Bolsa 09/50307-0 - Sistema nervoso, Sistema imune - BV FAPESP
Processo: 09/50307-0
Beneficiário: Camila Marques de Freria
Assunto(s): Sistema nervoso Sistema imune Sinapses
As células da glia são responsáveis por intermediar a interação entre o Sistema Nervoso (SN) e o Sistema Imune (SI). Além disso, recentes estudos têm demonstrado que estas células expressam receptores Toll Like (TLRs) que podem interferir no processo de plasticidade do SNC. Desse modo, este estudo tem o objetivo de analisar a influência do receptor Toll like 4 na reatividade glial e na dinâmica das sinapses em aposição ao motoneurônio medular de camundongos após lesão nervosa periférica. Para a análise in vivo, serão utilizados 70 animais. Estes serão divididos em 35 animais C3H/HeJ (controle) e 35 C3H/HeJ-tlr4-/-. Ambas linhagens serão submetidas à transecção ou esmagamento do nervo isquiático. Cinqüenta animais (25C3H/HeJ e 25 C3H/HeJ-tlr4-/-) serão anestesiados e submetidos à cirurgia de transecção, sendo removido um segmento de 2mm do coto distal do nervo. Uma semana após a transecção os animais serão anestesiados e sacrificados por perfusão transcardíaca. As medulas serão extraídas, sendo 10 animais processados para imunohistoquímica, 10 animais para microscopia eletrônica de transmissão, 10 animais para western-blot, 10 animais para real-time PCR e outros 10 para hibridação in situ. Vinte animais (10 C3H/HeJ e 10 C3H/HeJ-tlr4-/-) terão o nervo isquiático esmagado, sendo sacrificados 3 semanas após e observado o potencial regenerativo através de análise de imunohistoquímica e microscopia eletrônica de transmissão. Sendo 10 animais para imunohistoquímica (5 C3H/HeJ e 5 C3H/HeJ-tlr4/-/-) e 10 animais para microscopia eletrônica de transmissão (5 C3H/HeJ e 5 C3H/HeJ-tlr4-/-). Em imunohistoquímica serão empregados os anticorpos sinaptofisina, GFAP, IBA1 e MHC classe I. Em microscopia eletrônica de transmissão será analisada a aposição dos terminais pré-sinápticos dos motoneurônios alfa medulares e os nervos axotomizados. Em western-blot a análise será concentrada nas proteínas GFAP, sinaptofisina e MHC I. A hibridação in situ terá a finalidade de quantificar os níveis de mRNAs para GFAP e MHC I. Em RT- PCR, serão analisados os marcadores de ativação de microglia e de GFAP. Para a análise in vitro serão realizadas culturas de astrócitos. Para isto, serão extraídos os encéfalos de neonatos com 2 dias de nascimento dos animais C3H/HeJ e C3H/HeJ-tlr4-/-. Para o ensaio de proliferação celular será utilizado BrdU e para a quantificação em imunocitoquímica, os anticorpos anti-sinaptofisina e GFAP. (AU)
FRERIA, C. M.; BERNARDES, D.; ALMEIDA, G. L.; SIMOES, G. F.; BARBOSA, G. O.; OLIVEIRA, A. L. R. Impairment of toll-like receptors 2 and 4 leads to compensatory mechanisms after sciatic nerve axotomy. JOURNAL OF NEUROINFLAMMATION, v. 13, MAY 24 2016. Citações Web of Science: 13.
FRERIA, CAMILA MARQUES; VELLOSO, LICIO AUGUSTO; OLIVEIRA, ALEXANDRE L. R. Opposing effects of Toll-like receptors 2 and 4 on synaptic stability in the spinal cord after peripheral nerve injury. JOURNAL OF NEUROINFLAMMATION, v. 9, OCT 23 2012. Citações Web of Science: 21.
FRERIA, Camila Marques de. Influência da glia na sobrevivência, capacidade regenerativa axonal e estabilidade sináptica de motoneurônios medulares após lesão central e periférica. 2013. Tese de Doutorado - Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Faculdade de Ciências Médicas.