有し、配列番号1~4においてチミンをウラシルとした四種類の二本鎖RNAを有するマイコウイルス。前記植物病害真菌の分生子形成を抑制する請求項1記載のマイコウイルス。イネ科植物に対する植物病害真菌を抑制する請求項1記載のマイコウイルス。イネいもち病菌を抑制する請求項1記載のマイコウイルス。配列番号1~4においてチミンをウラシルとした四種類の二本鎖RNAを有するマイコウイルスゲノム。配列番号1~4のいずれかに示す塩基配列からなる核酸。マイコウイルス生産方法。【背景技術】【0002】植物病害には、気象・土壌など環境的要因で発生するもの、ウイルス・細菌・真菌(糸状菌)などの感染性要因で発生するもの、生理的障害により発生するもの、それらの複合的な要因で発生するものなどが存在する。現在においても、植物病害の中には食糧、花き、花木、樹木などの生産に阻害要因となるものが数多く含まれ、経済的影響が大きいものも多い。【0003】植物病害のうち、真菌は、最も重要な病害因子の一つである。植物病害の約8割は真菌によって引き起こされるといわれている。【0004】例えば、いもち病は、世界各地で発生している最も重要な植物病害の一つである。oryzae」)である。適温であり、また、湿潤な環境を好む。気象要因により大発生し、イネの不作・品質低下をもたらし、経済的に大きな打撃を与える。病、灰色かび病など、真菌が原因で経済的影響も大きい植物病害は数多く存在する。そのため、現在においても、新しい農薬の開発や、品種改良などが試みられている(いもち病の防除に関して、例えば、特許文献1、2参照)。【0006】ここで、本発明に関連する事項であるマイコウイルスについて、以下説明する。【0007】真菌類(Fungi、以下同じ)に感染するウイルスをマイコウイルスという。その中で、二本鎖RNAをゲノムとするマイコウイルスが報告されている。それらのマイコウイルスは、宿主菌に潜在的に感染し、宿主の形質にほとんど影響を与えないものが多い。【0008】二本鎖RNAをゲノムとするマイコウイルスは、現在、パルチチウイルス科(学名「Partitiviridae」、以下同じ)、トチウイルス科(学名「Totiviridae」、以下同じ)、クリソウイルス科(学名「Chrysoviridae」、以下同じ)など、5科に分類されている。パルチチウイルス科ウイルスは、ウイルス粒子中に、二つのほぼ同じ大きさの直鎖状二本鎖RNAを有し、全遺伝子量は4~6kbpである。トチウイルス科ウイルスは、ウイルス粒子中に4~7kbpの一本の直鎖状二本鎖RNAを有する。parasitica」)では、菌内在性に存在し、9~13kbpの二本鎖RNAを有するウイルスが発見されている(ハイポウイルスなど)。【0009】クリソウイルス科ウイルスは、球形のウイルス様粒子を有し、四成分の二本鎖RNAを有する。polymerase;RNA依存性RNAポリメラーゼ、以下同じ)をコードする領域を有することが知られている。1」、以下同じ)などが知られている(非特許文献1など参照)。【0010】近年、特定の植物病害に対し、その病原菌をマイコウイルスなどで弱毒化し、その弱毒菌を用いてその病害を防除する方法が検討され、一部実用化されている。用いて紫紋羽病を防除する方法(非特許文献3、特許文献3など参照)などが開示されている。抑制するマイコウイルスの発見は少なく、そのようなマイコウイルスを用いた植物病害防除の試みもほとんど行われていない。そこで、本発明は、植物病害真菌を抑制する新規なマイコウイルス、及び、植物病害の新規な防除手段を提供することなどを主な目的とする。【課題を解決するための手段】【0012】本発明者らは、天然に存在する植物病害真菌を独自に採取し、それらの真菌に対して抑制性に作用するマイコウイルスの探索を行った。有し、2.8~3.6kbの四種類の二本鎖RNAを有する新規マイコウイルスを単離・同定し、かつその全長配列を得た。有し、2.8~3.6kbの四種類の二本鎖RNAを有し、天然に存在し、発明者らによって単離された新規マイコウイルス、それらの遺伝子、その塩基配列、その配列中、所定機能を有する特定部分の配列を少なくとも有する核酸、その配列がコードする一又は複数のタンパク質などを提供する。【0014】このマイコウイルスは、二本鎖RNAの配列中に、RdRp(RNA依存性RNA合成酵素)の保存モチーフを含み、かつその領域をコードするRNAの塩基配列が既知のクリソウイルス科ウイルスと相同性を有する。