ReP USP - Detalhe do registro: Detecção e caracterização moleculares do Vírus da Viremia Primaveril da Carpa em peixes de água doce das regiões nordeste e centro-leste do estado de São Paulo
Autor USP: ARRUDA, EURICO DE PAULA - FZEA
Subjects: PISCICULTURA; RHABDOVIRIDAE; TÉCNICAS DE DIAGNÓSTICO MOLECULAR
Keywords: Diagnóstico molecular; Molecular diagnostics; Rhabdovirus; Rhabdovírus
Abstract: Piscicultura de água doce consiste na maior produção da aquicultura mundial e o cultivo de peixes tem crescido, devido a investimento, desenvolvimento de tecnologias e à contínua expansão de espécies cultivadas. Esse aumento gerou novas possibilidades de transmissão de vírus aquáticos, fatores limitantes à produção da aquicultura. Dentre as centenas de vírus conhecidos de peixes, um dos principais, que atualmente é de preocupação internacional, é o vírus da Viremia Primaveril da Carpa (SVCV), devido a sua importância socioeconômica considerando os países afetados e o comércio internacional de animais aquáticos e seus derivados, com base na saúde e medidas preventivas. SVC é uma doença aguda causada por um rhabdovírus do gênero Vesiculovirus, que é um vírus de ácido ribonucleico (RNA) fita simples linear de aproximadamente 11 quilobases (kb) com polaridade negativa e envelopado. Diversos ensaios diagnósticos podem ser utilizados para detectar SVCV, porém, consomem tempo e não são adaptados para diagnóstico a campo. A prevenção da disseminação do vírus é crucial; portanto, maior entendimento do vírus e de sua transmissão é necessário. No presente estudo, a padronização de uma RT-nestedPCR foi realizada, cujo limite de detecção foi de 8,62 × 10-2 cópias/reação, observado após o spiking de tecidos de peixes com diluições seriadas de um controle positivo sintético. O ensaio foi aplicado a 150 amostras teciduais provenientes de 146 peixes distintos. As amostras consistiam defragmentos de fígado, rim e baço e foram submetidas à transcrição reversa (RT), seguida pela reação em cadeia de polimerase (PCR), em configuração nested. Duas (2) amostras foram positivas para o gene G de SVCV pela RT-nestedPCR e a identidade dos produtos obtidos foi confirmada por sequenciamento direto utilizando-se o método de Sanger. Na reconstrução filogenética, as sequências obtidas formaram clado único, separado dos demais genogrupos e mesmo de sequências derivadas de outros vesiculovírus encontrados no Brasil. Esses resultados determinam a primeira detecção e caracterização moleculares de SVCV no Brasil por RT-nestedPCR e sequenciamento nucleotídico, indicando a necessidade de adoção de medidas de biosseguridade mais restritivas na produção pesqueira nacional