O EMBRIÃO by sbte 2011 - issuu
PROGRAMAÇÃO CIENTÍFICA XXVI REUNIÃO ANUAL SBTE 30 DE AGOSTO DE 2012 - QUINTA-FEIRA (AUGUST 30, 2012 - THURSDAY) Horário (Schedule) 10:00 - 17:30
WORKSHOPS Workshop 1 - Inseminação Artificial (Artificial Insemination) Título: 1o Simpósio ASBIA/ SBTE de Inseminação Artificial (Title: 1st Symposium ASBIA/SBTE of Artificial Insemination) Coordenadores (Chairs): Dr. Lino Rodrigues Filho e Dr. Pietro Sampaio Baruselli / Palestrantes (Speakers): Dr. Gillds de Robert, Dr. Lino Rodrigues Filho, Dr. José Bento Ferraz, Dr. Milo Wiltbank, Dr. Patrick Blondin, Dr. Heriberto Rodríguez-Martínez (à confirmar) Workshop 2 - Clonagem e Transgênese (Cloning and Trangenesis) Título: 1o Simpósio da Rede Sul-americana de Pesquisa sobre Clonagem e Transgênese em Ruminantes (Title: 1st Symposium of South-American Network for Research on Cloning and Transgenesis in Ruminants) Coordenadores (Chairs): Dr. José Luiz Rodrigues, Dr. James D. Murray, Dr. Flávio Vieira Meirelles / Palestrantes (Speakers): Dr. Roberto Toledo, Daniel Salamone, Dr. James Murray, Dra. Elizabeth A. Maga, Dr. Vicente J.F. Freitas, Dr. Luis Sérgio A. Camargo, Dr. Fidel O. Castro, Dr. Flávio Vieira Meirelles, Dr. Lleretny Rodriguez
Workshop 3 - Reprodução Equina (Equine Reproduction) Título: Monitoramento da Gestação em Éguas e Cuidados com o Potro Neonato (Title: Pregnancy monitoring in mares and care of the newborn foal) Coordenador (Chair): Dr. Cezinande Meira / Palestrantes (Speakers): Dr. Cezinande Meira, Dra. Cláudia B. Fernandes, Dra. Bruna da Rosa Curcio Workshop 4 - Reprodução de Pequenos Ruminantes (Reproduction in Small Ruminants) Título: Produção de Embriões in vivo e in vitro de Pequenos Ruminantes (Title: In vivo and in vitro embryo production in small ruminants) Coordenadora (Chair): Dra. Anneliese de Souza Traldi / Palestrantes (Speakers): Dr. Gareth Evans (a confirmar), Dr. Hernan Baldassarre (a confirmar), Dr. Sergio Nadal (a confirmar) Workshop 5 - Reprodução Multiespécies (Reproduction in different species) Título: Avanços das Biotecnologias Reprodutivas em Animais Silvestres, Pequenos Animais e Humanos (Title: Progress in reproductive biotechnology in wild animals, small animals and humans) Palestrantes (Speakers): Dra. Camila C.D.A. Francia (a confirmar), Dr. Luis Carlos O. Magalhães (a confirmar) Intervalo (Coffee Break)
Cerimônia de Abertura e de Boas Vindas (Opening and Welcome Ceremony) - Dr. Pietro Sampaio Baruselli, Presidente da SBTE, Universidade de São Paulo, Brazil
Situação da Produção de Embriões no Mundo (Status of embryo production in the world) - Dr. Henrik Callesen, Presidente da IETS, University of Aarhus, Dinamarca
Palestra de Abertura (Opening lecture): Caminhos Futuros da Reprodução Animal (Future directions in animal reproduction) - Dr. Bruce Murphy, Université de Montreal, Canadá
Coquetel de Boas Vindas (Welcome Cocktail)
31 DE AGOSTO DE 2012 - SEXTA-FEIRA / (AUGUST 31, 2012 - FRIDAY) BLOCO 1 - OVÁRIO / (SESSION 1 - OVARY)
Horário (Schedule) 08:00 - 08:40
PLENÁRIA: Palestra 1 (Lecture 1): Tratamentos para estimular o crescimento folicular (Treatments to stimulate follicular growth) Dr. Bruce Murphy, Université de Montréal, Canadá
PLENÁRIA: Palestra 2 (Lecture 2): Aumento da fertilidade manipulando a concentração de progesterona em bovinos (Increasing fertility by manipulating progesterone concentration in cattle) - Dr. Milo Wiltbank, University of Wisconsin, Estados Unidos
SBTE CIÊNCIA: Palestra 1 (Lecture 1): Funcionamento molecular do corpo lúteo (Molecular function of the corpus luteum) Dr. Milo Wiltbank, University of Wisconsin, Estados Unidos
SBTE TECNOLOGIA: Palestra 1 (Lecture 1): Efeito da nutrição na resposta ovariana (Effect of nutrition on ovarian response) Dr. José Santos, University of Florida, Estados Unidos
SBTE CIÊNCIA: Palestra 2 (Lecture 2): eCG e funcionamento do corpo lúteo (eCG and corpus luteum function) Dra. Paula Papa, Universidade de São Paulo, Brasil
SBTE TECNOLOGIA: Palestra 2 (Lecture 2): Tratamentos de superestimulação para aumentar a eficiência da OPU (Superstimulatory treatments to increase efficiency of OPU) - Dr. Patrick Blondin, L'Alliance Boviteq, Canadá
COMPETIÇÃO DE ESTUDANTES (GRADUATE STUDENT COMPETITION)
ESPAÇO PARA EMPRESA (COMPANIES) ALMOÇO (LUNCH BREAK)
Horário (Schedule)
BLOCO 2 - ÚTERO (SESSION 2 - UTERUS)
PLENÁRIA: Palestra 1 (Lecture 1): Saúde Uterine (Uterine health) - Dr. Robert Gilbert, Cornell University, Estados Unidos
PLENÁRIA: Palestra 2 (Lecture 2): Ambiente Uterino e Desenvolvimento Embrionário (Uterine environment and embryo development) Dr. Fuller Bazer, Texas A&M University, Estados Unidos
SBTE CIÊNCIA: Palestra 1 (Lecture 1): Modulação da função endometrial por fatores endócrinos e parácrinos (Modulation of endometrial function by endocrine and paracrine factors) Dr. Fuller Bazer, Texas A&M University, Estados Unidos
SBTE TECNOLOGIA: Palestra 1 (Lecture 1): Tratamentos para aumentar as taxas de prenhez em receptoras (Treatments to increase pregnancy rates in recipients) Dr. Gabriel Bó, IRAC, Argentina
SBTE CIÊNCIA: Palestra 2 (Lecture 2): Imunologia uterina (Uterine immunology) Dr. Robert Gilbert, Cornell University - Estados Unidos
SBTE TECNOLOGIA: Palestra 2 (Lecture 2): Programação de receptoras em grande escala para fertilização in vitro (Programming recipients for in vitro fertilization in large scale) Dr. Marcelo Seneda, Universidade Estadual de Londrina, Brasil
ESPAÇO PARA EMPRESA (COMPANIES)
SESSÃO DE POSTERES (POSTER SESSION)
01 DE SETEMBRO DE 2012 - SÁBADO / (SEPTEMBER 01, 2012 - SATURDAY) Horário (Schedule)
BLOCO 3 - GAMETAS (SESSION 3 - GAMETES)
PLENÁRIA: Palestra 1 (Lecture 1): Avanços sobre qualidade de sêmen (Progress in semen quality) - Dr. Heriberto Rodriguez-Martinez, University of Linköping, Suécia (à confirmar)
PLENÁRIA: Palestra 2 (Lecture 2): Avanços sobre qualidade do oócito (Progress in oocyte quality) - Dr. Raffaele Boni, University of Basilicata, Itália
SBTE CIÊNCIA: Palestra 1 (Lecture 1): Fatores parácrinos e o oócito (Paracrine factors and the oocyte) - Dr. José Buratini, Universidade Estadual Paulista,
SBTE TECNOLOGIA: Palestra 1 (Lecture 1): Utilização de Sêmen Sexado in vivo e in vitro (Utilization of sexed semen in vivo and in vitro) Brasil Dr. Rubens Paes de Arruda, Universidade de São Paulo, Brasil
SBTE CIÊNCIA: Palestra 2 (Lecture 2): Controle da ovulacão (Control of ovulation) - Dr. Paulo Bayard Gonçalves, Universidade Federal de Santa Maria, Brasil
SBTE TECNOLOGIA: Palestra 2 (Lecture 2): Evolução da OPU (Evolution of OPU) Dr. Raffaele Boni, University of Basilicata, Itália
APRESENTAÇÃO RESUMOS SELECIONADOS
ESPAÇO PARA EMPRESA ALMOÇO (LUNCH BREAK) BLOCO 4 - EMBRIÕES (SESSION 4 - EMBRYOS)
Horário (Schedule) 14:00 - 14:40
PLENÁRIA: Palestra 1 (Lecture 1): Aspectos econômicos da aplicação de biotecnologias (Economic aspects of biotechnology application) Dr. José Santos, University of Florida, Estados Unidos
PLENÁRIA: Palestra 2 (Lecture 2): Novas tecnologias para produção in vitro (New technologies for in vitro production) - Dr. Peter Bols, University of Antwerp, Bélgica
SBTE CIÊNCIA: Palestra 1 (Lecture 1): Estresse calórico (Heat stress) - Dra. Fabíola Lopes, Universidade Federal de São Paulo, Brasil
SBTE TECNOLOGIA: Palestra 1 (Lecture 1): Novas tecnologias de transferência de embriões nos EUA (New technologies of embryo transfer in the U.S.A.) Dr. Charles Looney, Ovagenix, Estados Unidos
SBTE CIÊNCIA: Palestra 2 (Lecture 2): Desafios aos gametas e embriões (Challenges to gametes and embryos) Dr. Henrik Callesen, University of Aarhus, Dinamarca
SBTE CAMPO: Palestra 2 (Lecture 2): Fatores que interferem na qualidade do oócito (Factors that affect oocyte quality) Dr. Peter Bols, University of Antwerp, Bélgica
ASSEMBLÉIA GERAL DA SBTE (MEETING OF SBTE COUNCIL)
JANTAR E FESTA DE ENCERRAMENTO (DINNER AND SBTE CLOSING PARTY)
02 DE SETEMBRO DE 2012 - DOMINGO / (SEPTEMBER 02, 2012 - SUNDAY) Horário (Schedule) 9:00 - 12:00
ATIVIDADE RECREATIVA / SAÍDA HOTEL (HOTEL CHECKOUT)
....................................................................................................................... SBTE - Valores para inscrições 2012 SÓCIOS (ANUIDADE 2011 NÃO PAGA)
SÓCIOS (ANUIDADE 2011 PAGA) Data
559,80**
* 20% Desconto ** 10% Desconto
NOVOS SÓCIOS Data
559,80*
590,90**
* 10% Desconto ** 5% Desconto
Os pagamentos podem ser em 3 vezes nos cartões Visa ou Mastercard
* Valores do Congresso
OBS: A aprovação do Resumo estará vinculada a inscrição de um dos autores no evento
VALORES DO HOTEL MABU DURANTE A XXVI REUNIÃO DA SBTE Valor por pessoa / pacote de 3 noites entre o período de 29 de Agosto a 03 de Setembro: - Apartamento Single: R$ 1.488,00 + 3% ISS - Apartamento Double: R$ 939,00 + 3% ISS - Apartamento Triplo: R$ 853,00 + 3% ISS - Apartamento Quádruplo: R$ 770,00 + 3% ISS Diária inclui: - Café da manhã (06 às 10 horas); - Almoço Buffet Sugestão Du Chef dias 30 (para quem chegar no dia 29), 31, 01 e 02 de Setembro; - Jantar Buffet Sugestão Du Chef dias 29, 30, 31 de Agosto e 01 de Setembro; - Welcome Drink (batidinhas de frutas tropicais servidas durante o check in); - Equipe de recreação com atividades específicas para eventos; - Transfer de chegada e saída do aeroporto de Foz do Iguaçu realizada pela Chamon; OBS: Para as entradas antecipadas e saídas posteriores serão mantidos os mesmos valores previamente contratados neste caso cobrado por noite adicional / apartamento. Contatos para reservas e pagamentos diretamente com o Hotel Mabu - Fone: 4002.6040 (capitais) 0800.417040 (outras localidades) ou (41) 3219.1120 - falar com Adrieli (adrieli@hoteismabu.com.br ou reservas@hoteismabu.com.br). Reservas também pelo site: www.hoteismabu.com.br (procurar logo do evento)
Condomínio Empresarial SBTE
Pietro Baruselli Presidente da SBTE (Gestão 2011 - 2013) Caros amigos, Estamos no princípio do nosso mandato à frente da diretoria da SBTE. Encontrar-se à frente dessa importante Sociedade de ciência e tecnologia muito nos honra. A entidade é hoje referência em realizações com credibilidade e seu nome se insere com destaque entre os grandes impulsionadores do desenvolvimento da agropecuária brasileira. Teremos muito trabalho pela frente para manter o alto nível de qualidade impresso pelas administrações anteriores, mas não pouparemos esforços para correspondermos à confiança em nós depositada nas pequenas e grandes tarefas da nossa Sociedade. Confiamos que, juntos com todos que fazem parte da nossa entidade, teremos a capacidade de lutar para tornar cada vez mais brilhante o nome da SBTE no cenário da reprodução animal nacional e internacional, colaborando para ampliar reconhecimento da sua contribuição à sociedade. Desde o início de nossas atividades estamos contando com o irrestrito apoio de todos os atuais diretores, dos representantes das empresas do condomínio e de veterinários de campo, colaboradores e profissionais das mais diversas áreas, ressaltando sempre o espírito de equipe, sem o qual não atingiremos com êxito nosso principal objetivo: a difusão e atualização de conhecimentos científicos e tecnológicos e sua aplicação para gerar benefícios à sociedade. Dessa forma, acredito que estaremos contribuindo para a construção de uma sociedade mais justa e ética, por meio de nossa competência, nosso talento e sucesso como profissionais e cidadãos. Aproveito para agradecer imensamente a colaboração dessa competente equipe de gestores, que deixaram seus afazeres para que juntos, nos dedicássemos à SBTE. Gostaria de ressaltar alguns posicionamentos considerados importantes por essa diretoria para aperfeiçoar os serviços prestados ao associado. A programação científica da próxima reunião anual foi elaborada considerando tanto os interesses e necessidades dos técnicos de campo e empresários do setor, quanto dos acadêmicos e cientistas. Com esse intuito, estamos contando com a participação ativa do representante dos profissionais de campo nas decisões da diretoria. Montamos quatro
