BDPI USP - Detalhe do registro: Estudo de um transportador ABC, expresso nos órgãos reprodutivos de Nicotiana tabacum, através de plantas transgênicas
Estudo de um transportador ABC, expresso nos órgãos reprodutivos de Nicotiana tabacum, através de plantas transgênicas (2004)
USP affiliated authors: OTSU, CLAUDIA TOMIKO - FMRP
Subjects: VARIAÇÃO GENÉTICA EM PLANTAS; GENÉTICA VEGETAL
Abstract: O pistilo é um órgão estrutural e bioquimicamente complexo que produz o gametófito feminino e discrimina entre os diferentes tipos de grãos de pólen recebidos. Portanto, exerce um papel decisivo na determinação do genótipo do futuro embrião e planta. O gene NtSAT1, isolado em nosso laboratório, codifica uma proteína da família de transportadores ABC e se expressa predominantemente em estigmas e estiletes de Nicotiana tabacum. Neste trabalho foi seqüenciada uma região de 2,6kb acima do início de tradução do gene NtSAT1 e uma região de 0,9kb abaixo da região codificadora da mesma. Esta região de 2,6kb foi clonada em um vetor de expressão em plantas, na mesma fase de leitura de tradução, com a região codificadora do gene GUS (clone pCO24), e transferida para plantas de Nicotiana tabacum, via transformação por Agrobacterium tumefaciens. Além disso, foram obtidas plantas transgênicas, transformadas com genes quiméricos, contendo a região codificadora do gene NtSAT1 nas orientações sense (clone pCO30) ou antisense (pCO31), sob o controle do promotor 35S. Uma análise computacional da região de 2,6kb do promotor do gene NtSAT1 foi feita através dos programas TRANSFAC e PLACE para identificar possíveis elementos cis-regulatórios. Nesta análise, um sitio de ligação para Agamous foi identificado e poderia explicar o padrão de expressão observado no gene NtSAT1. Plantas transgênicas primárias, transformadas com a construção pCO24 foram obtidas, e a atividade deGUS foi analisada através dos métodos fluorimétrico e histoquímico. Na análise fluorimétrica, a atividade de GUS foi detectada na antera e pouca ou nenhuma expressão foi observada em estigmas e estiletes. Na análise histoquímica a atividade de GUS foi detectada no estomio e nos feixes vasculares das anteras, mas nenhuma expressão foi observada no estigma e estilete das plantas transgênicas. Além disso, a atividade de GUS foi detectada em outros tecidos ... vegetativos como caule, ovário e sépala de algumas plantas. Estes resultados indicam que o fragmento de 2,6kb da seqüência 5' a montante do gene NtSAT1, não apresenta elementos cis-regulatórios suficientes para direcionar a expressão do gene neste órgão. Entretanto, a mesma região de 2,6kb possui elementos cis-regulatórios suficientes que direcionam a expressão do mesmo nas anteras. A análise de Southern blot realizada com DNA genômico das plantas da geração T-1, digerido com a enzima EcoRI, e hibridada com a sonda preparada a partir do promotor do gene NtSAT1, indica que estas plantas possuem uma cópia do transgene inserido no seu genoma. Este resultado sugere que a variação nos níveis de expressão de GUS, detectada nas anteras de diferentes plantas desta geração, foi devido a efeito de inserção do transgene no genoma destas plantas. A análise de expressão do gene NtSAT1 nas plantas transgênicas, transformadas com a construção pCO30, foi feita por dot blot. Nesta análise, RNAtotal extraído de estigmas e estiletes do estágio 10 de desenvolvimento, de cada uma das plantas transgênicas, foi hibridado com a sonda de cDNA do gene NTSAT1. A análise indica que nenhuma planta apresentou superexpressão do gene NtSAT1, entretanto, duas plantas mostraram níveis de expressão deste gene reduzida. Na análise de dot blot das plantas transgênicas, transformadas com a construção pCO31, o RNA total foi hibridado com a sonda da região 5' UTR do gene NtSAT1, O resultado indica que duas plantas apresentam níveis de expressão reduzida do gene NtSAT1. Entretanto, nenhuma alteração fenotípica foi observada nas plantas que apresentaram expressão reduzida do gene NtSAT1 e todas as plantas produziram frutos e sementes normais. Estes resultados sugerem que os níveis de redução da expressão do gene NtSAT1 não foram suficientes para abolir a função deste gene ou outros genes poderiam suprir a função exercida pelo mesmo
FMRP 11200060470 Otsu, Cláudia Tomiko
OTSU, Cláudia Tomiko; GOLDMAN, Maria Helena de Souza. Estudo de um transportador ABC, expresso nos órgãos reprodutivos de Nicotiana tabacum, através de plantas transgênicas. 2004.Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2004.
Otsu, C. T., & Goldman, M. H. de S. (2004). Estudo de um transportador ABC, expresso nos órgãos reprodutivos de Nicotiana tabacum, através de plantas transgênicas. Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto.
Otsu CT, Goldman MH de S. Estudo de um transportador ABC, expresso nos órgãos reprodutivos de Nicotiana tabacum, através de plantas transgênicas. 2004 ;