Bolsa 00/03065-6 - DNA recombinante, Tétano - BV FAPESP
Clonagem e expressao do fragmento "c" da toxina tetanica em fusao com a subunidade s1 da toxina pertussis em e.coli.
Processo: 00/03065-6
Beneficiário: Amanda Lobarto Gimenez
Pretende-se obter um cassete de expressão em E. coli que potencialmente constituirá uma vacina dupla que deverá proteger contra tétano e pertussis. O fragmento C da toxina tetânica, por ser um imunógeno potente, será empregado na fusão da subunidade S1 da toxina pertussis na tentativa de aumentar a resposta imunoprotetora deste antígeno. Para tanto será empregado um vetor, desenvolvido neste laboratório, que contém o fragmento C clonado, sítios de restrição, códons de iniciação e terminação. Neste vetor será clonado o gene da subunidade S1 da toxina pertussis obtido pela técnica de PCR (Reação em Cadeia da Polimerase) a partir de um plasmídeo contento a toxina pertussis mutada e oligonucleotídeos complementares à seqüência de S1. A subunidade S1 será clonada em fusão tanto na extremidade amino como na carboxi-terminaí do fragmento C, na tentativa de expressar estes antígenos com o maior grau de imunogenicidade. Os genes clonados serão induzidos a expressar os polipetídeos correspondentes. As proteínas recombinantes expressas serão analisadas pelas técnicas de ELISA e Western blot na presença de anticorpos específicos para cada antígeno. (AU)