módulos temáticos que serão contemplados com duas conferências de renomados cientistas sobre assuntos pertinentes à fisiologia e biotecnologia da reprodução animal. Em seguida às plenárias, os congressistas poderão optar pela continuidade do aprendizado e atualizações escolhendo palestras aplicadas (SBTE tecnologia) ou científicas (SBTE ciência) sobre o mesmo tema, as quais ocorrerão simultaneamente. Acreditamos que dessa forma poderemos contemplar os anseios de nossos congressistas, sejam cientistas, estudantes ou profissionais liberais trabalhadores de centros de reprodução animal e de fazendas. Na tentativa de somar esforços e de agregar ao nosso evento importantes entidades ligadas ao setor da biotecnologia da reprodução animal, estamos organizando, em parceria com a Associação Brasileira de Inseminação Artificial (ASBIA), o 1 o Simpósio ASBIA / SBTE de Inseminação Artificial. Com isso, esperamos nos aproximar ainda mais dos profissionais que trabalham com a inseminação artificial e contar com a participação ativa das empresas ligadas ao setor de produção de sêmen e produtos relacionados. A atual diretoria também procurará intensificar o relacionamento com as empresas do condomínio que apoiam a SBTE desde 1997. Consideramos o condomínio das empresas vital para a sustentabilidade da nossa Sociedade. Trabalharemos para que a SBTE seja, cada vez mais, um efetivo veículo de difusão de conhecimentos e produtos, proporcionando às empresas do condomínio bons negócios que correspondam às suas expectativas e de seus clientes. Nesse sentido, as empresas elegeram um representante que está tendo acesso direto às decisões da nova diretoria. Reiteramos o convite para que todas as empresas do condomínio utilizem essa representação para contribuírem ativamente com críticas, sugestões e propostas, para que, de forma coletiva e transparente, possamos tornar a SBTE um efetivo instrumento de desenvolvimento do nosso setor. Por fim, escolhemos o Hotel Mabú, localizado em Foz do Iguaçu - PR, para sediar nossa próxima Reunião Anual da SBTE, que ocorrerá de 30 de agosto a 02 de setembro de 2012. O hotel possui ótima estrutura para hospedar os congressistas, suas famílias e amigos, além de amplas instalações para a realização dos workshops, simpósios e conferências. Ao lado do centro de convenções, um salão de 2.100 m2 será espaço para a organização dos estandes de empresas e dos centros de convivência, bem como para a realização das apresentações dos pôsteres e dos coffee breaks. Trabalharemos para aproveitar toda essa estrutura e proporcionar ao nosso congressista uma produtiva e agradável permanência. Esperamos vocês em Foz do Iguaçu para mais uma Reunião Anual da SBTE. Contamos com a ajuda de todos para a divulgação da nossa Reunião e convidamos todos os colegas para participarem da nossa Sociedade e ampliar nossa rede de interações. Sinceros abraços Pietro Baruselli
• Ambiente Endócrino Peri-Ovulatório e Receptividade Uterina
• Inseminação Artificial Cresce no Brasil
• Por que os rebanhos de alta produção leiteira tem baixa eficiência reprodutiva ?
• Espectrometria de Massas para o Avanço da Pesquisa e das Aplicações em Biotecnologia de Embriões e Reprodução Animal
• Transferência de embriões produzidos in vitro com sêmen sexado melhora a fertilidade de vacas leiteiras durante o verão • Novo método contraceptivo para gatas • Três genomas são melhores do que dois?
• Redescobrindo o inicio da oogênese?
Pietro Sampaio Baruselli - Presidente Margot Alves Nunes Dode - Vice Presidente
Claudia Barbosa Fernandes - 1ª Tesoureira Eneiva Carla Carvalho Celeghini - 2ª Tesoureira Ricardo José Garcia Pereira - Diretor de Comunicação Mario Binelli - Diretor Científico Mayra Elena Ortiz D'Avila - 1ª Secretária Anneliese de Souza Traldi - 2ª secretária Rodrigo Vitório Alonso - Diretor de Negócios
Márcio Ferreira Mendanha - Consultor de Informática Osnir Yoshime Watanabe - Representante das Empresas Carlos Alberto Rodrigues - Repres. dos Veterinários de Campo Diagramação: Miguel Figuerola Pons Jornalista Responsável: Andréa Russo (MTb: 25541) Tel.: (11) 3875-1682 andrearusso@uol.com.br
Os encantos de Foz do Iguaçu A XXVI SBTE será realizada em Foz do Iguaçu, localizada no Paraná, um lugar rico embelezanatural. Dentre as atrações estão as Cataratas do Iguaçu, localizadas no Parque Nacional, foram consideradas uma das 7 maravilhas do mundoe é um passeio imperdível. As quedas podem ser apreciadas dos mirantes ou passarelas e encantam os turistas por sua beleza. Para os mais aventureiros, é possível fazer passeios de barco, helicóptero, praticar caminhadas, arvorismo, rafting, rapel e escalada em rochas. Nesta região está localizada a Usina de Itaipu, a maior do mundo em produção de energia. A usina possui um Complexo Turístico onde o visitante pode conhecê-la pelo Circuito Especial, além de outras atrações como o Ecomuseu, o Polo Astronômico, o Refúgio Biológico e assistir a Iluminação da Barragem com uma bela trilha sonora ao fundo. Outra opção de passeio é o Parque das Aves, com aves tropicais mantidas em viveiros integrados à floresta em que o turista pode entrar e conhecer de perto estes animais em seu habitat natural. Nesta região está localizada a tríplice fronteira, divisa entre
Brasil, Paraguai e Argentina. No Paraguai é possível visitar a Ciudad del Este e fazer excelentes compras, inclusive de artesanato local. Do lado argentino da fronteira é possível visitar os cassinos e tentar a sorte nos diversos jogos. A cidade possui um amplo parque hoteleiro que atende todas as necessidades e expectativas dos visitantes, além de sistema de transportes, gastronomia e serviços de apoio. O hotel do evento deste ano é o Mabu Thermas & Resort, localizado entre o aeroporto e o centro de Foz do Iguaçu, está próximo às atrações da cidade. E para os que optarem por curtir o hotel, o Mabu Thermas & Resort possui spa relaxante e piscinas naturalmente aquecidas. Situado sobre a maior fonte de águas termais do planeta, oriundas do Aquífero Guarani, as águas permanecem a 36 graus centígrados o ano todo, permitindo banhos pela manhã, à tarde e à noite no Complexo Termal. Além disso, o hotel conta com 360 quartos, completa estrutura de bares e restaurantes e espaço para recreação com atividades diárias para todas as idades. Opções não vão faltar para que os momentos de diversão e lazer sejam inesquecíveis.
Quer conhecer um pouco mais de Foz do Iguaçu? Visite os seguintes sites: http://www.feriasbrasil.com.br/pr/fozdoiguacu/oqueverefazer.cfm http://www.pmfi.pr.gov.br/portal2/home_turismo https://www.turismoitaipu.com.br http://www.visitefoz.com.br
Conheça também o hotel do evento: http://www.hoteismabu.com.br/br/thermas-resort/30/o-hotel.aspx 55
Por que os rebanhos de alta produção leiteira tem baixa eficiência reprodutiva ? Roberta Machado Ferreira Doutoranda do Departamento de Reprodução Animal da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia da Universidade de São Paulo
a produção leiteira, menor a duração do cio e maior a ocorrência de ovulações múltiplas e, portanto, maior o risco de gestação gemelar e perda gestacional. Nota-se, por exemplo, que vacas cuja produção leiteira supera 40Kg/dia têm considerável aumento de ocorrência de ovulações múltiplas, sendo que esta ocorre em mais da metade das vacas com produção acima de 50Kg/d. Essas alterações devem estar relacionadas à elevada ingestão de matéria seca dessas vacas, aumentando fluxo sanguíneo hepático (vacas em lactação = 1.561 ± 57L/h vs vacas não lactantes: 747 ± 47L/h) e, consequentemente a taxa de catabolização de hormônios esteroides (estradiol e progesterona). Assim, apesar de o diâmetro folicular ser maior PRODUÇÃO DE LEITE E SEU IMPACTO NA DETECÇÃO DE nas vacas de alta produção leiteira, a concentração de estradiol é inferior, o que pode explicar o reduzido tempo de expressão CIO E PRENHEZ de cio. Menores concentrações de estradiol também retardam Desde 1950 tem-se notado crescente aumento na produção a ocorrência de feedback negativo ao FSH, permitindo o leiteira. Estudos realizados ao redor dos anos 90 já passaram a crescimento de um ou mais folículos subordinados junto ao evidenciar os reflexos da especialização leiteira e do aumento dominante em um fenômeno conhecido como codominância. da produção de leite dos rebanhos sobre certos parâmetros Isso pode explicar a ocorrência de múltiplas ovulações nesses reprodutivos. Em um deles, foi observado que animais que animais. Vacas de leite de alta produção parecem ter semelhante apresentavam produção acima da média do rebanho tinham taxa de crescimento folicular que vacas com produção leiteira maior intervalo entre o parto e a primeira detecção visual de mais baixa, no entanto, a taxa de aumento da concentração cio (76,9 ± 7,5 dias vs 46,8 ± 4,6 dias). Em outro, foi sanguínea de estradiol é reduzida devido à maior taxa de evidenciado que vacas de maior produção leiteira apresentavam catabolismo hepático desse hormônio nas vacas de alta sinais menos evidentes de estro. Além disso, o nível de produção de leite influencia a duração do cio e a ocorrência de ovulações produção leiteira. Assim, nessas vacas leva-se mais tempo para múltiplas em vacas em lactação (Figura 1). Assim, quanto maior que o estradiol atinja concentrações suficientes para a indução do pico pré-ovulatório de GnRH/LH. Como os folículos permanecem em crescimento por mais tempo (expostos a elevada pulsatilidade de LH), seu diâmetro ovulatório é maior e o oócito em seu interior pode estar superestimulado ou ativado prematuramente ("envelhecido") e, portanto, com qualidade reduzida. Como ao longo dos anos houve constante evolução de técnicas de melhoramento Figura 1. (A) Duração do cio e (B) taxa de ovulações múltiplas de acordo com a produção de leite nos 10 dias anteriores ao cio genético visando o aumento da (Adaptado de Lopez et al., 2004 e Wiltbank et al., 2006). produção leiteira, todas as Em geral, nos últimos anos tem-se observado um declínio da eficiência reprodutiva dos rebanhos leiteiros. Essa queda está relacionada a diversos fatores que podem variar de fazenda para fazenda. Dentre esses fatores destacam-se a produção de leite, a eficiência de observação de cio, o estresse térmico, o escore de condição corporal, a nutrição, o conforto ou ambiência, a técnica de inseminação, a qualidade do sêmen, a fertilidade do touro, as afecções mamárias, uterinas e podais e muitos outros fatores relacionados ao manejo geral da fazenda, aos funcionários e aos próprios animais individualmente. Nesse artigo algumas particularidades relacionadas a alguns desses fatores serão abordadas.
