Acetato de trietilamônio (no HPLC) | Glúon/ blog
Acetato de trietilamônio (no HPLC)
MdD jan 12, 2009
O texto sobre cromatografia despertou a idéia sobre o HPLC. A HPLC, ou cromatografia líquida de alta performance (ou alta pressão) [hi-performance liquid chromatography], é um modo de separar misturas. Pode ser difícil de fazer, mas existem situações em que não se tem nenhuma outra opção. Você consegue purificar quase tudo com ela, de pequenas moléculas até biomoléculas.
A HPLC mais comum é a de fase reversa, com uma fase sólida oleosa e uma mistura de algo polar e menos polar (tipicamente água e um solvente orgânico polar, como o metanol ou a acetonitrila). Os solventes funcionam bem para várias moléculas pequenas – colunas normalmente vem com um cromatograma de amostra demonstrando que as colunas separam com sucesso estes cinco componentes com 65% de acetonitrila e 35% de água. Para separar coisas que não são muito polares, como o DNA, nós precisamos de uma ajuda adicional. Aqui entra o acetato de trietilamônio.
O acetato de trietilamônio é um bom buffer para a purificação de DNA porque os cátions trietilamônio permitem o ânion DNA interagir com a fase reversa ´oleosa´. É também um bom para HPLC por algumas outras razões – é solúvel em solventes orgânicos, para a qual, isso é crítico. É também volátil (um pouco, mas o suficiente para ter cheiro forte), isso significa que se você precisa concentrar sua amostra por secagem, você terá a chance de remover uma boa parte colocando a amostra sob vácuo. É quase a prova de erros, e removendo uma boa quantida de acetato ainda se faz alguma sujeira, mas muito menos do que se você usar algo não volátil, como buffers fosfato.