As lesões por ação do frio causam desestabilização das membranas plasmáticas dos espermatozoides, podendo resultar em uma reação acrossomal precoce e, por consequência, em uma falha na fertilização (Evans e Maxwell, 1990). Espera-se que o meio diluente promova a preservação do maior número de células espermáticas durante todo o processo de refrigeração do sêmen (Watson, 1981) e que nenhum de seus compostos interaja negativamente com as camadas da membrana plasmática (Watson, 1995).
Nos cinco tratamentos (Tab. 3), observou-se elevada porcentagem de células espermáticas com acrossoma íntegro em todos os intervalos avaliados (90,7 a 98,7%), e não se verificou diferença significativa entre os intervalos, tampouco entre o tempo e o diluente (P>0,05). Estes resultados diferem dos relatados por Celeghini et al. (2008), que encontraram 17,2 e 30,8% de espermatozoides bovinos com acrossomas íntegros após congelação/descongelação, ao utilizarem dois diferentes meios, e dos valores observados por Esteves et al. (2000), que encontraram variação de células espermáticas com acrossoma íntegro no sêmen de homens de 89,3 a 88,2% antes do congelamento e de 66,5 a 72,1% após descongelamento.
A redução da temperatura durante o processo de refrigeração e congelação do sêmen afeta as bombas adenosina trifosfato dependentes, dentre elas, a de Na+/K+, provocando despolarizações parciais das membranas, tornando-as permeáveis ao cálcio. Isto induz a uma vesiculação prematura da membrana acrossomal (Bicudo et al., 2007). Todavia, Azevedo (2006), ao avaliar o sêmen ovino em todas a fases do processamento, concluiu que a congelação/descongelação causa mais danos do que a refrigeração e constatou haver diferenças entre indivíduos relacionadas à criorresistência e criocapacitação espermática. Segundo esse autor, a refrigeração induz à capacitação, mas não contribui para o aumento da reação acrossomal.
Quanto à integridade do DNA, em todos os tratamentos, foram verificados 100,0 % de células com a cromatina normal, corroborando com os resultados de Gonçalves (2006), ao descrever que a cromatina dos espermatozoides bovinos criopreservados mostrou-se integra quase na sua totalidade, não sendo observada a ação do tempo, do estresse promovido pelos procedimentos de fertilização in vitro (FIV) e nem do possível efeito das espécies reativas ao oxigênio (ROS). Segundo Watson (1995), o núcleo espermático é uma estrutura estável, pouco afetada durante o processo de criopreservação.