増幅装置は検出用電極からの脳波信号を増幅する装置であり、当該装置を備えることにより高感度の検出が可能となる。増幅された信号は解析装置によって解析される。PC(パーソナルコンピュータ)を解析装置として利用できる。解析結果は例えばディスプレイに表示される。【0051】当該態様の検知/予知システムは次のように作動する。kHzの音域の音を発生する。検出した脳波信号を増幅装置が増幅する。続いて、増幅された脳波信号を解析装置が解析する。以上の一連の工程によって、加齢性難聴若しくは騒音性難聴又は耳鳴りの検知又は予知に有益な情報が解析結果として得られる。この態様のシステムは、音を感得したことを表現することが困難な対象(例えば乳幼児やヒト以外の哺乳動物)に対する検査を実施する際に特に有用である。Apr;105(7):925-33)に準じて作製した。Ednrbのコード領域をDbh-cDNA発現ベクターに組み込み、定法に沿ってトランスジェニックマウスを作製した。このようにして作製した7ヶ月齢のDbh/Ednrb-Tgマウスと野生型マウスの内耳におけるEdnrbの発現状態を、Ednrb抗体を用いた免疫組織染色により調べた。ブアン液を用いて還流固定を行い、内耳を摘出した。kit/HRP(DAB、ダコ)を用いて検出し、核をヘマトキシリンで染色した。Dbh/Ednrb-Tgの内耳について、Ednrb抗体を用いた免疫組織染色を行ったところ、Dbh/Ednrb-Tgの内耳コルチ器の蓋膜(図1d、矢印)においてEdnrbの発現が見られたが、野生型では見られなかった(図1a-d)。マウスは麻酔をかけ、4kHz~40kHzの聴力についてABRにより測定した。その後、82dBの騒音を10分間暴露し、直ちに4kHz~40kHzの聴力をABRにより測定した。Dbh/Ednrb-Tgマウスの聴力を測定したところ、7ヶ月齢のEdnrb-Tgマウスは野生型とほぼ同程度の聴力であったが(図1e)、82dBの騒音を10分間与えて一過性の騒音性難聴を誘導したところ、野生型と比較してEdnrb-Tgマウスの聴力は騒音抵抗性を示した(図1f)。この結果は、内耳のうち、蓋膜等のEdnrb発現を亢進させることにより、騒音性難聴に抵抗性を誘導できる可能性を示している。System(プロメガ)を使用した。LTXを用いて細胞にトランスフェクトした。翌日、トランスフェクトした細胞を96ウェルプレートに1x104細胞/穴で播きなおした。FBS含有培地に化合物を希釈し、細胞に添加した。Bufferで細胞を溶解し、ルミノメーターでルシフェラーゼ活性を測定し、EF1α(内部標準)で標準化を行った。難聴抵抗性薬剤の開発を目的とし、培養細胞を用いてEdnrbの発現を上昇させる化合物のスクリーニングを行った。kbのプロモーターを用いてその下流にルシフェラーゼの遺伝子を発現するベクターを構築し、ルシフェラーゼアッセイによるスクリーニング方法とした。スクリーニングの結果、以下に列挙する62種類のエキスと、265種類の化合物(図6~30に各化合物の構造を示す)が選出された。ヒト細胞およびマウス細胞におけるEdnrbのプロモーターアッセイ。コントロールに対しての比活性を示す。マウスを用いた騒音性難聴の実験は永久的難聴を引き起こすものが多く、日常生活でさらされる騒音レベルで引き起こされる一過性難聴のモデルは非常に少ない。2004)測定のタイミングが難しい。モデル動物の創出を目指し検討した。その結果、野生型マウスC57BL/6に対して70-100dB、5-60分間の騒音を与えると翌日に聴力が回復することを確認し、当該手法が一過性騒音性難聴の誘導に有効であることが判明した。スクリーニングによって選抜された化合物ルテオリンの騒音性難聴に対する効果を調べた。ルテオリン水溶液を自由飲水により5ヶ月齢の野生型C57BL/6マウスに投与し(1ヶ月間)、内耳蓋膜のEdnrbの発現状態を調べた。同様にルテオリンを投与したマウスに82dB、10分間騒音を暴露し、ノイズ暴露前後の12kHzにおけるABR閾値変化を測定した。マウス・ヒト両方の細胞でEdnrbの発現を上昇させる化合物の一つであるルテオリンについて、ルテオリン水溶液を自由飲水により5ヶ月齢の野生型C57BL/6マウスに投与し、1ヶ月間摂取させたところ、Ednrb-Tgマウスと同様に内耳コルチ器蓋膜においてEdnrbの発現がみられた(図2d、矢印)。ルテオリン投与マウスに騒音を暴露させ、騒音前後の聴力レベルを比較したところ、ルテオリン投与群は、12kHzにおいて、騒音性難聴に対し、統計学的に有為なレベルで抵抗性を示した(図2e)。このように、Ednrbの発現を上昇する化合物として選抜されたルテオリンが騒音性難聴に有効であることが示された。5ヶ月齢のC57BL/6マウスのABRを測定した後、ルテオリン溶液(2.5mg/ml)を2ヶ月間自由飲水させた。その後、再度ABRを測定した(図3a)。5ヶ月齢から2ヶ月間ルテオリンを経口投与した野生型C57BL/6マウスについて聴力レベルを測定した。kHzの音域において15-30dBの聴力低下が観察された(図3)。これは、ルテオリンの内服によって加齢性難聴の進行が予防できることを示している。このように、Ednrbの発現を上昇する化合物として選抜されたルテオリンが加齢性難聴にも有効であることが示された。kHzにおける聴力低下が最も高感度な騒音性難聴の指標として用いられてきた。