demasiadamente gordas são fonte de prejuízo, pois além de consumirem excesso de alimento, o acúmulo de gordura pode levar a complicações no parto e redução da ingestão de matéria seca no período de transição, aumentando a ocorrência de doenças metabólicas (síndrome da vaca gorda, cetose, deslocamento de abomaso, resistência periférica a insulina, etc), além de causar redução na produção de leite. A condição corporal de vacas leiteiras naturalmente se modifica ao longo do período de lactação. No início da lactação as vacas entram em um período de balanço energético negativo (BEN), uma vez que a quantidade de energia ingerida é insuficiente para suprir a produção de leite e a mantença do animal. Assim, é comum que elas emagreçam, reduzindo seu ECC (mobilização das reservas corporais). Posteriormente, a tendência do balanço energético é de se estabilizar Figura 2. Evolução da taxa de concepção de vacas Holandesas (532 rebanhos) e Jersey (29 rebanhos) ao e, em seguida, as vacas devem entrar longo dos anos (1976 a 1999; adaptado de Washburn et al., 2002). em balanço energético positivo, ganhando peso e repondo as reservas número de dias em aberto e do número de serviços por perdidas no início da lactação. Portanto, a avaliação do ECC concepção. deve levar em conta os estágios da lactação em que as vacas Os estudos acima evidenciam que a especialização dos se encontram. rebanhos leiteiros levou ao aumento da produção de leiteira e O período de BEN é comumente associado com baixa redução da eficiência reprodutiva, representada pela redução fertilidade em vacas, com efeitos negativos sobre a da duração e intensidade do estro, maior número de dias em qualidade oocitária. Por isso, em programas comerciais de aberto, de serviços por concepção e, consequentemente, da taxa OPU-FIV, o uso de vacas não lactantes é muitas vezes encorajado. No entanto, quando essas vacas são de concepção nesses animais. alimentadas excessivamente, a competência oocitária de A IMPORTÂNCIA DA NUTRIÇÃO E CONDIÇÃO CORPORAL desenvolvimento a blastocisto também pode ser prejudicada, especialmente quando se atinge a obesidade. Os mecanismos NA REPRODUÇÃO que mediam a queda da qualidade oocitária podem estar Em bovinos, a condição nutricional e metabólica pode relacionados com alterações endócrinas e metabólicas como interferir nos padrões de crescimento folicular, na secreção hiperinsulinemia, resistência periférica a insulina e de hormônios reprodutivos e na qualidade oocitária. A aumento dos níveis circulantes de glicose e IGF-I, os quais condição corporal dos bovinos é, em geral, função da interferem no transporte de glicose nas células embrionárias interação de fatores genéticos e ambientais, em particular, e aumentam a ocorrência de apoptose. Recentemente, efeitos de aspectos nutricionais e sanitários. A aferição do ECC é negativos do aumento da ingestão de energia foram feita visualmente e o valor atribuído reflete a quantidade evidenciados no perfil metabólico (ocorrência de resistência de tecido depositado em locais específicos, seguindo uma periférica a insulina), na qualidade oocitária e na taxa de escala numérica. Para bovinos de leite utiliza-se com maior blastocistos de vacas Gir não lactantes. Assim, cuidados com a nutrição são fundamentais para frequência a escala de 5 pontos com gradação de 0,25. Nessa o sucesso de programas reprodutivos, sendo a aferição do escala o escore 1 representa uma vaca muito magra, ECC uma ferramenta interessante para o monitoramento enquanto o escore 5 a classifica como excessivamente gorda. desse fator. Como o ECC é utilizado como método de avaliação do alterações supracitadas foram estabelecidas e colaboraram para a redução da taxa de concepção. Isso pode ser notado em um estudo norte americano no qual o aumento da produção leiteira de 532 rebanhos Holandeses e 29 Jersey (expresso pelas barras verticais da Figura 2) foi acompanhado pela redução das taxas de concepção (representada pelas linhas) e pelo aumento do
estado nutricional dos animais, seu registro é uma interessante ferramenta para avaliar a magnitude do déficit energético desses. Existem evidências substanciais associando o ECC ao desempenho reprodutivo de vacas de leite. Já está bem estabelecido que vacas que parem magras, além de reduzirem a produção de leite devido à falta de reservas corporais, demoram mais para manifestarem comportamentos estrais (cio). Por outro lado, vacas
ESTRESSE TÉRMICO E SEU IMPACTO NA EFICIÊNCIA REPRODUTIVA Em todo o mundo as condições climáticas são o principal fator determinante do sucesso na exploração pecuária. Extremos de temperatura combinados à umidade relativa do ar podem levar o animal a um estado de estresse. Do ponto de vista reprodutivo, o estresse é definido como a
condição na qual determinado animal é exposto a alterações avaliado também em vacas repetidoras de serviço. Nessa ambientais que impedem a expressão do seu máximo categoria, além das alterações fisiológicas como aumento potencial, dentre as quais se encontram prioritariamente o da frequência respiratória e da temperatura retal e de estresse calórico e nutricional e a alta produção de leite. superfície cutânea, observou-se redução da taxa de A zona de conforto térmico para bovinos se situa blastocistos, aumento da fragmentação nuclear das células em uma faixa de temperatura ambiente na qual o esforço embrionárias (indicativo de apoptose ou morte celular) e termorregulatório é mínimo e a eficiência de produção é alteração na expressão de genes relacionados à apoptose, máxima. Quando a temperatura ambiente ultrapassa esse produção de chaperonas e replicação/transcrição do DNA limite, ocorre redução gradativa na eficiência dos processos mitocondrial dos oócitos desses animais expostos ao estresse de perda de calor e a vaca entra em estresse térmico. térmico. Esses resultados evidenciam a queda da qualidade Ambientes quentes e úmidos, principalmente durante o oocitária como um dos fatores responsáveis pelos baixos verão em regiões subtropicais ou durante quase todo o ano índices reprodutivos relatados durante períodos de estresse em regiões tropicais, diminuem o desempenho reprodutivo, térmico. o desenvolvimento ponderal e a produção de leite. Essa Métodos para amenizar o impacto do estresse térmico resposta ocorre em menor grau nos zebuínos (Bos indicus) sobre os animais, tais como sombreamento, instalação de do que nas raças não adaptadas (Bos taurus). Nesse sentido, ventiladores, aspersores e ar condicionado já são utilizados sabe-se que a resistência ao estresse térmico é determinada em diversas propriedades com bons resultados. Esses pelo genótipo da vaca e que rebanhos formados por raças esforços melhoram o conforto térmico e desempenho B. indicus ou seus cruzamentos têm se mostrado mais produtivo e reprodutivo dos animais, mas ainda são resistentes às condições tropicais (como elevada temperatura insuficientes para que os mesmos índices do inverno sejam e umidade) do que aqueles formados por raças que alcançados. A demonstração de cio, por exemplo, é um dos evoluíram em climas temperados (B. taurus, como a raça parâmetros reprodutivos que sofre grande influência do Holandesa). Além disso, vacas de alta produção leiteria são estresse térmico, dificultando a detecção de cio e a mais susceptíveis ao estresse térmico por produzirem grande inseminação artificial (IA). Nesse contexto, o uso de quantidade de calor metabólico. protocolos de IA em tempo fixo (IATF) pode ser Apesar de sua superioridade adaptativa nesse quesito, interessante, pois elimina os problemas de detecção de cio vacas Gir (B. indicus) expostas ao estresse térmico causados pelo estresse térmico. No entanto, essa estratégia apresentaram maior período de anestro, codominância ainda não é suficiente para restaurar a taxa de prenhez do folicular e redução da duração do ciclo estral. Além disso, rebanho para os mesmos níveis observados durante os efeito deletério tardio foi observado no crescimento folicular períodos mais frescos do ano, provavelmente pelo fato de ovariano e na competência oocitária, sendo a redução da os oócitos e embriões em estágio de desenvolvimento inicial taxa de blastocisto mantida por até 119 dias após cessado o serem altamente sensíveis ao estresse térmico (Figura 3). período de estresse (termoneutralidade). Assim, acreditaContudo, sabemos que embriões com três dias ou mais se que os folículos e oócitos sofrem injúrias decorrentes do após a concepção são menos sensíveis ao estresse térmico. estresse térmico durante as fases iniciais da foliculogênese, Assim, uma estratégia potencial que vem sendo utilizada resultando em um efeito deletério tardio sobre a função para melhorar a fertilidade durante o verão é a transposição ovariana. Esse resultado ajuda a esclarecer o motivo pelo dos efeitos do estresse térmico sobre os estágios iniciais de qual vacas expostas a estresse térmico demandam períodos desenvolvimento embrionário utilizando-se a transferência de até 2 meses após o término do estresse para retornar a de embriões (TE). Em um estudo retrospectivo, dados fertilidade normal. Sabe-se que durante o período de crescimento folicular o estresse térmico tem o potencial de comprometer o oócito, tanto por um efeito direto da temperatura elevada sobre esta célula, quanto por mudanças na função folicular as quais poderiam comprometer a qualidade oocitária. Entretanto, apesar de existirem diversos estudos demonstrando um efeito evidente do estresse térmico sobre a capacidade de desenvolvimento oocitário após a FIV, os mecanismos exatos pelos quais o oócito in vivo é comprometido ainda permanecem desconhecidos. Figura 3. Temperatura ambiental e taxa de concepção mensal de vacas Holandesas de alta produção após inseminação Em um trabalho mais recente, artificial (IA), durante os anos de 2001 a 2006 (Adaptado de Baruselli et al., 2011). o efeito do estresse térmico foi
Figura 4. (A) Taxa de concepção mensal após inseminação artificial (IA) ou transferência de embrião (TE), durante um período de seis anos e (B) Taxa de concepção e perda gestacional de vacas Holandesas de alta produção por período do ano (primavera-verão e outono inverno) após inseminação artificial (IA) ou transferência de embrião (TE), durante um período de cinco anos (Adaptado de Rodrigues et al., 2007 e Baruselli et al., 2011).
referentes a 12.875 IAs e 4.822 TEs realizadas nos anos de 2001 até 2006 foram analisados e evidenciaram que o uso da TE, além de aumentar a taxa de concepção geral, é eficiente em manter essas taxas mais constantes nas quatro estações do ano, o que não ocorre quando se usa apenas IA (Figura 4A). Independentemente da biotécnica utilizada, a perda embrionária entre 30 e 60 dias de gestação foi maior no período de estresse térmico (Figura 4B). Portanto, o uso da TE possibilitou um incremento no desempenho reprodutivo durante os meses quentes do ano (primavera e verão). Assim, atualmente, a realização de protocolos de superovulação de doadoras nos meses frescos e o consequente congelamento destes embriões para serem transferidos no verão é um procedimento utilizado por diversos veterinários.
