Bolsa 11/06469-5 - Bacteriologia, Escherichia coli enteropatogênica - BV FAPESP
Avaliação da ocorrência, expressão e envolvimento do operon pil na aderência de ce...
Formação de biofilme em Escherichia coli enteropatôgenica atípica
Caracterização de uma adesina, relacionada ao fenótipo de adesão agregativa em uma...
Processo: 11/06469-5
Beneficiário: Bruna Gil Garcia
Assunto(s): Bacteriologia Escherichia coli enteropatogênica Biofilmes Sorogrupo Microscopia confocal
Escherichia coli enteropatogênica (EPEC) foi um importante agente de diarreia em crianças no primeiro ano de vida, em nosso meio, por várias décadas. EPEC provoca a chamada lesão Attaching and Effacing (A/E) em células intestinais e é portadora do plasmídio EAF (pEAF), que codifica a fímbria Bundle-forming Pilus (BFP). Esta fímbria medeia a formação de microcolônias compactas que caracterizam o padrão de Adesão Localizada (AL), em células HeLa e HEp-2. E. coli enteroagregativa (EAEC), outro patotipo diarreiogênico de E. coli bastante frequente em nosso meio, caracteriza-se pela formação do padrão de Adesão Agregativa (AA), em células HeLa e HEp-2, e produção de biofilme. A identificação da expressão de AL e AA contribui para a classificação de amostras de E. coli como EPEC ou EAEC, respectivamente. No Brasil, por várias décadas, amostras de EPEC do sorotipo O119:H6 foram isoladas com alta frequência, sempre produzindo o padrão AL típico. Curiosamente, em estudos epidemiológicos mais recentes, nosso grupo isolou amostras de E. coli O119:H6 que co-expressam AL e AA (AL/AA) e produzem biofilme. Em nossos estudos do mestrado, sequenciamos o gene bfpA (que codifica a sub-unidade estrutural de BFP) de uma dessas amostras (EC404/03), o qual apresentou identidade de 99,9% com a sequencia de bfpA de uma amostra protótipo O119:H6 produtora de AL. Construímos, então, um mutante isogênico em bfpA que perdeu a capacidade de produzir AL. A seguir, transferimos, por conjugação, um plasmídio de alto peso molecular (desprovido de bfpA) da EC404/03 para E. coli não aderente. Uma caracterização preliminar dos transconjugantes resultantes revelou a produção de AA e a ocorrência de um plasmídio distinto de pEAF. Para compreender potenciais alterações sofridas por amostras de EPEC O119:H6, com relação ao padrão de adesão, pretendemos ampliar nossos estudos, caracterizando e comparando diferentes propriedades fenotípicas e genotípicas da EC404/03 com outras 2 amostras O119:H6 AL/AA bem como compará-las com as características de amostras do mesmo sorotipo, apresentando apenas AL. Pretendemos ainda obter novos transconjugantes com as outras duas outras amostras AL/AA, na tentativa de identificar se haveria um plasmídio comum associado com o padrão AA e formação de biofilme nas amostras O119:H6 AL/AA. Usando microscopia confocal, pretendemos também comparar a espessura e a distribuição das células bacterianas no biofilme formado, em superfícies biótica e abiótica, pelas amostras EC404/03, seu mutante em bfpA (obtido no mestrado), e transconjugantes. Os resultados serão analisados em combinação na tentativa de se avaliar a eventual ocorrência de relação evolutiva entre as amostras O119:H6 AL e AL/AA, por aquisição horizontal de plasmídio contendo genes que conferem AA. (AU)
GARCIA, BRUNA G.; OOKA, TADASUKE; GOTOH, YASUHIRO; VIEIRA, MONICA A. M.; YAMAMOTO, DENISE; OGURA, YOSHITOSHI; GIRAO, DENNYS M.; SAMPAIO, SUELY C. F.; MELO, ALEXIS BONFIM; IRINO, KINUE; HAYASHI, TETSUYA; GOMES, TANIA A. T. Genetic relatedness and virulence properties of enteropathogenic Escherichia coli strains of serotype O119:H6 expressing localized adherence or localized and aggregative adherence-like patterns on HeLa cells. INTERNATIONAL JOURNAL OF MEDICAL MICROBIOLOGY, v. 306, n. 3, p. 152-164, MAY 2016. Citações Web of Science: 5.