該化合物がスフィンゴシンである、請求項1記載のカスパーゼ14合成促進剤。前記皮膚外用剤が、液状、エマルジョン状、ペースト状又はパップ剤の形態である、請求項4記載の皮膚外用剤。0001】本発明は、カスパーゼ14合成促進剤及びそれを含む皮膚外用剤に関する。【背景技術】【0002】カスパーゼは、これまでに14種存在することが明らかになっている。このうち、カスパーゼ14は、アポトーシスに関与しない点で特異的である。カスパーゼ14は、主に皮膚の表皮角化細胞に存在し、角質層のバリア機能及び水分保持機能を維持することが明らかになっている(非特許文献1)。【0003】しかし、カスパーゼ14については、未だ不明な点が多い。数少ない報告例としては、カスパーゼ14の合成が、ビタミンD3によって(非特許文献1)、また、緑茶のポリフェノールによって(非特許文献2)、誘導されるとする研究がある。カスパーゼ14の活性が、所定の尿素誘導体によって刺激されるとするものもある(特許文献1)。【0004】ところで、同じくカスパーゼの仲間であるカスパーゼ3及びカスパーゼ9は、フィトスフィンゴシンにより誘導されるアポトーシスにおいて、活性化されることが知られている(非特許文献3)。フィトスフィンゴシンが、皮膚の分化を促進し、アポトーシスを制御して表皮過形成を阻害することも知られている(非特許文献4)。12,17-24.【発明の概要】【発明が解決しようとする課題】【0007】カスパーゼ14の合成を促進することができれば、皮膚の保湿機能を維持し、該機能の衰えを予防し、及び改善する上で大変有用であるが、上述のとおり、その為の研究例は少ない。そこで、本発明は、カスパーゼ14の合成促進剤を提供することを目的とする。【課題を解決するための手段】【0008】本発明は、スフィンゴイド類及びN-アセチルスフィンゴシン類からなる群より選ばれる少なくとも一種の化合物を含む、カスパーゼ14合成促進剤である。本発明は、該カスパーゼ14合成促進剤を、スフィンゴイド類及びN-アセチルスフィンゴシン類からなる群より選ばれる少なくとも一種の化合物の濃度が0.1~20μMとなる量で含む、皮膚外用剤である。【発明の効果】【0009】上述のとおり、カスパーゼ14は、アポトーシスに関与しない点で、カスパーゼ3及びカスパーゼ9とは異なる。従って、スフィンゴシンによって、カスパーゼ14が活性化されることは考え難い。該予想に反して、カスパーゼ14がスフィンゴイド及びN-アセチルスフィンゴシンによって、その発現を促進されることが見出された。該カスパーゼ14合成促進剤は、従来のアポトーシス制御機序とは異なる、プロカスパーゼ14の発現を促進することを通じて、皮膚保湿成分の合成を促進する。これにより、永続的に皮膚の保湿機能を改善することができる。【図面の簡単な説明】【0010】【図1】MTT法により測定した、フィトスフィンゴシンの細胞障害性を示す図である。【図2】MTT法により測定した、スフィンゴシンの細胞障害性を示す図である。【図3】MTT法により測定した、スフィンガニンの細胞障害性を示す図である。【図4】MTT法により測定した、C2-セラミドの細胞障害性を示す図である。【図5】ウェスタンブロッティング法による、スフィンゴイド類のプロカスパーゼ14の発現効果を示す図である。【図6】ウェスタンブロッティング法による、スフィンゴイド類のプロカスパーゼ14の発現効果を示す図である。【図7】RT-PCR法による、スフィンゴイド類の、カスパーゼ14のmRNA発現効果を示す図である。【発明を実施するための形態】【0011】カスパーゼ14は、上述のとおり、皮膚の表皮角化細胞に存在する。該角化細胞は基底層で生まれ、次第に分化を繰り返し、有棘層、次いで顆粒層を通り、最終的には角質層に至り、角片となって皮膚から脱落する。【0012】カスパーゼ14は、定常状態では、角化細胞によって構成された基底層に前駆(プロ)体として局在する。従って、角化細胞中のプロカスパーゼ14の発現を促進すれば、カスパーゼ14を増やすことができる。プロカスパーゼ14の切断によるカスパーゼ14の活性化は表皮分化の後期段階で観察される。カスパーゼ14は、皮膚の保湿に関与する構造タンパク質であるフィラグリンの前駆体を分解する。【0013】本発明のカスパーゼ14合成促進剤は、スフィンゴイド類及びN-アセチルスフィンゴシン類からなる群より選ばれる少なくとも一種の化合物を有効成分とする。該スフィンゴイド類は、スフィンゴ脂質の長鎖塩基部分、即ち、炭素数16~20の長鎖アミノアルコールを指し、スフィンゴイド塩基類と同義である。通常、スフィンゴイドはC4位でトランス2重結合をもっている。該スフィンゴイドの例には、以下のものが包含され、これらの2種類の混合物であってもよい。(1)C4位に二重結合があるC18長鎖脂肪鎖をもつスフィンゴシンもしくはスフィンゲニン:【化1】(2)スフィンゴシンの二重結合が飽和した分子であるスフィンガニンもしくはジヒドロスフィンゴシン:【化2】(3)スフィンゴシンの二重結合がモノヒドロキシル化されたフィトスフィンゴシン:【化3】(4)スフィンゴシンがC8位で脱水素された4,8-スフィンガジエニン:【化4】(5)フィトスフィンゴシンがC8位で脱水素された4-ヒドロキシ-8-スフィンゲニン:【化5】【0014】これらのうち、フィトスフィンゴシン、スフィンゴシン、及びスフィンガニンが好ましく、特にフィトスフィンゴシンが好ましい。