血小板は小さな円板状の血球であり、止血作用および創傷の治癒に欠かせないものである。循環している血小板は通常の状態ではかなり非活性(quiescent)の状態であるが、血管が破れたり損傷したりした際には活性化する。血小板の活性化は、コラーゲンなどの成分が露出し、それが血小板表面のレセプタと結合することで行われる。この結合によりシグナル伝達経路が刺激され、血小板凝集や血液凝固および血栓形成が引き起こされる。血栓形成は広範囲に渡る人間の病気の中でも、特に血管疾患の中で主な病因因子の一つである。動脈や静脈で血小板凝集が過剰になるとアテローム性プラークや動脈硬化性プラークが起こり、それによって微細な細胞組織への血液の流れが低減される。血栓形成や関連する疾病を治療するために、レセプタのシグナル伝達を抑制し、血小板凝集を軽減する薬剤が開発されている。そのターゲットとされてきた表面レセプタの一つが、インテグリンαIIbβ3レセプタである。このレセプタはフィブリノゲンと結合し、血小板凝集を引き起こす。臨床用途に承認されたインテグリンαIIbβ3抑制剤には次の三つがある。(1)インテグリンαIIbβ3の活性構造に対するヒト化マウスモノクローナル抗体、(2)フィブリノゲンの結合を阻止するRGD(Arg-Gly-Asp)配列を有するペプチド、そして(3)フィブリノゲンの結合に対抗するディスインテグリン模擬化合物である。これらの抑制剤は血小板凝集を低減させるには有効であるが、三つとも安全性が低い。GPVIもまた、同様に抗血栓剤のターゲットとして使用されてきた血小板表面レセプタである。高等動物の血液を常食する昆虫や無脊椎動物の唾液から得られる化合物がコラーゲン、GPVIリガンドおよびGVI表面レセプタの接触を阻止することが示されている。これらの薬剤は抗血栓効果を示しているが、また出血の危険性が高いとされている。以下は、本発明をより分かりやすく説明するため例として参照した文献であり、参照により本書に組み込むこととする。本発明はシグナル伝達に関し、特に、CLEC-2により血小板活性を調節する組成物および化合物スクリーニング方法に関する。【請求項1】止血疾患を治療するための治療候補を同定するために化合物をスクリーニングする方法において、CLEC-2を発現する細胞に、テスト化合物とCLEC-2リガンドを接触させるステップと、前記CLEC-2を発現する細胞にテスト化合物とCLEC-2リガンドを接触させた場合と、テスト化合物が存在しない環境でCLEC-2を発現する細胞にCLEC-2リガンドを接触させた場合とを比較して、前記テスト化合物の存在により、a)血小板凝集及びb)CLEC-2のチロシンリン酸化のいずれかの指標が増強されているか、または減弱されているかを検出するステップ、とを具備し、前記a)血小板凝集及びb)CLEC-2のチロシンリン酸化のいずれかの指標の増強あるいは減弱により、テスト化合物が止血調節の治療候補であることが示される方法であって、前記CLEC-2リガンドがロドサイチン又はCLEC-2の抗体であるスクリーニング方法。【請求項2】前記細胞凝集が、プロテインキナーゼSykとチロシンリン酸化されたCLEC-2との結合を介した血小板凝集である、請求項1に記載のスクリーニング方法。【請求項3】止血疾患を治療するための治療候補を同定するために化合物をスクリーニングする方法であって、CLEC-2を発現する細胞に、テスト化合物を接触させるステップと、前記CLEC-2を発現する細胞にテスト化合物に接触させる場合と、CLEC-2を発現する細胞にテスト化合物を接触させない場合とを比較して、CLEC-2機能の指標の変化を検出するステップ、とを具備するスクリーニング方法であって、前記CLEC-2機能の指標の変化が細胞凝集の増強であることを特徴とするスクリーニング方法。【請求項4】前記細胞が、血小板である請求項3に記載のスクリーニング方法。【請求項5】止血を調節するための治療候補を同定するために化合物をスクリーニングする方法であって、テスト化合物とCLEC-2リガンドを、CLEC-2を発現する非ヒト動物に投与するステップと、前記テスト化合物とCLEC-2リガンドを投与されたCLEC-2を発現する非ヒト動物と、テスト化合物は投与せずに、CLEC-2リガンドのみ投与されたCLEC-2を発現する非ヒト動物とを比較して、前記テスト化合物を投与した非ヒト動物におけるCLEC-2機能の指標が増強されているか、または減弱されているかを検出するステップ、とを具備するスクリーニング方法であって、前記CLEC-2機能の指標における減弱は、血小板凝集を減弱させることを示し、前記CLEC-2機能の指標における増強は、血小板凝集を増強させることを示すスクリーニング方法であって、前記CLEC-2リガンドがロドサイチン又はCLEC-2の抗体であるスクリーニング方法。【請求項6】前記非ヒト動物が、CLEC-2をコードする外因性核酸配列に遺伝子組み換えされた遺伝子組み換え非ヒト動物であり、前記CLEC-2が前記遺伝子組み換え非ヒト動物に発現する、請求項5に記載のスクリーニング方法。NO:2をコードする核酸配列を含む核酸フラグメントであるスクリーニング方法。特許・技術に関心のある方は、下記問合せ先にご相談下さい。同じキーワードでJ-STORE内を検索することが出来ます。