Leciana Rorato Chiconelli Vanzo1
Agostinho Bryk Junior2
Maria Claudia Gomes Komatsu2
Carlos Augusto Moreira Junior3
Descritores: Crescimento bacteriano; Fluorocarbonetos; Contaminação bacteriana ocular; Pseudomonas aeruginosa; Staphylococcus aureus
Desde os primeiros relatos de uso de perfluorocarbonos líquidos (PFCL) na cirurgia vítreo-retiniana, a partir de 1987 com os trabalhos de Chang e col.(1-5), é cada vez mais difundido seu uso entre os cirurgiões de retina.
Essas substâncias mostraram-se úteis por apresentarem propriedades físico-químicas favoráveis ao bom desempenho do ato cirúrgico(6), possibilitando conforto e segurança ao cirurgião tanto na sua administração quanto na sua remoção ao final da intervenção cirúrgica. No entanto, não é rara a permanência de pequenas quantidades de PFCL (bolhas ou gotículas)(7) dentro da cavidade vítrea após o término da cirurgia.
A permanência de uma substância estranha na cavidade vítrea poderia representar um meio de cultura para a proliferação bacteriana, ocasionando assim uma infecção grave e de tratamento complicado, pois há dificuldade de se manter concentrações terapêuticas de antibióticos na cavidade vítrea por tempo adequado(8). Desta forma é importante verificar o potencial de contaminação dos PFCL. Inúmeras pesquisas demonstram que os agentes patogênicos mais comuns nas infecções intraoculares são S. aureus e P. aeruginosa(8-12).
O objetivo do presente estudo foi verificar o crescimento de S. aureus e P. aeruginosa em perfluoroctano (PFO), um dos PFCL mais utilizados na cirurgia vítreo-retiniana(6).
Os perfluoroquímicos líquidos são compostos pertencentes a uma classe de oligômeros do óxido de perfluoropropileno purificados. Apresentam excelente estabilidade química e térmica em virtude de suas conformações estruturais de carbono, oxigênio e flúor. Os perfluorocarbonos líquidos (PFCL) geralmente apresentam as seguintes propriedades: são imiscíveis com a água(6,13), transparentes, incolores, inertes quimicamente, inodoros, não são inflamáveis, possuem baixa viscosidade, insolubilidade em solventes orgânicos e alta gravidade específica(14).
Esses compostos são opticamente transparentes sendo seu índice de refração semelhante ao do corpo vítreo normal, ou seja, 1,29, o que permite uma fácil observação intra-ocular durante manobras per-operatórias(13).
A baixa viscosidade de 2 a 3 centistokes a 25ºC(13) bem como a insolubilidade em solventes orgânicos convencionais(14) representam outras propriedades favoráveis desses compostos.
Utilizaram-se três meios de cultura: PFO, caldo de digestão de soja e caseína (TSB) e solução salina a 0,9% (SS).
Dividiram-se 5 ml de PFO em frascos contendo 1 ml, identificados pela numeração de 1 a 5. Nos frascos 1 e 2 inoculou-se uma colônia inteira de P. aeruginosa (ATCC 27853) e nos recipientes 3 e 4 a mesma quantidade de S. aureus (ATCC 25923). O frasco 5 serviu de controle sem sofrer contaminação. A utilização de colônias bacterianas inteiras se deve ao fato do PFO ser imiscível em água.
Com o objetivo de se verificar a viabilidade dos microrganismos, inoculou-se separadamente uma colônia de cada bactéria em frascos contendo 1 ml de TSB, um meio de cultura rico em nutrientes favoráveis à proliferação bacteriana.
Todas a soluções foram homogeneizadas em Vortex a 1000 rpm e, posteriormente, mantidas em uma incubadora a 37ºC por 10 dias.
Verificou-se o crescimento bacteriano através da contagem de colônias em placas de agar sangue 24 h após cada repique.
Observou-se o crescimento de 1 colônia e 3 colônias de P. aeruginosa nos frascos 1 e 2, respectivamente. No entanto, nos demais tempos de aferição não se detectou nenhum desenvolvimento dessa bactéria em PFO. Já nos meios TSB e SS o crescimento foi abundante em todos os tempos conforme a tabela 1.
Constatou-se no tempo zero a presença de 01 colônia e de 16 colônias de S. aureus nas amostras 3 e 4, respectivamente. Nas horas seguintes o crescimento desse microrganismo não mais foi observado em PFO. Com o passar do tempo houve um decréscimo no desenvolvimento do estafilococo em TSB e SS, no entanto o crescimento mesmo assim foi abundante (Tabela 2).
No frasco 5, controle não contaminado, não houve proliferação bacteriana em nenhum dos tempos.
O maior crescimento bacteriano se deu em caldo de digestão de soja e caseína por se tratar de um meio de cultura próprio para o desenvolvimento bacteriano.
Embora a P. aeruginosa seja um microrganismo muito resistente, capaz de se desenvolver até em meios extremamente desfavoráveis, não se observou seu crescimento em nenhuma das amostras de PFO em estudo, com exceção daquelas do tempo zero, que correspondem ao momento da inoculação do germe. Somente a falta de nutrientes não explicaria adequadamente a ausência de crescimento dessa bactéria, porque demonstramos que mesmo em solução salina a 0,9% essa cresceu abundantemente.
Não houve crescimento de S. aureus em PFO, exceto no tempo zero quando se observou o crescimento de 01 colônia na primeira amostra e de 16 colônias na segunda. Em solução salina a 0,9%, o desenvolvimento do estafilococo foi abundante, no entanto houve um pequeno decréscimo a partir de 168 horas (7 dias).
Os resultados deste estudo "in vitro" demonstraram que o PFO não representa um meio favorável para o crescimento bacteriano.
Keywords: Bacterial growth; Fluorocarbons; Ocular bacterial contamination; Pseudomonas aeruginosa; Staphylococcus aureus
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1 Médica Residente em Oftalmologia do Hospital de Clínicas da Universidade Federal do Paraná.
2 Acadêmicos do 5º ano de Medicina da Faculdade de Medicina da Universidade Federal do Paraná.
3 Professor Titular de Oftalmologia da Universidade Federal do Paraná.
Endereço para correspondência: Maria Claudia Gomes Komatsu - R. Alferes Poli, 271 - Curitiba (PR) CEP 80230-090. E-mail: mailto:dragu@cwb.matrix.com.br