EFICIÊNCIA REPRODUTIVA DE VACAS REPETIDORAS DE SERVIÇO Em gado de leite, as fêmeas repetidoras de serviço são normalmente definidas como animais que requerem três ou mais serviços para tornarem-se gestantes. Está bem estabelecido que esses animais têm considerável impacto na economia de fazendas comerciais de leite, sendo responsáveis por um extenso prejuízo econômico ao criador. A taxa de concepção dessas fêmeas, por exemplo, é bastante inferior a taxa de vacas geral rebanho e o uso da TE também tem se mostrado uma importante ferramenta, especialmente durante períodos de estresse térmico, para incrementar as taxas de concepção desses animais (Figura 5A).
Figura 5. Taxa de concepção de vacas repetidoras de serviço Holandesas de alta produção após inseminação artificial (IA) ou transferência de embrião (TE), durante um período de seis anos e (B) taxa de concepção e perda gestacional de vacas Holandesas de alta produção por período do ano (primavera-verão e outono inverno) após inseminação artificial (IA) ou transferência de embrião (TE), durante um período de cinco anos (Adaptado de Rodrigues et al., 2007 e Baruselli et al., 2011).
Com relação à perda gestacional entre 30 e 60 dias de gestação, pode-se dizer que vacas repetidoras de serviço apresentam-se semelhantes às não repetidoras de serviço, independentemente se elas foram inseminadas ou receberam embrião. Esse dado reforça que as falhas reprodutivas dessa categoria devem ocorrer por problemas de qualidade oocitária (conforme citado no item anterior) ou durante o desenvolvimento embrionário inicial. CONSIDERAÇÕES FINAIS Os avanços genéticos da bovinocultura leiteira trouxeram grandes benefícios relacionados ao aumento da produção de leite. No entanto, reflexos negativos dessa especialização no desempenho reprodutivo dos rebanhos passaram a ser foco de preocupação. O bom entendimento de fatores como a aplicação adequada de dietas, avaliação do ECC e o uso de biotecnologias reprodutivas para driblar os entraves causados pelas falhas de detecção de cio, pelo estresse térmico e pela repetição de serviços são hoje ferramentas essenciais para alcançar índices reprodutivos melhores. No entanto, o estudo sobre o mecanismo de ação de cada um desses fatores e o desenvolvimento de novas estratégias baseadas nesse conhecimento é o atual desafio da ciência. Muitos desses estudos já estão hoje em andamento em diversos centros de pesquisa do mundo. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS Al-Katanani, Y.M.; Paula-lopes, F.F.; Hansen, P.J. Effect of season and exposure to heat stress on oocyte competence in Holstein cows. J. Dairy Sci. 85: 390-396, 2002. Baruselli, P.S.; Ferreira, R.M.; Sales, J.N.S.; Gimenes, L.U.; Sá Filho, M.F.; Martins, C.M.; Rodrigues, C.A.; Bó, G.A. 2011. Timed embryo transfer programs for management of donor and recipient cattle. Theriogenology 76, 1583–1593. Butler, W.R., 1998. Review: Effect of protein nutrition on ovarian and uterine physiology in dairy cattle. J. Dairy Sci. 81, 1874–1882. Dechow, C.D.; Rogers, G.W.; Klei, L.; Lawlor, T.J.; VanRaden, P.M. 2004. Body condition scores and dairy form evaluations as indicators of days open in US Holsteins. J. Dairy Sci. 87:3534-3541. Ealy, A.D.; Drost, M.; Hansen, P.J. 1993. Developmental changes in embryonic resistance to adverse effects of maternal heat stress in cows. J. Dairy Sci. 76(10): 2899–2905. Ferreira, R.M.; Ayres, H.; Chiaratti, M.R.; Ferraz, M.L.; Araújo, A.B.; Rodrigues, C.A.; Watanabe, Y.F.; Vireque, A.A.; Joaquim, D.C.; Smith, L.C.; Meirelles, F.V.; Baruselli, P.B. 2011. The low fertility of repeat-breeder cows during summer heat stress is related to a low oocyte competence to develop into blastocysts. J. Dairy Sci. 94, 2383–2392. Hansen, P.J. Physiological and cellular adaptations of zebu
cattle to thermal stress. Anim Reprod Sci v. 82, p. 349–360, 2004. Hansen, P.J. et al. Adverse impact of heat stress on embryo production: causes and strategies for mitigation. Theriogenology, v. 55, p. 91-103, 2001. Hansen, P.J.; Arechiga, C.F. Strategies for managing reproduction in the heat-stressed dairy cow. J Anim Sci. v.77, suppl. 2, p.36-50, 1999. Harrison, R.O.; Ford, S.P.; Young, J.W.; Conley, A.J.; Freeman, A.E. 1990. Increased milk production versus reproductive and energy status of high producing dairy cows. J. Dairy Sci. 73, 2749–2758. Lopez, H.; Satter, L.D.; Wiltbank, M.C. 2004. Relationship between level of milk production and estrous behavior of lactating dairy cows. Anim. Reprod. Sci. 81, 209–223. Pryce, J.E.; Coffey, M.P.; Simm, G. 2001. The relationship between body condition score and reproductive performance. J. Dairy Sci. 84:1508-1515. Rodrigues, C.A.; Ayres, H.; Ferreira, R.M.; Teixeira, A.A.; Mancilha, R.F.; Oliveira, M.E.F.; Souza, A.H.; Baruselli, P.S. 2007. Taxa de concepção à inseminação artificial e à transferência de embriões em vacas Holandesas de alta produção. Acta Scientiae Veterinariae. In: Reunião Anual da Sociedade Brasileira de Tecnologia de Embriões (Costa do Sauípe, Brasil) v.35, p.1254. Rodrigues, C.A.; Ayres, H.; Ferreira, R.M.; Teixeira, A.A.; Mancilha, R.F.; Oliveira, M.E.F.; Souza, A.H.; Baruselli, P.S. 2007. Comparação entre a taxa de concepção após inseminação artificial ou a transferência de embriões em vacas Holandesas de alta produção repetidoras de serviço. Acta Scientiae Veterinariae. In: Reunião Anual da Sociedade Brasileira de Tecnologia de Embriões (Costa do Sauípe, Brasil) v.35, p.1255. Royal, M.D.; Pryce, J.E.; Woolliams, J.A.; Flint, A.P.F. 2002. The genetic relationship between commencement of luteal activity and calving interval, body condition score, production, and linear type traits in Holstein-Friesian dairy cattle. J. Dairy Sci. 85:3071-3080. Sales, J.N.S. Efeito da dieta com alta energia nos parâmetros metabólicos, endócrinos e reprodutivos de vacas Bos indicus e Bos taurus. Tese de doutorado. Departamento de Reprodução Animal, Universidade de são Paulo São Paulo, 2011. 161 p. Washburn, S.P.; Silvia, W.J.; Brown, C.H.; McDaniel, B.T.; McAllister, A.J. 2002. Trends in Reproductive Performance in Southeastern Holstein and Jersey DHI Herds. J. Dairy Sci. 85, 244–251. Wiltbank, M.C.; Lopez, H.; Sartori, R.; Sangsritavong, S.; Gumen, A.; 2006. Changes in reproductive physiology of lactating dairy cows due to elevated steroid metabolism. Theriogenology 65, 17–29.
Inseminação Artificial Cresce no Brasil
Dr. Lino Rodrigues Filho
ASBIA Comemora a Marca de 10% das Matrizes Inseminadas
O primeiro registro que remonta a história de técnica de inseminação artificial se dá em 1748, quando um monge italiano demonstrou ser possível a fecundação de uma cadela sem o contato com o macho. Dois séculos depois, cientistas italianos provaram que os espermatozóides podiam ser conservados em baixas temperaturas, o que viabilizou o crescente uso da técnica de inseminação artificial. Hoje, calcula-se que muitos países inseminam quase a totalidade de seus rebanhos, o que em números significa mais de 106 milhões de fêmeas inseminadas no mundo anualmente. No Brasil, a inseminação artificial chegou por volta de 1940, porém comercialmente a técnica ganhou força na década de 70. A ASBIA - Associação Brasileira de Inseminação Artificial – é a entidade que representa o setor, reunindo 23 centrais de inseminação artificial, o que significa 92% do mercado de produção e comercialização de sêmen. A revista "O Embrião" entrevistou seu presidente, Lino Nogueira Rodrigues Filho, que nos dá informações atualizadas sobre o desenvolvimento da técnica no Brasil.
1) Quando foi fundada a ASBIA e quais são seus objetivos? Lino - A ASBIA foi fundada em 1974 e congrega 23 empresas que se dedicam ao fomento da inseminação artificial (IA), distribuição de sêmen, materiais, equipamentos e outros produtos ligados à reprodução animal. Nosso objetivo é fomentar a utilização da IA na pecuária de corte e leite e representar o setor junto ao MAPA (Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento). 2) E como está o desenvolvimento da técnica de inseminação no Brasil? Lino - Rompemos o patamar de 10% das matrizes inseminadas no Brasil. Um número significativo: crescemos cerca de 70% nos últimos três anos. Só no ano passado, foram comercializadas 11.906.763 milhões de doses, entre sêmen nacional e importado. 3) Ao que se deve este crescimento? Lino - O preço razoável ou mais justo pago pela carne e o leite vem estimulando os produtores a investir em novas tecnologias. Mas grande parte deste crescimento se deve a ampliação do uso da IATF – inseminação artificial por tempo fixo -, que tornou a técnica menos complicada. Para ser ter ideia, foram 6,5 milhões matrizes inseminadas por tempo fixo no ano passado. 4) Mas 10% das matrizes inseminadas ainda é pouco se comparado com outros países? Lino - Na Europa ou nos Estados Unidos a técnica de
inseminação é mais tradicional. Na Europa, por exemplo, cerca de 60% das matrizes são inseminadas. Mas rompemos a barreira dos 10% e até 2013 pretendemos inseminar 13% das matrizes em idade reprodutiva. 5) O que é necessário para crescer mais? Lino - Temos uma grande carência de mão de obra, ou seja, de inseminadores. Também é preciso de maior capacitação do setor em todo processo, pois o sucesso da inseminação artificial depende também de uma boa nutrição e manejo adequado. Por isso, trabalhamos dia a dia para estabelecer parcerias com universidades e outras instituições para formação de técnicos e veterinários capacitados a inseminar. 6) E quais são as vantagens da inseminação? Lino - São várias as vantagens. Comprovadamente os animais fruto da inseminação são mais produtivos. As vacas leiteiras, por exemplo, chegam a ser 8 vezes mais produtivas. Um ganho genético significativo em menor tempo e a um custo mais baixo. Além disso, com a inseminação há maior controle zootécnico e reprodutivo do rebanho, possibilita o cruzamento entre raças, facilita o acesso a reprodutores provados, evita acidentes e até reduz a dificuldade dos partos. 7) Como a parceria ASBIA/SBTE pode colaborar para o avanço produtivo e tecnológico do rebanho nacional? Lino - Acho que vamos levar mais capacitação para o campo e assim popularizar a técnica de inseminação artificial e a transferência de embriões.
