(但し、飲食品を除く)。0001】本発明は難聴及び耳鳴りの治予・防療に有効な手段に関する。詳しくは、加齢性難聴若しくは騒音性難聴又は耳鳴りの予防・治療剤及びその用途に関する。加齢性難聴若しくは騒音性難聴又は耳鳴りの予防・治療に有効な物質のスクリーニング方法に関する。【背景技術】【0002】工場などでの騒音、あるいは最近ではポータブルミュージックプレイヤーなどの普及に伴い、若者のみならず幅広い年齢層で大音量の環境に曝露される機会が増えている。発症を促進することが指摘されており産業労働衛生上の観点からも大変な問題となっている。ともに感音性難聴であり、内耳の有毛細胞の脱落およびそれに基づく神経線維の変性、らせん神経節細胞の脱落等により生じる。よって治療は大変困難であり、現在新しい治療法の開発が急がれている。いった感音性難聴は、耳鳴の主たる原因となっている。(2004)【発明の概要】【発明が解決しようとする課題】【0004】以上の背景の下、本発明の課題は、加齢性難聴や騒音性難聴、或いは耳鳴りの予防・治療に有効な手段を提供することにある。【課題を解決するための手段】【0005】上記課題を解決すべく本発明者らは、エンドセリンレセプターB(Ednrb)に着目した。Ednrbは、Gタンパク質受容体の一つであり、腸管神経節や色素細胞に発現している。内耳には色素細胞である中間細胞が存在しており、内リンパ液の高K+濃度を維持して、有毛細胞にK+が取り込まれて蝸牛マイクロフォン電位を増幅し、聴力を発揮するのに重要な役割を担っている。Ednrbノックアウトマウスは中間細胞を欠損しており、巨大結腸症と難聴を発症するWaardenberg-Shar症候群のモデルとして知られている。呈し、神経堤に由来する腸管神経節細胞の欠損により一ヶ月ほどで死亡する(非特許文献1)。同様にEdnrbの変異マウスであるWS4マウスは、先天性難聴を発症することが報告されている(非特許文献2)。神経系におけるEdnrbの過剰発現が聴力に与える影響については全く報告がない。本発明者らは、聴力の制御にEdnrbが関与しているのではないかと考え、種々の検討を行うことにした。ドーパミンβヒドロキシラーゼプロモーター下でEdnrbを強制発現するDbh/Ednrbトランスジェニックマウス(Ednrb-Tgについては非特許文献3を参照)を用いた試験系を構築した。ドーパミンβヒドロキシラーゼは、神経伝達物質であるドーパミンをノルアドレナリンに変換する酵素である。ノルアドレナリンはノルアドレナリン作動性ニューロンから放出されるシナプス伝達物質であることから、ドーパミンβヒドロキシダーゼは神経内分泌系細胞と同様に、ノルアドレナリン/アドレナリン作動性ニューロンのシナプス小胞に存在し、特異的なマーカーとして知られている。kb)の下流にnlacZを繋いだマウスDbH-nlacZは神経提にlacZを発現し、その後、腸管神経系で持続的な発現が見られる(非特許文献4)。内在性DbHは末梢神経、内耳では、蓋膜に発現している(非特許文献5)。【0006】検討の結果、Dbh/Ednrb-Tgマウスでは内耳の蓋膜においてEdnrbの発現を認めるとともに、当該マウスが騒音性難聴に抵抗性を示した。蓋膜は聴力に重要な役割を果たしており、蓋膜に特異的に発現するα-tectorinをノックアウトしたマウスは蓋膜が消失し、聴力が低下する(非特許文献6)。この結果は、内耳の蓋膜におけるEdnrbの高発現が騒音性難聴の予防に有効であることを示唆する。一方で本発明者らは、独自のスクリーニング系を構築し、Ednrbの発現を上昇させる物質を細胞レベルでスクリーニングした。スクリーニングの結果、62種類のエキスと265種類の化合物を同定した。続いて、その中の一つであるルテオリン(Lutelion)を例として、難聴に対する効果を検討することにした。その際、野生型マウスを用いた新規な評価システムを用いた。マウスを用いた騒音性難聴の実験は永久的難聴を引き起こすものが多く、日常生活でさらされる騒音レベルで引き起こされる一過性難聴のモデルは非常に少ない。既報の一過性難聴モデルでは、回復までの時間が短すぎて(非特許文献7)測定のタイミングが難しい。誘導できる評価システムとした。当該評価システムによる検討の結果、ルテオリンを投与したマウスは騒音耐性を示した。ルテオリンに騒音性難聴に対する予防効果を認めた。ルテオリンを投与したマウスでは、Dbh/Ednrb-Tgマウスと同様に、内耳の蓋膜におけるEdnrbの発現が見られた。検討を進めた結果、ルテオリンは騒音性難聴のみならず加齢性難聴に対しても有効であることが判明した。