Bolsa 09/12170-2 - Eucalipto - BV FAPESP
Caracterização de promotores de Eucalipto com expressão tecido-específica:raíz e folha
Processo: 09/12170-2
Beneficiário: Carolina dos Santos Costa
A identificação e caracterização de promotores tecido-específicos é de grande interesse para produção de transgênicos, sobretudo se considerarmos que a expressão generalizada de um dado transgene pode gerar um custo energético elevado para a planta. A construção de cassetes de expressão contendo promotores com expressão tecido-específica torna-se uma alternativa viável para produção de transgênicos. Diante da importância do eucalipto para o setor industrial florestal brasileiro, o presente projeto tem como objetivos caracterizar funcionalmente um promotor de eucalipto com expressão específica em raiz, que já se encontra inserido em plantas transgênicas de tabaco e, isolar e caracterizar a região promotora de um gene de eucalipto validado como apresentando expressão específica em folha. Encontram-se em nosso laboratório plantas transgênicas de tabaco (Nicotiana tabacum SR1) contendo o cassete de expressão composto pelo promotor de raiz fusionado ao gene repórter GUS (que codifica a ²-glucoronidase) produzidas por Leite (2009) nas quais serão realizadas análises da atividade transcricional e especificidade do promotor de raiz através de ensaios histoquímicos e fluorimétrico. Predições in silico serão realizadas fazendo uso do banco de dados do consórcio FORESTs que disponibiliza 123.889 ESTs (etiquetas de sequências expressas) provenientes de bibliotecas de vários órgãos/tecidos de eucalipto. Após a análise das sequências com expressão tecido-especifica em folha, os fragmentos serão seqüenciados, clonados no vetor pCAMBIA-1381z (Cambia) para transformação em Agrobacterium tumefaciens para posterior transformação de Nicotiniana tabacum. Esperado o tempo de crescimento em casa de vegetação serão realizados análises da atividade transcricional e especificidade através de ensaios histoquímicos e fluorimétricos.