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Title in Portuguese: Papel do estresse oxidativo e de vias pró-inflamatórias na osteonecrose dos maxilares induzida por bisfosfonatos em ratos
Author: Ferreira Júnior, Antonio Ernando Carlos
Citation: FERREIRA JÚNIOR, A. E. C. Papel do estresse oxidativo e de vias pró-inflamatórias na osteonecrose dos maxilares induzida por bisfosfonatos em ratos. 2020. 10 f. Tese (Doutorado em Odontologia) - Faculdade de Farmácia, Odontologia e Enfermagem, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2020.
Abstract in Portuguese: Os bisfosfonatos são medicamentos comumente utilizados no tratamento de desordens ósseas e pincipalmente no tratamento de metástases ósseas durante a terapia antineoplásica. Como efeito adverso, esses fármacos são associados com o desenvolvimento de Ostequimionecrose dos Maxilares associada a Bisfosfonatos (OMB), uma condição de difícil tratamento que apresenta patogênese pouco esclarecida. Sugerese, entretanto, que mecanismos inflamatórios possam estar associados, com aumento da expressão de citocinas e participação de grupos celulares imunes específicos. Dessa forma, constitui objetivo do presente trabalho delinear vias de mediadores próinflamatórios incluindo a participação do estresse oxidativo na patogênese da OMB experimental. Para isso, foram utilizados 54 ( 6 por grupo) ratos Wistar machos (180-220g) submetidos a quatro injeções venosas semanais de solução salina estéril ou ácido zoledrônico (AZ) 0,20 mg/kg, associadas ou não ao bloqueio das vias de TNF-α (infliximabe 0,5 mg/kg), iNOS (aminoguanidina 50 mg/kg) e COX-2 (celecoxibe 16 mg/kg). Os mesmos foram submetidos à exodontia do primeiro molar inferior esquerdo (dia 49). Após 70 dias, foi realizada a eutanásia, onde foram removidos e pesados os órgãos (fígado, baço, rins e estômago) e as mandíbulas dos animais. Essas últimas foram hemisseccionadas (lados esquerdo e direito) e submetidas às análises radiográfica, histológica, histomorfométrica (contagem de polimorfonucelares, mononucelares, número de lacunas de osteócitos vazias e osteoclastos) e imuno-histoquímica para os marcadores COX-2, Fator de Necrose Tumoral alfa (TNF-α), Interleucina(IL)-1β, IL-6, Caspase-3, RANK, RANKL e OPG pelo método da estreptavidina-biotina-peroxidase. Verificaram-se, também, os níveis de Mieloperoxidase (MPO), Nitrito/nitrato, Glutationa e Malanoaldeído. Radiograficamente o grupo salina apresentou a área no sítio de exodontia reparada ao final do período experimental, já nos grupos tratados com ácido zoledrônico, os valores obtidos de área radiolúcida foram superiores ao grupo salina (p<0,001), obtendo assim áreas sugestivas de osteonecrose que se mantiveram sem diferenças mesmo entre os diferentes bloqueios adicionados posteriormente (p=0,098). Após análise histomorfométrica, o número de neutrófilos no grupo salina (3±1) foi significantemente menor ao do grupo ácido zoledrônico (373±85) (p<0,05). Os animais co-tratados com aminoguanidina apresentaram redução significante do número de neutrófilos (140±18) em relação ao grupo AZ (p<0,05). Em adição, o mesmo grupo tratado com aminoguanidina (233±12) aumentou o número de mononucelares em relação ao grupo tratado somente com AZ (168±29). O número de osteoclastos em apoptose e lacunas de osteócitos vazias não demonstraram diferenças após os diferentes bloqueios. Na análise imunohistoquímica, o grupo ácido zoledrônico demonstrou aumento significativo na expressão de TNF-α (p<0,001), IL-1β (p<0,001), IL-6 (p=0,007), iNOS (p=0,003), COX-2 (p=0,003), NF-κB (p<0,001), RANKL (p=0,020), OPG (p=0,001), TRAP (p<0,001) e Caspase-3 (p=0,001) em relação ao grupo salina. Além disso, foram visualizadas, também, maiores dosagens de MPO (p<0,005), Glutationa (p=0,025) e Malanoaldeído (p=0,027) no grupo AZ em relação ao grupo salina. Após os bloqueios, foi visualizado diminuição significativa, em relação ao grupo tratado com AZ, da expressão de IL-1 no grupo co-tratado com tocilizumabe (p=0,021), de IL-6 no grupo co-tratado com tocilizumabe (p=0,041), de TNF- α no grupo co-tratado com infliximabe (p<0,001), de iNOS no grupo co-tratado com aminoguanidina (p=0,042) e de COX-2 nos grupos co-tratados com aminoguanidina (p=0,012) e celecoxibe (p=0,038), sem diferenças significativas para a expressão de NF-κB entre todos os grupos que receberam AZ (p=0,091). Com isso, conclui-se que os bloqueios parciais de TNF- α, IL-6 e COX-2 através de infliximabe, tocilizumabe e celecoxibe, respectivamente, não interferiram nas características radiográficas e histológicas da OMB. Entretanto, o bloqueio do estresse oxidativo através da administração da aminoguanidina, alterou aspectos celulares inflamatórios (relação polimorfonucelares/mononucleares), contudo sem repercussão no número de células osteclásticas com sinais de apoptose ou lacunas de osteócitos vazias.