Otimizacao de uma estrategia baseada em PCR em tempo-real para deteccao e quantificacao do DNA do Herpesvirus Humano 6 (HHV-6) em pacientes submetidos a transplante de celulas progenitoras hematopoieticas
Título alternativo Optimization of a strategy based on qPCR to detect and quantify Human Herpesvirus 6 (HHV-6) DNA in patients undergoing allogeneic hematopoietic stem cell transplantation
Autor Ueda, Miriam Yurika Hiramoto
Resumo O Herpesvirus humano 6 (HHV-6) pode causar graves complicacoes em pacientes submetidos a transplante de celulas progenitoras hematopoeticas (TCPH), como encefalite, atraso na enxertia plaquetaria e agravamento da doenca do enxerto contra o hospedeiro (DECH). Monitorar esse virus e prover diagnostico precoce, rapido e preciso das doencas associadas a ele constitui medida essencial para tentar melhorar os resultados do transplante. Ate a presente data, nao ha estudo prospectivo sobre a incidencia e caracteristicas clinicas das infeccoes causadas pelos herpesvirus em receptores TCPH no Brasil. Alem disso o impacto da maioria das infeccoes por Herpesvirus apos o transplante permanece obscuro. Nosso objetivo foi padronizar uma tecnica de deteccao rapida, baseada em PCR em tempo real para detectar e quantificar o HHV-6 em amostras de plasma. O teste foi baseado na tecnologia TaqMan® utilizando sonda de hidrolise. As sequencias de primers e sondas previamente descritas foram otimizadas para avaliacao da efiCiência, sensibilidade e reprodutibilidade. Foi utilizado como controle interno o controle comercial Exogenous Internal Positive Control (IPC) Reagents (Life Technologies) e como controle positivo celulas infectadas com HHV-6. O DNA foi extraido em robo semi-automatizado (QIAcube); as reacoes foram preparadas no robo de pipetagem de alta precisao (QIAgility) e todas as reacoes foram processadas no equipamento 7900HT (Life Technologies). A efiCiência obtida foi de 91,5%; range de linearidade de 10 a 106 copias/reacao; limite de deteccao apos analise dos resultados das amostras de plasma foi de 5 copias/reacao ou 250 copias/mL de plasma e o valor do range da variacao entre ensaios (reprodutibilidade) foi 0,78 a 2,82. Nao foram detectados resultados falsos positivos e nem reacoes cruzadas com outros virus. O teste foi aplicado a 1.082 amostras de plasma, coletados de 98 receptores de TCPH. O DNA do HHV-6 foi detectado em 18 (2%) amostras de 12 pacientes. A carga viral mais alta detectada foi de 69.163 copias/mL. A tecnica de PCR quantitativa padronizada se mostrou simples, rapida, capaz de detectar uma ampla variacao da carga viral. Devido ao formato do teste de alta producao, este metodo pode ser aplicado na monitoracao dos pacientes submetidos ao TCPH. O teste parece ser uma boa ferramenta e um potencial meio de fazer o diagnostico das infeccoes causadas pelo HHV-6 e realizar pesquisa clinica na area