Bolsa 10/00206-0 - Proteínas recombinantes, Proteômica - BV FAPESP
Caracterização molecular da hemorragia induzida pela metaloproteinase HF3: análise das interações com componentes da matriz extracelular, e da regeneração tecidual pós-hemorragia.
Processo: 10/00206-0
Assunto(s): Proteínas recombinantes Proteômica
HF3 (Hemorrhagic Factor 3) é uma metaloproteinase de veneno de serpente (SVMP, na sigla em inglês) da classe P-III, altamente hemorrágica, isolada do veneno da Bothrops jararaca. As SVMPs da classe P-III são proteínas de estrutura modular que contêm, além de um domínio catalítico, dois domínios regulatórios (tipo-disintegrina e rico em cisteínas) envolvidos em mecanismos de interação com alvos celulares e plasmáticos. Trabalhos anteriores sobre a ação de SVMPs revelaram que o domínio rico em cisteínas das metaloproteinases da classe P-III pode funcionar como um sítio de interação dessas proteinases com seus alvos celulares e plasmáticos. Além disso, um extenso estudo sobre a ação do HF3 sobre proteínas do plasma e da matriz extracelular revelou que o HF3 é capaz de degradar in vitro fibronectina, vitronectina, fibrinogênio, fator de von Willebrand, laminina, colágenos IV e VI e Matrigel", além de interagir com fibrinogênio, fibronectina, laminina, colágenos I e VI, em ensaios de ligação em fase-sólida. A análise do efeito in vivo do HF3 nativo em proteínas da derme de camundongos, por abordagens proteômicas, revelou uma diminuição da intensidade de spots contendo proteínas do citoesqueleto e proteínas da matriz extracelular, fato que pode ser atribuído à degradação pela ação do HF3 in vivo. O presente trabalho tem como objetivo aprofundar a caracterização molecular da hemorragia induzida pelo HF3 e da regeneração tecidual pós-hemorragia. Para isso, serão avaliados: i) a atividade proteolítica do HF3 sobre proteoglicanos da matriz extracelular in vitro e também utilizando análise imunohistoquímica da derme de camundongos; ii) o efeito do HF3 na derme de camundongos do início da hemorragia até a regeneração do tecido utilizando técnicas proteômicas, como eletroforese bidimensional diferencial (2D-DIGE) e espectrometria de massas; iii) a interação do HF3 com componentes da matriz extracelular, incluindo proteoglicanos e o fator de crescimento derivado de plaquetas, utilizando ressonância plasmônica de superfície. Ainda, pretendemos estudar o processamento do precursor (zimogênio) do HF3 por meio da obtenção do precursor recombinante em levedura, e análise de seu processamento por proteinases do veneno e do tecido da glândula de veneno. Este estudo deverá contribuir no conhecimento sobre as alterações causadas por SVMPs em componentes da matriz extracelular durante o processo de geração da hemorragia e regeneração tecidual.