図11Aは、ヒトES細胞由来分化細胞(18日目及び30日目)における内胚葉又は肝マーカーの転写物の発現量を示す。Alb及びCyp7a1が分化した18日目のES細胞で検出された。30日目に、Afpの発現は減少し、Albの発現は著しく増加した。図11Bでは、アルブミン陽性細胞を18日目に検出した。AFP及びアルブミンの両方を発現する細胞が存在した。30日目に、AFPを発現しないアルブミンのみ陽性の細胞のコロニーが明らかになった。ヒトES細胞由来肝細胞は、成熟肝の分子マーカーを発現した。ヒトES細胞由来肝細胞の成熟の度合いを調べるために、肝分子マーカーを、18日目及び50日目の培養物を用いて定量PCRにより分析した。分子マーカーの発現量を、22-40週の胎児肝臓又は成人肝臓と比較した。Afpは18日目に発現し、50日目に減少した。50日目の発現量は、胎児肝臓の量よりはるかに高かった。G156-164)が18日目に検出され、50日目にはかなりの量まで増大した。24日目と50日目の大部分の分化したヒトES細胞はPAS陽性であり、グリコーゲン沈着を示した。M15細胞上で継代することによってアルブミン陽性肝細胞の割合が上昇した。効率よく分化したことを示す。図1の(A)は、最終分化した内胚葉(E-カドヘリン+/Cxcr4+)またはPdx1/GFP発現細胞のフローサイトメトリー分析による定量化を示す。ES細胞をM15細胞上で培養し、d0~d4にアクチビンとbFGFを加えた。mg/L)培養液内で培養し、d8にフローサイトメトリー分析によりE-カドヘリン+/Cxcr4+で定義される最終分化した内胚葉細胞とPdx1発現細胞の割合を評価した。図1の(B)は、分化したES細胞内で最終分化した内胚葉細胞(E-カドヘリン+/Cxcr4+)におけるShhならびにAfp転写の相対レベルのリアルタイムPCR分析結果を示す。cDNAをテンプレートとして使用した。ShhおよびAfp転写レベルはβ-アクチンのレベルと対比して定量化し、標準化した。mg/Lのブドウ糖、10%FBSを加え、成長因子は加えない条件下で分化したES細胞)と比較した。