ReP USP - Detalhe do registro: Expressão do mRNA do crf e imunorreatividade à proteína fos no pvh após restrição e eletrochoque, com ou sem o uso de alprazolam
Abstract: OBJETIVOS: Analisar as respostas do CRF (papel chave na organização neural em resposta ao estresse) através do núcleo paraventricular do hipotálamo (PVH), na presença de estímulos estressores de restrição (estressor processivo) e eletrochoque (estressor sistêmico), e o efeito do ansiolítico alprazolam sobre estas respostas, através da expressão do mRNA do CRF e da imunorreatividade à proteína Fos.MÉTODO:Ratos machos Sprague-Dawley (grupos de 5 animais) foram submetidos aos estresses de restrição por 30 min, e eletrochoque por 30 min (1s de 0,5mA a cada 30s), à restrição e ao alprazolam na dose de 10 mg/kg, ao eletrochoque e ao alprazolam na mesma dose, além do grupo controle. Para a imunoistoquímica para proteína Fos, as séries foram encubadas em anticorpo 1o. (anti-Fos Oncogene) policlonal feito em coelho (1:20000), e anticorpo 2o. biotinilado anti-coelho feito em cabra (Vector, EUA- 1:1000), com o método da imunoperoxidase indireta. Para a hibridização in situ (ISH), foi realizada a transcrição da sonda marcada com 35S, com o uso de cDNA linearizado, e a RNA polimerase (Promega) SP6. Após o pré-tratamento dos tecidos, foi feita a aplicação da ribossonda nas lâminas do tecidos pré-tratados, e encubadas durante 18 horas, com posterior pós-tratamento das lâminas.RESULTADOS:A análise quantitativa da imunorreatividade à proteína Fos e da expressão do mRNA do CRF foi realizada através do Image Pro-Plus e método estatístico ANOVA. A imunorreatividade à proteína Fosno PVH revelou que o grupo restrição mostrou imunorreatividade estatisticamente maior que o grupo eletrochoque, e ambos superiores ao grupo controle. O uso do fármaco alprazolam associado à restrição e ao eletrochoque promoveu uma diminuição nesta imunorreatividade, sem relevância estatística. ) A expressão do mRNA do CRF no PVH mostrou-se semelhante à imunorreatividade à Fos: o grupo restrição com uma expressão estatisticamente maior que o grupo eletrochoque, ambos significativamente maiores que o grupo controle. O uso do fármaco mostrou uma diminuição da expressão em ambos os estímulos de estresse, sendo uma diminuição sem valores estatisticamente significativos. CONCLUSÃO: Pode-se concluir que o PVH responde de forma mais significativa ao estímulo estressor de restrição (envolve áreas superiores do SNC por ser um estressor processivo) em relação ao eletrochoque (estressor sistêmico). O ansiolítico alprazolam, na dose aqui utilizada, não provocou inibição estatisticamente significativa sobre os neurônios CRF do PVH em condições de estresse