Transferência de embriões produzidos in vitro com sêmen sexado melhora a fertilidade de vacas leiteiras Roberta Harue Tsunoda e durante o verão Manoel Francisco de Sá Filho O estresse térmico pode ser considerado como um dos principais fatores responsáveis pela queda dos índices reprodutivos de vacas leiteiras. Além disso, a fêmea leiteira atual apresenta menor capacidade de termoregulação devido principalmente ao seu maior metabolismo decorrente do aumento da produção de leite e da ingestão de matéria seca. Uma das principais alterações do sistema reprodutivo de vacas sob estresse térmico está diretamente relacionado à redução da qualidade oocitária gerando elevados índices de perdas gestacionais durante a primeira semana do desenvolvimento embrionário. Essa situação leva sérios prejuízos produtivos e econômicos para fazendas comerciais em todo o mundo. A transferência de embriões (TE) é uma alternativa para melhorar a fertilidade de vacas de leite de alta produção, por possibilitar que os efeitos prejudiciais do estresse térmico sobre o desenvolvimento embrionário inicial sejam contornados. Além disso, o uso de embriões produzidos in vitro com sêmen sexado e a vitrificação de embriões se apresentam como tecnologias emergentes que têm sido incorporadas nas rotinas de TE em fazendas comerciais. Um estudo realizado por parceria entre extensionistas da Universidade Americana do Texas (Texas AgriLife Research and Extension and Texas A&M University), a empresa comercial de
Novo método contraceptivo para gatas Patricia Rotta Lopes Desenvolver ações de controle populacional urbano de cães e gatos é de extrema importância para evitar a disseminação de doenças e garantir a saúde pública quando o assunto é zoonoses. Infelizmente, há muitos casos de abandono, o que dificulta a ação dos centros de controle de zoonoses. O manejo das populações caninas e felinas deve ser legal e ético e, na atualidade, grande parte é feito de forma cirúrgica, por meio de campanhas de castração. Os contraceptivos hormonais orais e injetáveis disponíveis no mercado veterinário possuem diversos efeitos colaterais e são usados de forma indiscriminada, acarretando muito mais problemas do que soluções. Neste contexto, pesquisadores da Universidade da Flórida, liderados pela Dra. Julie Levy avaliaram o uso de um contraceptivo promissor para o controle populacional de cães e gatos: o GonaCon TM (Levy et al. Long-term fertility control in female cats with GonaConTM, a GnRH immunocontraceptive. Theriogenology 76:1517-1525, 2011). Este contraceptivo é, na verdade, uma vacina
produção in vitro de embriões OvaTech©; e liderado pelos professores Todd R. Bilby e Peter J. Hansen (Steward et al. Efficacy of embryo transfer in lactating dairy cows during Summer using fresh or vitrified embryos produced in vitro with sex-sorted semen. Journal Dairy Science, v.94, n.7, 2011) comparou diferentes estratégias reprodutivas em vacas de leite durante o verão (IA com sêmen convencional, TE com embrião fresco ou TE com embrião vitrificado). Um considerável número de vacas (n=722) oriundas de duas fazendas comerciais na região centro-norte do estado do Texas foi utilizado de julho a outubro de 2009 (verãooutono do hemisfério norte). A TE com embriões frescos produzidos in vitro (45.5%) aumentou a fertilidade de vacas leiteiras durante o verão quando comparada à de vacas inseminadas com sêmen convencional (24,8%) e àquelas que receberam umembrião produzido in vitro e vitrificado (31,6%). Dessa forma, o uso de sêmen sexado para a produção in vitro de embriões associado à TE a fresco pode ser considerada uma estratégia eficiente para aumentar a taxa de prenhez durante a época do verão e também aumentar a taxa de nascimento de fêmeas. No entanto, estudos ainda são necessários para contornar a queda da fertilidade durante os meses do verão em fêmeas de leite e a menor taxa de gestação após TE com embriões produzidos in vitro e vitrificados. imunocontraceptiva contra GnRH (hormônio gonadotrófico) que foi desenvolvida por pesquisadores do National Wildlife Research Center (NWRC), instituição federal americana, e registrada para controlar a população de veados nos Estados Unidos com apenas uma injeção, cujo efeito persiste por vários anos. Este contraceptivo não está disponível comercialmente e pertence ao governo americano. O objetivo do estudo dos pesquisadores da Universidade da Flórida foi avaliar a eficácia e duração da atividade desta vacina na fertilidade de gatas adultas. Os pesquisadores obtiveram excelentes resultados: 93% de um total de 15 gatas vacinadas permaneceram inférteis por um ano; 73% por dois anos; 53% por 3 anos; e 40% por 4 anos. O único efeito colateral observado foi o desenvolvimento de um granuloma no local da injeção dois anos após a aplicação em 5 gatas. Os pesquisadores que desenvolveram a vacina afirmam que o próximo passo para uma nova geração de GonaConTM é o seu desenvolvimento na forma oral. Ainda não há estudos do GonaConTM em cadelas, afirmou a pesquisadora Julie Levy, porém recentes estudos em outras espécies, como esquilos, ratos, suínos domésticos e selvagens e cavalos-selvagens mostraram a eficácia deste agente como contraceptivo de dose única.
Ambiente Endócrino Peri-Ovulatório e Receptividade Uterina Fernando Silveira Mesquita e Mario Binelli 1
Pós-doutorando do Departamento de Reprodução Animal, FMVZ – USP, Pirassununga, SP Professor Associado do Departamento de Reprodução Animal, FMVZ – USP, Pirassununga, SP
Com o aumento da demanda mundial por alimentos que cresce rapidamente de forma proporcional ao aumento da população, aatividade pecuária brasileira tem recebido grande atenção mundial devido ao modelo de produção extensiva e potencial de incremento em produtividade sem comprometimento ambiental. Neste contexto, a manipulação farmacológica do ciclo estral no intuito de sincronizar e induzir a ovulação é uma ferramenta amplamente utilizada na cadeia produtiva de diversas espécies domésticas, especialmente a espécie bovina.Uma importante parcela das investigações científicas desenvolvidas no campo da manipulação do ciclo estral resultam do conhecimento prévio das ações dos hormônios do eixo hipotalâmico-hipofisário-ovariano-uterino. Tais investigações baseiam-se na observação dos resultados da administração programada desses hormônios ou seus análogos na atividade cíclica reprodutiva dos animais. A literatura científica é abundante em relação aos mecanismos endócrinos e celulares envolvidos na resposta aos tratamentos hormonais utilizados em protocolos de manipulação do ciclo estral bovino. Por exemplo, pode-se mencionar a indução da luteólise pela aplicação de prostaglandinas e o uso da progesterona (P4) no controle da ovulação.Contudo o foco em eventos endócrinos reprodutivos isolados em detrimento da avaliação dos efeitos sinergéticos e/ou antagonistas oriundos da sequência em que estes eventos acontecem impossibilitam uma abordagem holística em relação ao estudo da receptividade uterina. Os objetivos deste artigo são (1) abordar de forma pontual a importância das flutuações dos hormônios esteroides ovarianos em relação à modulação do ambiente uterino e potencial influência na receptividade ao embrião bovino, e (2) introduzir o conceito de um ambiente endócrino peri-ovulatório que resulta da sinergia entre os eventos endócrinos do eixo reprodutivo e atua na regulação da receptividade uterina. Cabe ressaltar que o artigo não tem a ambição de abordar de forma detalhada cada tópico individualmente. De modo geral, as oscilações hormonais que ocorrem durante o ciclo estral em ruminantes determinam fases distintas de dominância entre os hormônios esteroides sexuais, estradiol (E2) e P4. Sabe-se, por exemplo, que esses hormônios exercem mecanismos de feedback positivo e negativo junto ao hipotálamo e hipófise de acordo com as suas concentrações e fase do ciclo estral. Mais especificamente, além dos efeitos alcançados através da inibição ou estimulação hipotalâmica e/ ou hipofisária que culminam em desenvolvimento folicular e ovulação, hormônios esteroides também estão envolvidos na
regulação de eventos ligados ao transporte de gametas no trato reprodutor feminino, fecundação, receptividade uterina e desenvolvimento embrionário, e manuteção da gestação.Sabese ainda que a expressão gênica das células epiteliais do endométrio bovino varia de acordo com a fase do ciclo estral, uma vez que o padrão de expressão é controlado pelas proporções entre estradiol e P4 circulantes bem como pela proporção entre os receptores desses esteroides nos tecidoalvo. Como consequência, também varia a síntese e secreção de proteínas pelas células epiteliais e estromais do endométrio bovino [1]. Iniciando-se pela sequência lógica de eventos fisiológicos do ciclo estral, o período que compreende a fase de crescimento folicular pode ser dividido em um período sob dominância da P4 e outro, imediatamente antes da ovulação, sob dominância do E2. Em estudo recente o ciclo estral de vacas leiteiras foi manipulado para proporcionar ambientes endócrinos distintos durante o crescimento folicular [2]. Neste estudo observou-se a relação entre as concentrações de P4 circulantes durante o crescimento folicular e a fertilidade do ciclo subsequente. Especificamente, nos casos em que os animais iniciaram o protocolo Ovsynch sob baixas concentrações de P4 ou foram induzidos a ovular um folículo de primeira onda as taxas de prenhez foram significativamente mais baixas do que em animais nos quais o crescimento folicular ocorreu sob concentrações mais altas de P4. Conforme discutido por Bisinotto e Santos (2012), existem evidências quanto ao comprometimento da fertilidade induzido por concentrações sub-ótimas de P4 durante o crescimento folicular que apontam tanto para efeitos diretos na qualidade do folículo/oócito, quanto para efetios indiretos via modulação da resposta do tecido endometrial [3]. Ainda sobre as distorções das flutuações cíclicas endócrinas associadas às concentracões de P4, sabe-se que a luteólise completa é um evento fundamental dentro da gama de processos que se seguem durante o ciclo reprodutivo do animal, especialmente associada ao feedback negativo junto ao eixo hipotálamo-hipófise que deve ser suprimido para permitir o crescimento folicular final e a ovulação. Mesmo que os processos de crescimento final do folículo pré-ovulatório e ovulação ocorram sob concentrações de P4 que variam dentro dos limites fisiológicos, observa-se que concentrações plasmáticas deste esteroide ovariano acima de 0,4 ng/mL no momento da inseminação artificial são prejudiciais as taxas de prenhez [4]. Especula-se que a luteólise incompleta, nos casos
