パスツールピペットを用い血球計算盤に細胞浮遊液を載せ,位相差顕微鏡を用いて細胞数を計数し,最適な初期細胞数が得られる濃度(2×105∼5×105個/mL)に希釈する。滴加後,細胞が均一に拡散するようにフラスコを静かに振とうした後,二酸化炭素インキュベータ内に静置する。個を用いた場合を一例として示す。1)培養用フラスコ内で,細胞が単層で増殖し,飽和密度に近い状態のときにフラスコ内の培養液をパスツールピペットを用いて吸引除去する。化炭素インキュベータ中に静置する。分間遠心分離し,上澄み液をパスツールピペットで吸引除去する。