【0007】一方、ヒトの聴力を指標にした新規な試験法を設計しルテオリンの効果を調べたところ、ルテオリンが騒音性難聴に有効であることが実証された。難聴に関する評価系として当該試験法が有効であり且つその利用価値の高いことが示された。更なる検討の結果、ルテオリンに耳鳴り軽減効果も認めた。耳鳴りを予防・治療できることが示唆された。耳鳴りの予防・治療に有効であるとの知見が得られた。これらの疾病ないし病態の予防・治療に有効な物質を見出すために有用な評価系を創出することに成功した。しくは騒音性難聴又は耳鳴りの検知/予知に有用な方法及びシステムを創出することに成功した。[1]エンドセリン受容体Bの発現を上昇させる物質を含む、加齢性難聴若しくは騒音性難聴又は耳鳴りの予防・治療剤。[2]前記物質が、アボガドエキス、アマチャエキス、アルニカエキス、アセンヤクエキス、エンメイソウエキス、オウゴンエキス、オレンジエキス、海藻エキス、カッコンエキス、カミツレエキス、クララエキス、クロレラエキス、ゲンチアナエキス、コンフリーエキス、サクラエキス、サンザシエキス、セイヨウニワトコエキス、セイヨウノコギリソウエキス、ゼニアオイエキス、ダイズエキス、タイムエキス、ウーロン茶エキス、トウヒエキス、ニームエキス、オタネニンジンエキス、ヒオウギエキス、ビルベリーエキス、ビワエキス、ブドウエキス、ペパーミントエキス、ボタンピエキス、メリッサエキス、ヤグルマギクエキス、ユズエキス、ルイボスエキス、レモングラスエキス、レンゲソウエキス、ローズマリーエキス、ローマカミツレエキス、ワイルドタイムエキス、サルビアエキス、バラエキス、ラベンダーエキス、キトサンエキス、絹エキス、牛乳エキス、グルタミン酸エキス、酵母エキス、豚血液エキス、豚胎盤エキス、豚皮膚エキス、ローヤルゼリーエキス、シソの実エキス、ツキミソウエキス、ハマナスエキス、オウバクエキス、バオバブエキス、オクラエキス、キャンドルツリーエキス、ホウセンカエキス、アーモンドエキス及びライチエキスからなる群より選択されるいずれかのエキス、又は図6~30に示す265種の化合物からなる群より選択されるいずれかの化合物である、[1]に記載の予防・治療剤。[3]前記物質がルテオリンである、[1]に記載の予防・治療剤。対象に投与することを特徴とする、加齢性難聴若しくは騒音性難聴又は耳鳴りの予防・治療法。モデルマウスの作製法。(4)ステップ(3)で決定した聴力低下レベルと、被験物質を投与しないこと以外、試験群と同様の処置を施した対照群について決定した聴力低下レベルとを比較し、比較結果に基づき被験物質の有効性を判定するステップ。[9]前記騒音負荷が82dB、10分間の騒音負荷である、[8]に記載のスクリーニング法。(4)ステップ(1)で決定した聴力低下レベルと、ステップ(3)で決定した聴力低下レベルとを比較し、比較結果に基づき被験物質の有効性を判定するステップ。[11]前記騒音負荷が75~95dB、10分間の騒音負荷の騒音負荷である、[10]に記載のスクリーニング法。kHzの音域の音を発生可能な音発生装置と、音域制御装置と、音量制御装置と、外部出力装置とを含む、加齢性難聴若しくは騒音性難聴又は耳鳴りの検知又は予知用システム。[13]更に、検出用電極と、検出用電極からの信号を増幅する増幅装置と、増幅された信号を解析する解析装置とを含む、[12]に記載の検知又は予知システム。kHzの音域の音を発生する工程と、発生した音を外部出力装置が出力する工程とを含む作動方法。kHzの音域の音を発生する工程と、発生した音を外部出力装置が出力する工程と、検出用電極が検出した脳波信号を増幅装置が増幅する工程と、増幅された脳波信号を解析装置が解析する工程とを含む作動方法。kHzの聴力を測定することを特徴とする、加齢性難聴若しくは騒音性難聴又は耳鳴りの検知又は予知法。7ヶ月齢のDbh/Ednrb-Tgマウス(c,d)と野生型マウス(a,b)の内耳におけるEdnrbの免疫組織染色。Dbh/Ednrb-Tgマウスでは、蓋膜(矢印)にEdnrbの発現が見られる(d)。(e)7ヶ月齢のDbh/Ednrb-Tgマウス(n=4)および野生型マウス(n=4)の騒音を与える前のABR閾値。12kHzにおいて大きな差は認められない。(f、4kHzについてはデータ示さず)。7ヶ月齢のDbh/Ednrb-Tgマウスおよび野生型マウスに、82dB、10分間騒音を与えて一過性難聴を誘導した。騒音暴露前後のABR閾値変化を示した。12kHzにおいて、Dbh/Ednrb-Tgマウスは野生型(WT)と比較して騒音前後の閾値変化が小さい。(4kHzについてはデータ示さず。p<0.01)【図7】図6の続き。