BDPI USP - Detalhe do registro: Toxocaríase murina experimental: comparação do diagnóstico molecular e imunológico
Fonseca, Priscilla Duarte Marques
Subjects: INFECÇÃO EXPERIMENTAL ANIMAL; ELISA EM ANIMAL; REAÇÃO EM CADEIA POR POLIMERASE; TOXOCARA CANIS
Abstract: A toxocaríase é uma zoonose negligenciada e provoca importante morbidade. Apesar de resultados satisfatórios, o imunodiagnóstico apresenta limitações. A utilização de técnicas de biologia molecular no diagnóstico de diversas parasitoses apresenta resultados promissores, contudo, há poucos estudos para o diagnóstico da toxocaríase. A fim de analisar a aplicabilidade da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) convencional e sua relação com técnicas de diagnóstico imunológico, foram utilizados 42 camundongos BALB/c, machos e entre 6-8 semanas de vida, inoculados com cinco (Grupo I), 50 (Grupo II) e 500 ovos larvados (Grupo III) respectivamente; um Grupo Controle (C), constituído de sete camundongos não infectados, também foi incluído no estudo. Todos foram sangrados pelo plexo orbital aos 15, 30, 60 e 90 dias pós-infecção e, do total, 24 camundongos foram sangrados aos 120 dias pós-infecção, para o diagnóstico imunológico. As amostras de soro foram processadas pelos métodos ELISA e Western-blotting, utilizando antígeno de excreção-secreção obtido a partir de larvas de terceiro estágio de Toxocara canis. A PCR convencional foi aplicada em amostras de soro, fígado e, cérebro e carcaça utilizando dois primers descritos na literatura. O ELISA e Western-blotting apresentaram resultados positivos em todas as datas pós-infecção para a maioria dos inóculos utilizados, e quanto maior a carga parasitária e mais próximo dos 60 dias pós-infecção, mais intensa e elevada foi a resposta de IgG. O ELISA, nas condições estudadas, foi o teste mais apropriado para a detecção de IgG na fase inicial da doença, O Western-blotting apresentou melhores resultados na fase tardia e em animais inoculados com maior carga parasitária.Na PCR convencional, apesar dos resultados positivos nos diversos testes de padronização com amostras de larvas e vermes adultos de T. canis, não foi possível detectar o DNA do parasito nas amostras de soro em nenhum grupo e data pós-infecção, empregando ambos os primers; foi detectado DNA do parasito em amostras de todos os órgãos, especialmente no grupo III. A positividade da técnica aumentou em alguns órgãos de todos os grupos após a triplicata. Portanto, nas condições demonstradas neste estudo, o soro não é a melhor amostra para o diagnóstico da toxocaríase murina experimental. Mesmo com limitações, as técnicas de imunodiagnóstico são as mais adequadas para o diagnóstico da toxocaríase experimental. Em relação ao diagnóstico molecular, são necessários mais estudos para o aprimoramento da técnica.