5:495)とし、初期設定をB液20%とし、25分間でB液を60%とし、引き続き15分間でB液を100%とする、直線的グラジエント濃度勾配法で行った。ml/minに設定し、525nmの波長でアントシアニンを、340nmの波長でフラボノールを同時に検出した。フラボノイドの評品は、アントシアニンとしてデルフィニジン、シアニジン、ペオニジン、ペラルゴニジン、ペチュニジン、マルヴィジンを用い、フラボノールとしてケンフェロール、クエルセチン、ミリセチン及びイソラムネチンを用いた。結果を図2及び図3に示す。図2からスイートピー赤色花弁ではステージ7から急速にCy(シアニジン)とPn(ペオニジン)が生成されることが分かる。図3からスイートピー紫色花弁ではステージ6から急速にDp(デルフィニジン)及びMv(マルヴィジン)が生成され、Pt(ペチュニジン)はステージ9で最大値の含量であることがわかる。このように、赤色花弁及び紫色花弁で、ステージごとにメチル化アントシアニン含量が増えることが分かった。mRNAは、図2及び図3に示す各ステージのスイートピーのつぼみと、栄養系器官(葉)から調整した。各材料のmRNA(1μg)は、下記プライマーセットを用いて前述の方法でcDNAから逆転写することによって取得した:5’-TTCATGGGCACTGCGCCTGATG-3’;及び5’-ATGCCACAGTTCCACCCCAAAG-3’。後者のプライマーは、400bpまでの断片を増幅して得られた配列をもとに設計した。Biosystems)を用いて、定量的逆転写RT-PCRを行い、スイートピーの花弁の各ステージのmRNAの変化を測定した。反応は3回繰り返し行い、その条件は以下の通りであった。Dye(0.4μl)をさらに加えた。Japan)を用いて測定した。熱変性のサイクル条件は、95°Cで10秒間の1サイクルの後、95°Cで5秒間と60°Cで31秒間の40サイクル、並びに、95°Cで15秒間、60°Cで1分間と95°Cで15秒間の1サイクルで行った。その結果を図4に示す。rRNAを平準化することによって定量した。RT-PCRの結果を見ると、全てのステージでOMTが発現しているが、葉(L)での発現は認められないことから、本発明のOMTは花で多く発現していると考えられる。リアルタイムPCRの結果を見ると、花弁の発育ステージは進むにつれてOMTの発現の増加が見られた。【産業上の利用可能性】【0060】本発明によれば、スイートピーの花色発現に関与するO-メチル化変換酵素が提供される。【0061】本発明に係るO-メチル化変換酵素をコードするDNA配列を、公知の方法によって、スイートピーの種内に単独で若しくは他の遺伝子と組合せて同時に導入するか、又は他の植物種に単独で若しくは他の遺伝子と組合せて導入することにより、その植物中でフラボノイド及びポリフェノールの生合成を改変または制御することができ、これによってその植物中で生理活性物質を産生すること及び花色に多様性や新たな機能を付与した植物を開発することが可能になる。【0062】また、本発明に係るO-メチル化変換酵素遺伝子を大腸菌などの適当な宿主で発現させたり、公知の方法により無細胞生物系で発現させて、精製タンパク質を取得し、これを触媒としてフラボノイドやポリフェノールの化学構造を変化させて新たな機能をもたせることが可能になると期待できる。