de IA em tempo fixo, ou falhas na detecção de estro, sejam os responsáveis por gerar uma condição em que animais sejam inseminados sob concentrações de P4 acima do ideal. Estas condições indesejáveis em programas de IA apresentam implicações óbvias no tocante a fertilidade, entretanto, existem evidências que apontam para efeitos negativos diretamente no útero envolvendo o transporte de gametas e alterações na espessura endometrial, bem como efeitos diretos no desenvolvimento embrionário, conforme discutido por [5]. Além das evidências existentes da influência direta da P4 na regulação do endométrio e no desenvolvimento embrionário precoce, sabe-se que a P4 regula o crescimento e diâmetro do folículo pré-ovulatório durante o diestro. De forma similar, a produção de P4 no metaestro e início de diestro é dependente do crescimento folicular durante o proestro anterior. De fato, um folículo ovulatório maior tem maior capacidade de produção de E2, e o tamanho deste folículo é positivamente correlacionado com o tamanho do CL e com a capacidade deste CL de produzir P4 [6]. Mormente, em vacas de corte, o tamanho do folículo pré-ovulatório, bem como as concentrações de E2 no dia da IA são positivamente correlacionados com fertilidade [6].Tal efeito positivo de maiores folículos pré-ovulatórios e maiores concentrações de E2 nas taxas de prenhez, de maneira simplificada, podem ser justificados por maiores taxas de manifestação de estro em protocolos de IATF [7]. Mesmo que as maiores taxas de prenhez nestes tipos de programas de IA possam ser ao menos parcialmente explicadas por maiores taxas de ovulação em animais manifestando estro, existem evidências que indicam a importância das concentrações crescentes de E2 durante o proestro e estro em relação á preparação do ambiente uterino. Assume-se, portanto, que esta sequência e amplitude de exposição ao E2 e P4 seja um conjunto de eventos fisiológicos, igualmente importante na regulação do ambiente uterino, que não podem ser revisados isoladamente, e devem ser considerados como um todo. O experimento clássico publicado em 1976 por Miller e Moore demonstra a importância das oscilações cíclicas dos esteroides ovarianos, individual e sinergeticamente, no tocante à preparação da receptividade uterina [8].Utilizando ovelhas ovariectomizadas os autores mimetizaram a fase peri-ovulatória do ciclo estral através da administração parenteral diária de P4 e E2. O ojetivo foi simular as fases de crescimento folicular (P4-preparação), inicialmente dominada por P4, seguindo-se a fase proestro e estro, caracterizada pelo aumento gradual e pico de E2 (E2-estro), e culminando na fase de diestro, durante a qual a P4 aumenta gradualmente a partir do desenvolvimento do CL em um ciclo fisiológico (P4-manutenção). Embriões do dia 4 foram transferidos para receptoras nos dias 2,5, 4 e 5,5 pós-estro e novamente colhidos para avaliação no dia 25 pósestro. A primeira observação importante foi que durante a suplementação de P4-manutenção uma curva de aumento gradual mais (P4 alta) ou menos (P4 baixa) acentuada altera a sincronia entre o ambiente uterino e o embrião transferido, consequentemente influenciando o desenvolvimento embrionário. Especificamente, os animais expostosà uma curva acentuada de suplementação de P4 tiveram maior taxa de sucesso na recuperação de embriões normais quando a transferência foi realizada no dia 2,5. Por outro lado, nos animais expostos à uma curva menos acentuada de
suplementação a sincronia não foi alterada e um maior número de embriões normais foi recuperado de vacas que receberam a transferência no dia 4 pós-estro. Em relação à capacidade sintética uterina, apesar da inexistência de efeito do regime de suplementação de P4-manutenção, observou-se a diminuição da síntese proteica em função do tempo relativo ao estro, sugerindo uma influência relevante do estradiol na capacidade de síntese proteica uterina. Em um grupo de animais em que a suplementação com E2-estro foi omitida do protocolo hormonal, observou-se redução no peso uterino e na síntese proteica uterina e ovidutal, ao passo que a omissão da P4manutenção reduziu apenas a síntese proteica uterina. Enquanto a simulação artifical do ciclo estral a partir da suplementação com E2 e P4 foi suficiente para permitir o desenvolvimento embrionário (66 de embriões normais colhidos de 160 transferidos), a omissão de qualquer uma das suplementações descritas acima prejudicou significativamente ou aboliu a o desenvolvimento normal dos embriões transferidos, sugerindo a necessidade de ambos os hormônios em fases distintas para garantir um ambiente uterino minimamente receptivo ao desenvolvimento embrionário ótimo. Particularmente, chama a atenção o efeito significativo da suplementação com E2 ou omissão desta no fenótipo uterino e capacidade de permitir o desenvolvimento embrionário, respectivamente. Estes achados corroboram os resultados que demonstram a correlação positiva entre diâmetro do folículo pré-ovulatório, concentrações de E2 e manifestação de estro apresentados no parágrafo anterior. Como já comentado no início do artigo, o foco na P4 circulante no início do diestro e seus efeitos no oviduto e útero durante a gestação inicial é plenamente justificável. A primeira semana pós-ovulação envolve o trânsito do oócito e dos espermatozoides no oviduto, bem como a interação dos mesmos com as células epiteliais do oviduto, capacitação espermática, fecundação e a transição do embrião que deixa o oviduto e adentra o ambiente uterino. Do ponto de vista endócrino reprodutivo, a queda abrupta das concentrações de E2 em resposta ao pico de LH, o desenvolvimento do corpo lúteo e o aumento gradual das concentrações de P4 que coincide com o trânsito do embrião no trato reprodutor feminino tornam a P4 o principal canditado a regulador da fertilidade da fêmea. Ademais, alterações no endométrio induzidas pela P4 que possibilitam a implantação do embrião e a necessidade de um mecanismo desencadeado pelo embrião viável para evitar a luteólise, indicam a importância da P4 no estabelecimento e manutenção da gestação. De fato, em bovinos de leite a produção leiteira tem sido correlacionada positivamente à perdas embrionárias e negativamente ao desenvolvimento embrionário e à probabilidade de concepção [9, 10]. A correlação negativa entre produção leiteirae fertilidade parece estar relacionada às concentrações plasmáticas de P4 desses animais, as quais são inversamente proporcionais à produção leiteira devido às maiores taxas de metabolização deste hormônio[11]. Adicionalmente, em bovinos de corte, as concentrações plasmáticas de P4 medidas no dia 7 pós ovulação são positivamente correlacionadas à probabilidade de concepção [12]. Mais especificamente, a observação de variáveis diretamente relacionadas ao desenvolvimento e à viabilidade do embrião revelou que a suplementação de P4 nos dias 1 a 4 ou 5 a 9 pós-inseminação favoreceram o desenvolvimento
embrionário e estimularam a produção de interferon tau (IFN-t) [13]. Além disso, no estudo supracitado conduzido por Demétrio et al. (2007) determinou-se que houve correlação positiva entre concentração de P4 no dia 7 e probabilidade de concepção em vacas inseminadas após um ciclo estral sincronizado [10]. Adicionalmente, observou-se que a probabilidade de concepção de animais que receberam transferência de embriões no dia 7 pós-estro não foi afetada pela concentração plasmática de P4 medida no mesmo dia [10]. Dessa forma, sugere-se que há um papel importante desenvolvido pela P4 do diestro inicial no desenvolvimento embrionário precoce, mais precisamente dentro da primeira semana de gestação. O ambiente endócrino peri-ovulatório, regulado principalmente pelas estruturas e hormônios esteroides ovarianos, e a sua influência direta ou indireta sobre os mecanismos celulares e moleculares que modulam o ambiente ovidutal e uterino e, consequentemente, determinam o sucesso gestacional têm sido explorados também em outras espécies. Apesar da distância filogenética para a espécie bovina, no campo dos modelos animais de receptividade e implantação uterina, a vasta maioria dos estudos que exploram os mecanismos regulatórios moleculares tem sido desenvolvida em camundongos e merece atenção. Nesta espécie, as respostas celulares às flutuações cíclicas dos esteroides ovarianos encontram-se amplamente caracterizadas e segundo Lee e DeMayo (2004) consistem em: (1) aumento da proliferação de células epiteliais induzida pelo pico de E2 pré-ovulatório; (2) aumento da proliferação celular do estroma endometrial a partir da P4 produzida pelo CL recém-formado (preparação); (3) maior proliferação do estroma culminando em diferenciação celular induzida pelo E2 pré-implantação quando precedido pelo aumento de P4 de preparação [14]. A partir de experimentos com camundongos transgênicos sabe-se, por exemplo, que o receptor de E2 tipo alpha (ERα) e receptor de P4 tipo A (PGRA) são os mediadores das ações desses hormônios esteroides no tecido uterino, uma vez que camundongos knockout para estes dois genes são inférteis e apresentam hipoplasia, e hiperplasia e inflamação uterina, respectivamente. Adicionalmente, uma série de moléculas reguladas por E2 ou P4 foram identificadas a partir de experimentos utilizando combinações de tratamentos com E2 e P4 e/ou antagonistas dos seus respectivos receptores. A P4 que suprime a proliferação celular do epitélio endometrial induzida por E2, induz as células do estroma endometrial a sairem do ciclo celular e iniciar um processo de diferenciação chamado decidualização que é fundamental no estabelecimento da gestação em camundongos. Baseado neste modelo de interação entre os esteroides ovarianos, em artigo publicado na revista Science, Li et al (2011) identificaram o gene Hand2 como um fator de transcrição regulador da interação entre o estroma e o epitélio endometrial, o qual é induzido no estroma endometrial pela P4 e modula de forma parácrina os efeitos mitogênicos do E2 no epitélio endometrial [15]. Para concluir, o estudo das respostas fisiológicas às manipulações do ciclo estral em bovinos têm elucidado relações importantes entre os eventos celulares e endócrinos ligados ao eixo hipotalâmico-hipofisário-ovariano-uterino e a fertilidade. A investigação dos mecanismos moleculares associados à regulação da capacidade receptiva uterina ao embrião durante a
gestação inicial engatinha, e tem foco principalmente voltado à endocrinologia do diestro inicial. É imperativo atentarmo-nos para a relevância dos eventos endócrinos ligados ao eixo reprodutivo que precedem o início do desenvolvimento embrionário, bem como a atuação conjunta entre estes eventos, aspectos que têm sido identificados como igualmente importantes na modulação da resposta uterina e do potencial de fertilidade. A incorporação da ideia de um milieu endócrino peri-ovulatório ótimo, associado a um ambiente uterino otimamente receptivo pode ser importante na busca das assinaturas da receptividade, seja do ponto de vista da pesquisa básica ou da pesquisa aplicada. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS 1. Bauersachs S, Ulbrich SE, Gross K, Schmidt SE, Meyer HH, Einspanier R, Wenigerkind H, Vermehren M, Blum H, Sinowatz F, Wolf E. Gene expression profiling of bovine endometrium during the oestrous cycle: detection of molecular pathways involved in functional changes. J Mol Endocrinol 2005; 34: 889-908. 2. Bisinotto RS, Chebel RC, Santos JE. Follicular wave of the ovulatory follicle and not cyclic status influences fertility of dairy cows. J Dairy Sci 2010; 93: 3578-3587. 3. Bisinotto RS, Santos JEP. The use of endocrine treatments to improve pregnancy rates in cattle. Reproduction Fertility and Development 2012; 24: 258-266. 4. Brusveen DJ, Souza AH, Wiltbank MC. Effects of additional prostaglandin F2alpha and estradiol-17beta during Ovsynch in lactating dairy cows. J Dairy Sci 2009; 92: 1412-1422. 5. Wiltbank MC, Souza AH, Carvalho PD, Bender RW, Nascimento AB. Improving fertility to timed artificial insemination by manipulation of circulating progesterone concentrations in lactating dairy cattle. Reproduction Fertility and Development 2012; 24: 238-243. 6. Vasconcelos JL, Sartori R, Oliveira HN, Guenther JG, Wiltbank MC. Reduction in size of the ovulatory follicle reduces subsequent luteal size and pregnancy rate. Theriogenology 2001; 56: 307-314. 7. Sa Filho MF, Ayres H, Ferreira RM, Nichi M, Fosado M, Campos Filho EP, Baruselli PS. Strategies to improve pregnancy per insemination using sex-sorted semen in dairy heifers detected in estrus. Theriogenology 2010; 74: 1636-1642. 8. Miller BG, Moore NW. Effects of progesterone and oestradiol on RNA and protein metabolism in the genital tract and on survival of embryos in the ovariectomized ewe. Aust J Biol Sci 1976; 29: 565-573. 9. Diskin MG, Morris DG. Embryonic and early foetal losses in cattle and other ruminants. Reprod Domest Anim 2008; 43 Suppl 2: 260-267. 10. Demetrio DG, Santos RM, Demetrio CG, Vasconcelos JL. Factors affecting conception rates following artificial insemination or embryo transfer in lactating Holstein cows. J Dairy Sci 2007; 90: 5073-5082. 11. Sangsritavong S, Combs DK, Sartori R, Armentano LE, Wiltbank MC. High feed intake increases liver blood flow and metabolism of progesterone and estradiol-17 beta in dairy cattle. J Dairy Sci 2002; 85: 2831-2842. 12. Peres RF, Claro I, Jr., Sa Filho OG, Nogueira GP, Vasconcelos JL. Strategies to improve fertility in Bos indicus postpubertal heifers and nonlactating cows submitted to fixed-time artificial insemination. Theriogenology 2009; 72: 681-689. 13. Mann GE, Fray MD, Lamming GE. Effects of time of progesterone supplementation on embryo development and interferon-tau production in the cow. Vet J 2006; 171: 500-503. 14. Lee KY, DeMayo FJ. Animal models of implantation. Reproduction 2004; 128: 679-695. 15. Li Q, Kannan A, DeMayo FJ, Lydon JP, Cooke PS, Yamagishi H, Srivastava D, Bagchi MK, Bagchi IC. The antiproliferative action of progesterone in uterine epithelium is mediated by Hand2. Science 2011; 331: 912-916.
