Auxílio à pesquisa 11/06525-2 - Diaminas, Doença de Chagas - BV FAPESP
Avaliação do metabolismo oxidativo em cepas de Trypanosoma cruzi tratadas com diaminas do ferroceno
Processo: 11/06525-2
Assunto(s): Diaminas Doença de Chagas Trypanosoma cruzi Proteínas recombinantes Estresse oxidativo Western blotting
A doença de Chagas, cujo agente etiológico é o Trypanosoma cruzi, acomete milhões de pessoas na América Latina. Para o tratamento da doença, no momento estão disponíveis apenas dois medicamentos, o nifurtimox (5-nitrofurano), que não é utilizado no Brasil, e o benzonidazol (2-nitroimidazole), cuja produção foi bastante reduzida. No entanto, para ambos os medicamentos, suas ações são limitadas, visto que dependem da fase da doença, das condições fisiológicas do hospedeiro, da suscetibilidade e variabilidade genética da cepa. Assim, a busca de novas substâncias continua sendo um desafio para a ciência brasileira, ao lado da compreensão do mecanismo de resistência às drogas tripanocidas. Alguns estudos relatam um aumento na produção de enzimas que atuam na defesa celular, as quais, provavelmente, poderiam ser responsáveis pela resistência de certas cepas do parasito. Tais enzimas têm funções importantes na sobrevivência e crescimento dos parasitos: superóxido dismutase (SOD), metaloenzima que elimina radicais superóxido ao convertê-los em peróxido de hidrogênio e oxigênio molecular; old yellow enzyme (OYE), que é uma NADPH flavina oxidoredutase e pode estar envolvida na redução de substâncias tripanocidas; e, peroxiredoxina (Prx), que catalisa a redução de peróxidos. O mecanismo de resistência a fármacos utilizados contra T. cruzi ainda é pouco conhecido, mas alguns experimentos relataram que parasitos resistentes ao benzonidazol superexpressam algumas proteínas, quando expostos àquela substância. Os parasitos apresentam alta heterogeneidade morfológica, genética, comportamental e de quadros clínicos, conferindo patogenicidade e parasitemia diferentes em cada cepa, o que dificulta o tratamento da enfermidade. Recentemente, a equipe do laboratório da orientadora clonou e expressou o gene da proteína recombinante da peroxiredoxina (Prx) de T. cruzi, que após purificação foi utilizada na produção de anticorpos policlonais que revelaram, por Western blot, diferenças na expressão da enzima nos parasitos em cepas tratadas e não tratadas com benzonidazol (manuscrito em preparação). Assim, este projeto pretende clonar e expressar os outros dois genes responsáveis pelas enzimas SOD e OYE, produzindo também anticorpos contra as respectivas proteínas recombinantes com o intuito de verificar, pela mesma técnica de Western blot, as modificações em seu nível de expressão em cepas tratadas ou não com Diaminas do Ferroceno, que mostraram intensa atividade tripnocida. A expressão de Prx também será igualmente avaliada. (AU)
KOHATSU, ANDREA A. N.; SILVA, FLAVIA A. J.; FRANCISCO, ACACIO I.; RIMOLDI, ALINE; SILVA, MARCO T. A.; VARGAS, MARIA D.; DA ROSA, JOAO A.; CICARELLI, REGINA M. B. Differential expression on mitochondrial tryparedoxin peroxidase (mTcTXNPx) in Trypanosoma cruzi after ferrocenyl diamine hydrochlorides treatments. Brazilian Journal of Infectious Diseases, v. 21, n. 2, p. 125-132, MAR-APR 2017. Citações Web of Science: 2.