9】請求項1ないし8のいずれか1項に記載の核酸切断剤をコードする核酸配列を含む単離された核酸。【請求項10】核酸がDNA又はRNAである請求項9に記載の核酸。【請求項11】請求項9又は10に記載の核酸を含む組換え発現ベクター。13】核酸切断剤の製造方法であって、(a)該切断剤を発現する時間及び条件下で請求項12に記載の宿主細胞を培養する工程、及び(b)該切断剤を回収する工程を含む方法。【請求項14】核酸を部位特異的に切断する方法であって、(a)標的切断部位を有する核酸と、該部位に特異的な請求項1ないし8のいずれか1項に記載の核酸切断剤とを該部位の切断する時間及び条件下で反応させる工程を含む方法。【請求項15】上記切断が触媒的に進行する請求項14に記載の方法。【請求項16】外標的切断部位がゲノムDNA上の唯一の部位である請求項14又は15に記載の方法。【請求項17】所望のDNA領域を置き換えるための細胞内インビボ相同組換え方法であって、(a)該領域内又は近傍に標的切断部位を有するDNAと、該部位に特異的な請求項1ないし8のいずれか1項に記載の核酸切断剤とを該部位においてDNAに切れ込みを導入する時間及び条件下で反応させる工程;(b)該部位又はその周囲における該領域と相同な配列を含むDNAフラグメントを該細胞内に導入する工程;及び(c)相同組換えを達成する工程を含む方法(ただしヒト生体内において細胞内インビボ相同組換えを行う場合を除く)。【請求項18】該DNAフラグメントの導入前に該核酸切断剤が該細胞内に存在する請求項17に記載の方法。【請求項19】該核酸切断剤及び該DNAフラグメントが同時に該細胞内に導入される請求項17に記載の方法。0001】本発明は核酸切断剤に関する。具体的には、ゲノム上の特定の塩基配列を認識して部位特異的にゲノムを切断することができる核酸切断剤に関するものである。【背景技術】【0002】制限酵素の発見により組換えDNA工学による遺伝子クローニングが可能になった。遺伝子工学は様々な産業や研究のめざましい発展をもたらしている。特定塩基配列を選択的に切断できる種々の制限酵素が知られている。これらの酵素は遺伝子工学に不可欠なツールであり遺伝子構造などの解析に広く用いられている。【0003】従来、制限酵素としては天然由来の制限酵素のみが用いられているが、天然由来の制限酵素を用いた遺伝子組み換え操作はプラスミドのように小さなDNAを対象とするものに限定されている。多くのDNAはプラスミドよりもはるかに巨大であり、従来入手可能な制限酵素を用いて処理を行うと極めて多数の箇所で切断されてフラグメント化してしまい、目的の遺伝子組み換え操作ができなくなる。この理由から、巨大なDNAを自在に操作する手段の提供が求めれている。巨大DNA分子中の特定塩基配列を選択的に切断することができる制限酵素の提供が求められている。【0004】例えば、特開2005-143484号公報には、2本のペプチド核酸(PNA)をDNAに侵入させてDNA中の所望の位置のリン酸ジエステル結合を活性化し、その後、Ce(IV)/EDTA錯体を加えて活性部位(ホット・スポット)選択的に核酸を切断する方法が開示されている。この方法では、ホット・スポットの形成に用いるPNAの配列や長さに制限がないことから、いかなる大きさのDNAも所望の部位で正確に切断できるとされる。細胞内で所望の切断を行った実例は示されていない。ZEP)などのDNA結合タンパク質に核酸切断活性を有する酵素や酵素活性部位を結合した融合タンパク質が知られている。