Dra. Christina Espectrometria de Massas para o R. Ferreira Avanço da Pesquisa e das Aplicações em Biotecnologia de Embriões e Reprodução Animal A Dra. Christina Ramirez Ferreira possui graduação em Medicina Veterinária pela UNESP-Botucatu e pós-graduação na área de Reprodução Animal pela UNESP-Jaboticabal. A partir de 2008 iniciou projetos de aplicação de espectrometria de massas na área de Reprodução e Biotecnologia de Embriões nolaboratório ThoMSon de espectrometria de Massas do Instituto de Química UNICAMP, coordenado pelo Prof. Marcos Nogueira Eberlin. Atualmente realiza pós-doutorado na Universidade de Purdue, EUA. O que é Espectrometria de Massas e como ela funciona? A espectrometria de massas (EM) é a técnica instrumental cientifica centenária, de amplo espectro, com aplicações em várias áreas da Ciência, e definida por alguns como o laboratório de estudo da "química dos íons". A EM tem diveras aplicações, por exemplo, nas plataformas mais modernas e poderosas de proteômica, metabolômica e quantificação de biomoléculas e drogas. Existe uma quantidade assustadora de instrumentos e potencialidades, mas o fluxo de análise se inicia quase sempre com a colocação de uma carga positiva ou negativa nas moléculas presentes na amostra, processo chamado de ionização. Por meio dessa carga, as moléculas podem ser manipuladas por campos magnéticos ou elétricos, e atraídas para dentro do espectrômetro de massas, onde passam por um ou mais "analisadores" de massas. Os analisadores de massas são dispositivos que medem as massas das moléculas isoladas, podendo também selecionar uma molécula ionizada de interesse e também fragmentá-la. O passo final da análise é direcionar as moléculas e/ou seus fragmentos para um detector. Por meio da massa e/ou dos fragmentos das moléculas, e seus padrões de isótopos, e se possível a comparação com padrões para determinar sua fórmula e estrutura com alta velocidade, seletividade e sensibilidade, sem necessidade,por exemplo,de anticorpos ou outro tipo de marcação. Além disso, por EM várias moléculaspodem ser detectadas ao mesmo tempo. Atualmenteem quais áreas a EM tem sido aplicada? A EM é o cavalo de força analítico das indústrias farmacêuticas e dos laboratórios de bioequivalência e antidoping, por exemplo. Na área acadêmica e biológica, a EM se tornou muito interessante e abrangente principalmente na última década, quando instrumentos equipados com as técnicas de ionização para as biomoléculas como proteínas e lipídeos, como as técnicas de ionização por electrospray (ESI) e ionização e dessorção a laser assistida por matriz (MALDI) foram disponibilizados.
E como a EM pode contribuir para o avanço das tecnologias de embriões? O potencial da EM para entender a biologia embrionária é incrível. É possível identificarmos e até quantificarmos proteínas, lipídeos e metabólitos presentes nos embriões, até mesmo em um único. Podemos saber também quais moléculas estão presentes no ambiente extraembrionário, quais moléculas são internalizadas e secretadas pelos embriões. Essas informações podem revolucionar nosso conhecimento básico sobre as necessidades para o cultivo in vitro e a entendermos aspectos ligados ao genótipo ou raça na produção de embriões. Por exemplo, podemos abordar quais as diferenças nas vias metabólicas de embriões taurinos e zebuínos estão implicadas no sucesso do congelamento dos embriões e quais moléculas podem ser usadas para alterar essas vias e aumentar o sucesso da técnica. Em termos aplicados, assim como temos marcadores genômicos para características de interesse em produção animal, há também marcadores proteicos, lipídicos e metabólicos a serem explorados. A área de quantificação de hormônios esteroides por EM em animais é uma aplicação muito animadora da EM na área de Reprodução Animal. Por serem moléculas pequenas e presentes em quantidades mínimas nos fluídos biológicos, geralmente os pesquisadores dependem de importação de material radioativo para que a quantificação de hormônios esteroides tenha sensibilidade suficiente. A presença de reação cruzada ocorre e isso muitas vezes impede que comparações interlaboratoriais sejam feitas. Com frequencia não existem kits de quantificação para a espécie de interesse e não é possível quantificar diversos hormônios no mesmo ensaio. Os ensaios de quantificação por EM são o "gold standard" em termos analíticos. Se bem conduzidos e validados, a quantificação por EM é de alta confiabilidade e repetibilidade interlaboratorial. A especificidade química impede qualquer tipo de reação cruzada e ensaios multi-hormônios já estão sendo desenvolvidos na UNICAMP. E como você vê a introdução dessas ferramentas analíticas no panorama brasileiro? O Brasil está muito bem posicionado para introduzir conhecimentos gerados por EM na área de biotecnologia de embriões e reprodução animal. Nosso País é reconhecido cientificamente pela competência em EM. O Brasil sedia o terceiro maior congresso em EM no mundo, está na presidência da Sociedade Internacional de EM e há editores Brasileiros em
revistas de ponta como Journal of Mass Spectrometry e Royal Society of Chemistry Advances e Analytical Chemistry. Na UNICAMP, o laboratório ThoMSon de EM, coordenado pelo Prof. Marcos Eberlin, é uma referência em EM na América Latina e tem apoiado incondicionalmente diversos projetos na área de produção e reprodução animal. Na sua opinião quais são as condições necessárias para alavancar o uso da EM na reprodução animal? Uma grande limitação para o desenvolvimento dos projetos é a interação multidisciplinar. Os embriologistas precisam compreender minimamente o processo de aquisição e análise em EM para interpretarem os dados, desenvolverem as aplicações e gerarem conhecimentos relevantes. A linguagem da EM é química. A unidade do espectrômetro de massas é em razão massa/carga (m/z), e o resultado é o espectro de massas ou uma lista de valores e intensidades de m/z. O reconhecimento de isômeros e de padrões de isótopos é fundamental. Para cada aplicação há instrumentos mais ou menos apropriados e a análise de dados envolve geralmente quimiometria. Como o uso da EM para aplicações biológicas é relativamente recente e é dificil acompanhar o ritmo dos avanços em instrumentação e em bioinformática, há poucos especialistas que dominem a aquisição de dados e os procedimentos para exploraros dados da melhor maneira , visto que é uma tecnologia nova e que exige um conhecimento técnico aprofundado. O começo de uma parceria entre espectrometristas de massas e veterinários é sempre uma "conversa de doidos", mas com um pouco de insistência logo saem os frutos. A responsabilidade e o esforço dos embriologistas ou veterinários é maior, afinal, a aplicação e o impacto é na na área deles. Nas parcerias do laboratório do Prof. Marcos Eberlin, o maior gargalo é no processamento e interpretação dos dados. Em resumo, temos muitos dados adquiridos pelo acesso à instrumentação de ponta do ThoMSon e nosso poder de interpretação e processamento não acompanha, embora a interação multidisciplinar esteja se expandindo de modo excelente. A EM produz uma quantidade enorme de informações e diversos colegas químicos e veterinários estão se unindo e demonstrando enorme competência para interpretar os dados e propor novas aplicaçoes. Há outros laboratórios de EM interagindo com a área de biotecnologia de embriões e reprodução, como o Laboratório Aston, coordernado pelo Prof. Fabio Gozzo em colaboração com a Urologia/Reprodução Humana da UNIFESP. Será que você poderia exemplificar para nossos leitores algumas aplicações da EM no campo da reprodução animal? Algumas técnicas ou aplicações de EM de grande interesse em biotecnologia de embriões e reprodução animal: 1) MS Fingerprinting: o perfil de lipídeos ou metabólitos de amostras de interesse é adquirido e por comparação entre grupos experimentais as moléculas de maior relevância para a condição biológica são estudadas. Essa técnica tem sido usada para a análise de lipídeos de embriões e também para a comparação do perfil químico dos meio de cultivo para controle de qualidade ou para predição do potencial de desenvolvimento a gestação.
2) Shotgun proteomics: Um grande número de proteínas é identificado nas amostras e da mesma forma que para MS fingerprinting, as proteínas diferenciais são estudadas e podem ser analisadas ou quantificadas de maneira individual posteriormente. Foi recentemente utilizada para identificação de proteínas secretadas por embriões (secretoma) e estudo de possíveis marcadores para endometriose em líquido folicular humano. 3) Cromatrografia líquida e espectrometria de massas em tandem (LC-MS/MS):"Gold standard" analítico para quantificação específica de metabólitos, drogas e hormônios. Foi recentemente utilizada para quantificação de progesterona em bovinos, os resultados de LC-MS/MS foram comparados com ELISA. 4) MS Imaging: Pode-se escaner um corte histológicos nos eixos x e y e contruir imagens químicas. Numa imagem química, cada pixel possui um espectro de massas podendo conter centenas de moléculas (íons) detectadas. Dessa maneira, é possível saber onde se localiza cada íon no corte histólogico, é como se fosse uma "anatomia química". 5) Identificação de microorganismos: Por meio do MS fingerprinting de proteínas de microorganismos e banco de dados dedicados, é possível identificar bactérias sem necessidade de testes bioquímicos. A técnica foi recentemente aplicada para identificação de bactérias em leite bovino e está sendo desenvolvida para o controle sanitário de embriões produzidos in vitro. Lista de publicações recentes geradas por colaboração multidisciplinar entre o laboratório ThoMSon de EM e Veterinários e Embriologistas: (ACESSAR SITE) 1- Fernandes R.M.T.; Gomes G.C.; Porcari A.M.; et al. (2011). LC-MS/MS quantitation of plasma progesterone in cattle.Theriogenology 76(7): 1266-1274. 2- Amorim L.S.; Ferreira C.R.; Cabral E.C.; et al. (2011). Differences in the lipid fingerprinting of boar and bull sperm detected by MALDI-TOF MS.Reproduction in Domestic Animals 46 (Suppl. 2): 90-90. 3- Cortezzi S.S.; Cabral E.C.; Trevisan M.G.; et al.(2011). Culture media chemical profiling by ESI-Q-TOF mas spectrometry to predict embryo implantation potential.Fertility and Sterility 96 (3 – Suppl. 1): S244-S245 4- Cortezzi S.S.; Garcia J.S.; Ferreira C.R.; et al (2011).Secretome of the preimplantation human embryo by bottom-up label-free proteomics.Analytical and Bianalytical Chemistry401(4): 1331-1339. 5- Cortezzi S. S.; Cabral E.C.; Ferreira C.R.; et al. (2011). Prediction of embryo implantation potential by non-invasive metabolomic profiling and ESI-Q-ToF mass spectrometry.Human Reproduction26 (Suppl. 1): I165-I166. 6- Barreiro J.R.; Ferreira C.R.; Sanvido G.B.; et al. (2010). Identification of subclinical cow mastitis pathogens in milk by matrix-assisted laser desorption/ ionization time-of-flight mass spectrometry. Journal of Dairy Science93(12): 5661-5667. 7- da Silva B.F.; Ferreira C.R.; Eberlin M.N.; et al. (2010). Quantitative shotgun proteomic analysis of seminal plasma from men with spinal cord injury-induced anejaculation.Fertility and Sterility 94(4 - Suppl. 1): S62-S62. 8- Lo Turco E.G.; Martins Ferreira Souza G.H.; Garcia J.S.; et al. (2010). Effect of endometriosis on the protein expression pattern of follicular fluid from patients submitted to controlled ovarian hyperstimulation for in vitro fertilization. Human Reproduction 25(7): 1755-1766. 9- Cortezzi S. S.; Figueira R. C. S.; Eberlin M. N.; et al. (2010). Identification of possible biomarkers of embryo viability in the human embryonic secretome: preliminary results. Human Reproduction 25(Suppl. 1): I5-I5. 10- Ferreira C.R.; Saraiva S.A.; Catharino R.R.; et al. (2010). Single embryo and oocyte lipid fingerprinting by mass spectrometry.Journal of Lipid Research51(5): 1218-1227. 11- Ferreira C.R.; Martins Ferreira Souza G.H.; Riccio M.F.; et al.(2009). Mass spectrometry fingerprinting of media used for in vitro production of bovine embryos.Rapid Communications in Mass Spectrometry23(9): 1313-1320.
