irradiated samples and in 96% of the samples treated with ionising radiation , the method was not applicable due to a value of cfu / g < 103 .