【0015】スフィンゴイドは、スフィンゴ脂質を動植物からアルカリ加水分解を行う方法、もしくはアルカリ性アルコール溶液で抽出した後、クロロホルム-メタノール混液を用いてシリカゲルによる精製を行う方法等によって得ることができる。特開平7-258178号に記載されている化学合成によって得ることもできる。市販されているものを使用してもよい。【0016】本発明において、N-アセチルスフィンゴシン類は、スフィンゴイドのアミノ基がアシル化されたN-アシルスフィンゴシンのうちの、アシル基がアセチル基である化合物である。N-アシルスフィンゴシンは、一般的にセラミドともよばれる。該N-アセチルスフィンゴシンとして、以下の式(6)で表されるC2-セラミドが例示される:【化6】【0017】N-アセチルスフィンゴシン類は、スフィンゴ脂質を動植物からアルカリ加水分解を行う方法、もしくはアルカリ性アルコール溶液で抽出した後、クロロホルム-メタノール混液を用いてシリカゲルによる精製を行う方法等によって得ることができる。化学合成によって得ることができる。市販されているものを使用してもよい。【0018】本発明のカスパーゼ14合成促進剤は、薬学上許容される担体を含んでいてもよい。添加物を適宜用いてもよい。賦形剤としては、糖デンプン、コーンスターチ等が、結合剤としては、例えばセルロース類、デキストリン等が挙げられる。挙げられ、なかでも、植物油、例えば、マカデミアナッツ油、オリーブ油、トウモロコシ油等が好ましい。これらの植物油を用いる際に、溶解補助剤として、フィトステロール等を配合してもよい。本発明は、該カスパーゼ14合成促進剤を薬効成分として含む、皮膚外用剤にも関する。該皮膚外用剤は、該カスパーゼ14合成促進剤を0.1~20μMの濃度で含む。カスパーゼ14合成促進剤の量が、前記下限値未満では、満足の行く効果が得られず、前記上限値を超えて配合すると、後述する実施例で示すように、合成促進効果が弱くなる。好ましくは皮膚外用剤中の該カスパーゼ14合成促進剤の濃度は、作用時間が短くて済む点で1μM以上であり、合成促進効率が高い点で15μM以下である。好ましくは、該濃度は5~15μMである。【0020】皮膚外用剤の基剤としては、通常の皮膚外用剤に使用されるものであれば、液状、半固形もしくはペースト状のいずれであってもよい。アルコール類、シリコーン油類を使用することができる。【0021】また、水を含むエマルジョン形態としてもよく、その場合、乳化や可溶化等のために用いられる、アニオン性、カチオン性、両性及び非イオン性の界面活性剤を用いることができる。【0023】該皮膚外用剤の製品形態としては、液状、エマルジョン状、又はペースト状、さらにはパップ剤等の形態であってよく、また、化粧水、乳液及びクレーム等の化粧料、軟膏等の外用医薬品であってよい。【0024】以下、本発明を実施例により説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。【0025】[実施例]I.実施例において、以下の細胞、及び細胞培養法を用いた。CO2インキュベーター(ESPEC)内で培養した。【0026】II.以下に示すMTT法により、スフィンゴイド類の細胞傷害性を調べた。μLずつ96穴マイクロプレートにまき、HaCaT細胞が接着するように一晩インキュベーションさせた。インキュベーション後、終濃度が、各々、0、5、15、25μMになるように、フィトスフィンゴシン(PHS)、スフィンゴシン(SPH)、スフィンガニン(SPG)、C2-セラミド(Cer)を溶解した有機溶媒をそれぞれ20μL添加した。作用時間は24、48、72時間とし、37°CのCO2インキュベーター内で作用させた後、測定1時間前にMTT溶液を10μLずつ各穴に添加し、さらに1時間インキュベートした。作用後、上清を捨て、DMSOを100μLずつ加え、マイクロプレートリーダーを用いて570nmの吸光度を測定することでミトコンドリアのNADH量を測定し、未添加コントロールのNADH量に対する試験群のNADH量の百分率を細胞生存率と定義した。【0027】上記試験の結果を図1~4に示す。これらの結果から、作用時間に拠らず、スフィンゴイド類又はN-アセチルスフィンゴシン類(以下、まとめて「スフィンゴイド類」という場合がある)の濃度が25μMで、生存率が急激に落ちることが分かった。この理由については不明であるが、スフィンゴイド類によりアポトーシスが誘導されたことによる可能性が示唆される。上記試験と別に、PHS、SPH、SPG、Cerについて、20μMの濃度で同上の試験を行ったところ、生存率が初期の30~80%程度となり、25μMの場合の約2倍強であった。ここから、カスパーゼ合成促進剤の濃度は、20μM以下が好ましいことが分かった。下記手順によるウェスタンブロッティング法により、スフィンゴイド類によるプロカスパーゼ14の発現性を調べた。Cerを溶解した有機溶媒を0、5、15μL添加し、37°CのCO2インキュベーター内で24、48、72時間作用させた。分間遠心することにより、上清を細胞溶解液として回収した。nmの吸光度を測定した。mg/mLに調製した。分間インキュベートした。