Três genomas são melhores do que dois? A geração de animais pela transferência do genoma de uma célula adulta para oócitos não fertilizados e o isolamento de células tronco pluripotentes a partir do blastocisto humano aumentou a probabilidade de geração de células-tronco contendo o genoma do paciente. Este campo de pesquisa é bastante promissor uma vez que células-tronco específicas podem gerar células diferenciadas para terapias celulares. Entretanto, limitações de ordem jurídica e social aliadas a carência de oócitos humanos disponíveis para pesquisa comprometem o atual desenvolvimento dessas biotecnologias. Estes entraves levaram pesquisadores a investigar meios alternativos para obtenção de células-tronco, entre eles a descoberta da reprogramação celular, processo no qual células somáticas readquirem sua pluripotência por meio da super-expressão de quatro fatores de transcrição. A indução da pluripotência tornou-se uma técnica alternativa à Transferência Nuclear de Células Somáticas (TNCS) criando células-tronco específicas paraterapias sem os riscos de rejeição imunológica. Porém, estudos demonstram diferenças entre as células de pluripotência induzida (iPS) e as células troncoembrionárias (ESC) no que se refere ao seu comportamento de diferenciação e a sua integridade gênica. Neste sentido, apesar da TNCS ser considerada por alguns autores mais eficiente na
reprogramação celular e na redução da memória epigenética, não existem até o momento relatos da geração de células-tronco embrionárias humanas via TNCS. Na tentativa de identificar os obstáculos na geração de blastocistos humanos normais a partir da TNCS, uma equipe de pesquisadores liderada pelo Dr. Scott Noggle do Laboratório da Fundação de Células-Tronco de Nova Iorque utilizou 270 oócitos maduros doados por mulheres de 22 a 33 anos (Noggle et al. Human oocytes reprogram somatic cells to a pluripotent. Nature 478: 70-76, 2011). Os resultados deste trabalho revelaram que a remoção do genoma oocitário antes da TNCS acarretou na interrupção do desenvolvimento embrionário no estágio de 6-10 células, ao passo que a manutenção do genoma oocitário originou blastocistos humanos com célulastronco embrionárias triploides. Uma análise detalhada indicou que o genoma transplantado foi completamente reprogramado, ou seja sem sinais de memória epigenética, e as linhagens de células-tronco derivadas destes blastocistos foram capazes de se diferenciar em múltiplos tipos celulares das três camadas germinativas. Estes achados demonstram a viabilidade de se reprogramar células humanas utilizando oócitos e identifica a remoção do genoma oocitário como a causa primária da falha no desenvolvimento após troca do genoma.
Redescobrindo o início da oogênese? Desde o curso de biologia do ensino fundamental, professores ensinam que mulheres já nascem com um número pré-determinado de oócitos. No entanto, o estudo publicado na Nature Medicine em fevereiro deste ano pela equipe do pesquisador Jonnathan Tilly do Massachusetts General Hospital em Boston (intitulado"Oocyte formation by mitotically active germ cells purified from ovaries of reproductive-age women") pretende mudar esse paradigma. O impacto desta descoberta é tão profundo que a mesma já foi debatida pelo Dr. Kendal Powell em seu artigo"Egg-making stem cells found in adult ovaries" publicado na Nature News (fevereiro de 2012).Inicialmente a equipe do Dr. Tilly desenvolveu uma técnica para a obtenção de populações puras de células-tronco ovarianas de camundongo, sendo apenas selecionadas as células-tronco marcadas para a presença da proteína DdX4. Após o estabelecimento da técnica de forma eficiente para murinos, esse processo de purificação celular foi testado em humanos. Os ovários congelados de mulheres jovens em idade reprodutiva foram obtidos com a colaboração de Yasushi Takay, ex-membro da equipe do Dr. Tilly e atualmente
Mariana Ianello Giassetti e Roberta Harue Tsunoda
biólogo especialista em reprodução do Saitama Medical University no Japão. As células-tronco oogôniais humanas (OSCs) isoladas foram cultivadas in vitro, gerando espontaneamente oócitos primários aparentemente normais. As OSCs foram marcadas para a expressão de proteína verde fluorescente (GFP) e transplantadas sob a pele de camundongos. Após duas semanas, as células eram verdes, morfologicamente semelhantes a oócitos e expressavam dois marcadores moleculares específicos. Segundo Dr. Tilly ainda é prematuro dizer que essas células são capazes de gerar embriões viáveis. Além disso, nesse estudo não se comprovou que essas células são capazes de se diferenciar em seu nicho fisiológico normal (ovário de mulheres jovens adultas), mas o uso dessas células mudaria em muitos aspectos o campo da reprodução humana assistida. Assim, a próxima etapa do estudo será verificar a capacidade das OSCs em serem fertilizadas, gerando embriões viáveis. As OSCs também teriam grande aplicabilidade em outras áreas como teste de novas drogas e hormônios com o intuito de reduzir o efeito do tempo no relógio biológico das OSCs.
PREMIAÇÕES SBTE 2011 PRÊMIO ASSIS ROBERTO DE BEM
(DESTAQUE DO ANO NA ÁREA BÁSICA)
(DESTAQUE DO ANO NA ÁREA APLICADA)
COMPETIÇÃO DE ESTUDANTES 1ª COLOCAÇÃO José de Oliveria Carvalho Neto SEXAGEM POR CITOMETRIA DE FLUXO NÃO AFETA O PADRÃO DE METILAÇÃO DOS GENES IGF2 E IGF2R DE ESPERMATOZÓIDE BOVINO
MELHOR TRABALHO NA ÁREA BÁSICA Moana Rodrigues França DIMENSÕES, ESTEROIDOGÊNESE E VASCULARIZAÇÃO DO CORPO LÚTEO BOVINO EM RESPOSTA À MANIPULAÇÃO DO CRESCIMENTO DO FOLÍCULO PRÉ-OVULATÓRIO MELHOR TRABALHO NA ÁREA APLICADA Priscila Reis Kahwage INFLUÊNCIA DO PERÍODO DO ANO NA QUALIDADE SEMINAL DE CATETOS (Pecaritajacu) CRIADOS EM CATIVEIRO NO ESTADO DO PARÁ
2ª COLOCAÇÃO Roberta Machado Ferreira ALTERAÇÕES NA QUALIDADE DOS OÓCITOS DE VACAS HOLANDESAS REPETIDORAS DE SERVIÇO PODEM EXPLICAR SUA REDUZIDA FERTILIDADE 3ª COLOCAÇÃO Alejandra Estela Velasquez EFEITO DAAUSÊNCIA DA ZONA PELÚCIDA SOBRE O DESENVOLVIMENTO INICIAL DE EMBRIÕES BOVINOS
MELHOR TRABALHO DE PROFISSIONAIS DE CAMPO (MELHOR RELATO TÉCNICO) Julio Cesar Barbosa da Silva TAXAS DE CONCEPÇÃO DE EMBRIÕES BOVINOS PRODUZIDOS IN VITRO COM SÊMEN CONVENCIONAL OU DESCONGELADO /SEXADO (REVERSO) DE TOUROS DA RAÇA NELORE
CONGRESSOS E REUNIÕES 05 – 09 Agosto 2012 17 – 19 Maio 2012 The Midwest Reproduction Symposium 2012 Chicago, IL, USA http://midwestreproductionsymposium.org/ 18-20 DE MAIO DE 2012 II SIMPÓSIO DE NEONATOLOGIA VETERINÁRIA Botucatu, SP, Brasil http://www.fmvz.unesp.br/Eventos/int_eventos.php 07 - 09 Junho 2012 VIII SIMCORTE Viçosa, MG, BR www.simcorte.com 24 – 26 Julho 2012 SYMPOSIUM ON FUNCTIONAL GENOMICS OF EARLY LIVESTOCK DEVELOPMENT Alberta, Canadá www.functionalgenomicslivestock.ca 26 – 29 julho 2012 International Symposium on Canine and Feline Reproduction ISCFR 2012 - EVSSAR 2012 Whistler, B.C. Canadá http://www.ivis.org/iscfr/2012/ 8TH International Symposium on Equine Embryo Transfer Vancouver, Canadá http://ieet2012.com/ 29 Julho - 02 Agosto 2012 17th International Congress on Animal Reproduction Vancouver, Canadá www.icar2012.com 28
XXIV WORLDS POULTRY CONGRESS Salvador, BA, Brasil http://www.wpc2012.com/br/ 29 agosto – 1 setembro 2012 European Society for Domestic Animal Reproduction ESDAR / Dublin, Irlanda http://www.esdar2012.org/ 5 – 7 Setembro 2012 6th International Symposium On Stallion Reproduction (Issr) / Viena - Austria http://www.pferdewissenschaften.at/ 6 – 8 setembro 2012 28th Scientific Meeting of the European Embryo Transfer Association - AETE Le Grand Large, St Malo, France http://www.aete.eu/meetings.php 26 - 28 Setembro 2012 PorkExpo 2012: VI Fórum Internacional de Suinocultura Curitiba, PR, BRasil www.porkexpo.com.br 11 – 20 outubro 2012 IV International Symposium on Animal Biology of Reproduction (ISABR) Campinas, SP, Brasil http://www.cbra.org.br/por tal/eventos/isabr2012/ isabr2012.htm 15 – 17 Novembro 2012 CONGRESSO INTERNACIONAL DA ASSOCIAÇÃO BRASILEIRA DE ENDOCRINOLOGIA VETERINÁRIA Búzios, RJ, Brasil http://www.ciabev.com.br/
Ficha Técnica: Practical Atlas of Ruminant and Camelid Reproductive Ultrasonography Autores: Luc DesCôteaux, Jill Colloton, Giovanni Gnemmi Editora: Wilwey-Blackwell Páginas: 244 páginas Preço: US$194,99 ISBN: 978-0-8138-1551-0
Autores: Luc DesCôteaux, Jill Colloton, Giovanni Gnemmi
Practical Atlas of Ruminantand Camelid Reproductive Ultrasonography é um livro prático, com referências de todas as informações. É um guia baseado em imagem para os conceitos essenciais da ultra-sonografia reprodutiva em ruminantes domésticos e camelídeos. Este livro fornece informações para capacitar os praticantes a incorporar o exame ultrassonográfico nas práticas diárias. Além disso, o livro inclui informações especializadas para técnicas avançadas, tais como a sexagem fetal, transferência de embriões, Doppler colorido, entre outros. Practical Atlas of Ruminantand Camelid Reproductive Ultrasonography é uma referência para profissionais que trabalha com ruminantes e camelídeos, professores e alunos.
— Princípios e indicações, conceitos essenciais, artefatos de imagem mais comuns — Técnicas de avaliação e erros comuns na prática com bovinos. — Anatomia do trato reprodutivo da vaca — Ovário bovino — Útero bovino — Gestação em bovinos — Desenvolvimento fetal após 55 dias, sexagem fetal, anomalias e bem-estar em bovinos. — Transferência de embriões em bovinos, fecundação in vitro, procedimentos especiais e clonagem — Anatomia dotouro e ultrassonografia do trato reprodutivo — Búfalos e gado zebuíno — Ovelhas e cabras — Camelídeos
Entretenimento Caça-Palavras Embrião bovino no sétimo dia de desenvolvimento Técnica de obtenção da Ovelha Dolly Produz e libera progesterona Técnica para armazenamento de material biológico Processo no qual se coloca o embrião na palheta Gameta masculino Sigla da fertilização in vitro Sede da 26ª Reunião da SBTE Deposição do embrião no útero da receptora Deposição do sêmen da fêmea (*) Estádio de desenvolvimento embrionário anterior ao blastocisto Gameta feminino Sigla da Sociedade Brasileira de Tecnologia de Embriões Técnica utilizada para ovulação múltipla Biotécnica que combina superovulação, colheita e inovulação de embriões Animal que possui um gene exógeno em sua cadeia de DNA Aparelho utilizado para avaliação ginecológica via transretal em bovinos. (*) Deposição artificial do sêmen no trato reprodutivo na fêmea Solução no próximo número...