H2-P)が出されている。本ガイドラインは造血器腫瘍として白血病、悪性リンパ腫の表面抗原解析を中心に策定されたものであるが、マーカー検査の全体的な注意点などの指針を示すもので、抗体や蛍光物質の選択、さらに解析方法など具体的な記述はないため、Cytometristの力に大きく影響される。1)免疫染色法(抗体濃度の基本は、10~500ng/test)細胞数は2×106~1×107/mLで0.1mL使用するが、さらに少なくても解析は可能である。細胞数が多い場合は抗体量が不足するので、細胞濃度に注意する。一般に市販抗体は、1テスト当たりの使用液量が規定されているが、中には必要量以上の抗体を含んでいることがあるので、各施設で検定することを勧める。検定方法は末梢リンパ球などを対象に染色し、十分な蛍光強度が得られるか?その蛍光強度は2倍、4倍、8倍と希釈してどのくらい変化するのか?を注意して調べる。FITC標識抗体の方が蛍光強度が高値であった.一般にPE標識抗体の方が蛍光強度が高いとされるが,クローンによってはPE色素の標識が困難な場合があり,蛍光強度が低い製品があるので,一概に標識色素で検出感度を比較しない3.同一クローンのメーカー差について,FITC標識体A社とB社の抗体クローンは同一であり抗体濃度も同一である.しかし,染色性(蛍光強度)は大きく異なり約4倍の差を認めた.このように同一クローンであっても標識過程での抗原結合力の失活や,抗体濃度およびF/P比が同一であっても,標識抗体の回収分画に差があるなど,一概にクローン名で標識抗体の検出感度を比較しない.2)1次スクリーニング(2重染色が安価で解析も容易である)基本的には多重染色による解析が必要である。2重染色が挙げられる。CD45が弱陽性であれば浸潤の有無の解析に役立つため、予め腫瘍細胞の発現量の検索は有用である。ゲート」が有効である。骨髄血を対象にする場合には、CD38強陽性細胞が多いため、CD138が有用である。ゲートなお、形質細胞を解析目的とする場合には、形質細胞は比重が重く、比重遠心法では単核球細胞分画として回収できないことがあるので注意が必要である。3)追加検査1次スクリーニングの結果、系統や病型を予想して、病型の診断や鑑別に必要となる追加マーカーを選択する。解析方法も、症例毎に腫瘍細胞の割合や混在している細胞により、階層化ゲートやマーカーの組み合わせが変わるので、その点も十分考慮する必要がある。時にはCD13、33などの骨髄系マーカーの検索も必要である。