本発明者らは、騒音性難聴を高感度で評価/予知できるシステムの創出を目指して検討した。dB)の音楽を10分間被験者に暴露し、その前後での聴力の閾値変化について測定することにより、高感度に一過性騒音性難聴を検知できることが明らかとなった。kHzで好ましく、毎日1時間以上、ポータブルミュージックプレイヤーを使用している人に、一過性の騒音性難聴を検知した(図5)。普段週3日以下しかMP3プレイヤーを使用していない人では、12kHzにおいて10dB程度の聴力低下が見られた(図5)。以上のように、臨床症状として、従来迄に検知することができなかったレベルの一過性の騒音性難聴を高感度に検知することが可能な方法を見出すことに成功した。kHz)の音源を流すことにより、一過性の騒音性難聴を高感度に検知し、恒久的な騒音性難聴の発症を警告できる。このようなシステムは専用の装置によっても、或いは汎用的な装置(例えばポータブルミュージックプレイヤー)に所定のソフトウエアを組み込むことなどによっても実現可能である。本発明者らは、加齢性難聴を高感度で評価/予知できるシステムの創出を目指して検討した。kHz(特に好ましくは12kHz)を測定することにより、加齢性難聴が進行し始めている徴候(サイン)を高感度に検知し、潜在的な加齢性難聴を評価するとともに、今後の加齢性難聴の進展を予知できることが明らかとなった(図4)。kHzにおける聴力低下の著しいほど加齢性難聴の強い徴候があることを示しているので、今後、健康診断(集団検診)等の聴力検査にて、「加齢性難聴の現状の評価と進行の予想」として応用することができる。上記7.で示した知見を基に、騒音性難聴に対するルテオリンの効果を調べた。騒音曝露(75-80dB、10分間の音楽)の前後で被験者(30代男性)の聴力(1,4,8,12,16kHz)を測定した。m/日)を4週間内服にて投与した。その後、騒音曝露(75-80dB、10分間の音楽)の前後で被験者(30代男性)の聴力(1,4,8,12,16kHz)を再度測定した。ルテオリン投与前後の聴力低下レベルを比較した結果、一過性の騒音性難聴(騒音暴露後の12kHzにおける10dBの聴力低下)を引き起こしにくくなったことが示された。より新生児から老人まで幅広く発症する難聴であり、人においては現在内耳有毛細胞の再生を行う治療薬が存在しないため、有効な治療法が存在しない。)の複合的予防効果(参考文献2)といった報告がある。内耳の血行改善と酸素分圧を高める目的で行う高圧酸素療法などがある(参考文献3)。これらの現存する治療手段はいずれも限界があり、臨床的に満足できる結果を達成できるものは未だなく、回復が見込めないとなると補聴器を使用することとなるが、一般に、補聴器は感音難聴には効果が乏しい。研究レベルでは、ウイルスベクターを用いた有効遺伝子の導入(参考文献4)、BDNF・GDNFなどの神経栄養因子を内耳に直接導入すること(参考文献5、6)が動物レベルで試みられているが、いずれも内耳に直接導入する方法であり、臨床化に向けてのハードルは高い。よって、一度難聴になってしまうと治療は難しく、難聴にならないための予防策が必要とされている。現在臨床的に使用されている難聴予防薬は存在せず、耳栓などの物理的な遮蔽に頼っているのが現状である。本研究では、Ednrb-Tgマウスにおいて蝸牛蓋膜でのEdnrbの発現が上昇することに着目し、このマウスに難聴抵抗性があることを示した。本研究で用いたプロモーター(DbHプロモーター)は神経堤に由来する末梢神経および色素細胞において発現することから(参考文献7、8)、内耳において聴力の制御に大変重要である聴神経(末梢神経)および血管条中間細胞(色素細胞)の両方に働きかけることのできるDbHプロモーターは最適であると言える。実際、蝸牛においてDbHが蓋膜に発現していることが報告されており(参考文献9)今回のデータとも矛盾しない。抵抗性を示すことが分かった。この化合物は、フラボノイドの一種で抗炎症作用があり、飲み水としてマウスに摂取させると、小脳におけるLPSによるIL-6産生を抑制するという報告があり(参考文献10)、経口投与でも十分に生体に効果があると考えられた。Ednrbの発現を上昇させる化合物を含んだ飲み水を摂取することで、遺伝子を強制発現させた場合と同様な発現パターンを起こすことから、実際に内耳でEdnrbの発現が亢進して機能していることが示され、さらに難聴に対して抵抗性があることは画期的なことであり、従来、予防薬が存在しなかった難聴に対して、容易に内耳に作用させることができる方法として臨床的にも大変有用な方法であるといえる。(2008)【産業上の利用可能性】【0070】本発明の予防・治療剤は加齢性難聴若しくは騒音性難聴又は耳鳴りの予防又は治療に有効である。利用形態としては例えば、加齢性難聴の予防として、高齢者による日常的/継続的な利用(摂取、投与など)が想定される。騒音性難聴の予防に関しては、騒音下での作業従事者やミュージックプレーヤーなどの利用者による日常的/継続的な利用の他、大音響環境下に置かれる者(例えばコンサート出席者)による単発的な(事前の)利用が想定される。【0071】この発明は、上記発明の実施の形態及び実施例の説明に何ら限定されるものではない。特許請求の範囲の記載を逸脱せず、当業者が容易に想到できる範囲で種々の変形態様もこの発明に含まれる。特許公報などの内容は、その全ての内容を援用によって引用することとする。