従って、このマイコウイルスは、クリソウイルス科に分類される新種のウイルスであると推測する。【0015】上記の通り、このマイコウイルスは、植物病害真菌の生育などを抑制する作用を有する。従って、例えば、このマイコウイルスを宿主菌に感染などさせ、宿主菌に内在させることにより、植物病害真菌の弱毒菌株を作製することができる。【0016】また、例えば、本発明に係るマイコウイルス、及び/又は、作製した植物病害真菌の弱毒菌株を少なくとも含有する植物病害防除剤を、植物(イネなど)に付加(散布、塗布など)することにより、その植物病害を防除できる可能性がある。【0017】その他、本発明に係るマイコウイルスには、次のような特徴がある。【0018】従来、マイコウイルスは、菌糸融合により、宿主菌の細胞から細胞へ垂直伝播されるとされており、マイコウイルスの生活環の中に、宿主菌の細胞外に存在する段階は存在しないと考えられている。それに対し、本発明者らの研究により、本発明に係るマイコウイルスは細胞外にも存在しうることが分かった。【0019】従って、菌糸融合に依存せずに細胞外から宿主菌に感染させることができるため、本発明に係るマイコウイルスを、接合型の異なる菌主・菌株間でも幅広く感染させることができ、かつ、宿主菌に対し高効率で感染させることができる。これにより、植物病害真菌の弱毒化や植物病害の防除を、簡易かつ高効率に行うことができる可能性が高い。【0020】また、本発明に係るマイコウイルスは細胞外にも存在するため、例えば、宿主菌を液体培地で培養し、その培養上清からマイコウイルスを回収することにより、簡易かつ比較的大量にマイコウイルスを生産することができる。【発明の効果】【0021】本発明により、簡易かつ高効率に植物病害を防除できる可能性がある。有し、2.8~3.6kbの四種類の二本鎖RNAを有するマイコウイルス全てを包含する。【0023】このマイコウイルスは、各ウイルス粒子が2.8~3.6kbの四種類の二本鎖RNAのいずれかを有し、かつ、その四種類のウイルス粒子が同時に存在する状態で生存・継代する。上述のクリ胴枯れ病菌マイコウイルス及び紫紋羽病菌マイコウイルスは、いずれも12kb以上の単一成分の二本鎖RNAで構成されており、本発明に係るマイコウイルスとは構造が大きく異なる。従って、全く異なるウイルス種である可能性が高く、また、宿主菌に対する弱毒化作用のメカニズムも大きく異なる可能性が高い。【0024】上述の通り、このマイコウイルスは、二本鎖RNAの配列中に、RdRp(RNA依存性RNA合成酵素)の保存モチーフを含み、かつその領域をコードするRNAの塩基配列がクリソウイルス科ウイルスと相同性を有する。従って、このマイコウイルスは、クリソウイルス科に分類される新種のウイルスであると推測する。【0025】このマイコウイルスの四種類の二本鎖RNAの塩基配列を配列番号1~4に、その塩基配列がコードするタンパク質のアミノ酸配列を配列番号5~8に、それぞれ示す。【0026】なお、配列表記載の塩基配列は全てDNA配列として記載されているが、本発明に係る配列は、これらの配列を含め、全て、RNAの場合の配列(チミンがウラシルに置換したもの)も包含する(以下同じ)。【0027】シークエンス解析の結果、RdRp(RNA依存性RNA合成酵素)をコードする領域の塩基配列について、このマイコウイルスとHv145SVとの相同性は22%、類似性は39%、このマイコウイルスとPcVとの相同性は23%、類似性は38%、このマイコウイルスとAbV1との相同性は28%、類似性は45%であった。【0028】従って、本発明に係るマイコウイルスは、クリソウイルス科ウイルス(例えば、Hv145SV、PcV、AbV1のいずれか)のゲノム中におけるRdRp(RNA依存性RNA合成酵素)をコードする領域との相同性が20~100%のもの、又は、類似性が40~100%のものを全て包含する。ここで、「相同性」とは塩基配列が完全に一致していることを、「類似性」とは、アデニンとグアニンとを、又は、チミン(ウラシル)とシトシンとを置換することにより塩基配列が完全に一致することをいう。【0029】本発明に係るマイコウイルスは、所定のイネいもち病菌に内在性に存在する。従って、例えば、このマイコウイルスが潜在的に感染しているイネいもち病菌株からウイルスを分離・回収などすることにより、このマイコウイルスを取得できる。本発明に係るマイコウイルスを内在するイネいもち病菌については、通常のイネいもち病菌と同様の培地・培養条件で培養できる。