ReP USP - Detalhe do registro: Padronização e formulação do custo da PCR-RFLP para o diagnóstico de Leishmaniose Tegumentar em papel de filtro
USP affiliated author: FREITAS, STELLA FELIPPE DE - FMRP
Subjects: LEISHMANIOSE CUTÂNEA; DIAGNÓSTICO
Abstract: A leishmaniose tegumentar Americana (LTA), nas formas cutânea ou mucosa, é endêmica no Brasil. Nos últimos anos, o Ministério da Saúde registrou média de 35.000 casos novos de LTA em praticamente todos os estados do país, sendo sua crescente a cada ano. Na região nordeste do estado de São Paulo, incluindo Ribeirão Preto, a LTA é autóctone. Na tentativa de um diagnóstico precoce e seguro da doença associaram-se ao exame clínico- epidemiológico exames subsidiários, como a Polymerase Chain Reaction (PCR) e PCR- Restriction Fragment Lenght Polymorphism (PCR-RFLP), que permitem a identificação da espécie de leishmania presente na amostra. Identificamos em nosso laboratório, por PCR, as espécies L. (v:) braziliensis e L (L.) amazonensis em amostras de pele ou de mucosa de pacientes com L T A. Dessa forma, os objetivos principais deste estudo foram: (1) padronizar a técnica de PCR-RFLP para a identificação da espécie de leishmania em amostras de pele ou de mucosa, coletadas em papel de filtro na forma de imprint, e (2) calcular o custo individual deste exame laboratorial. A população de estudo contou com 67 amostras de pacientes atendidos no HC- FMRP-USP, 28 amostras de pacientes atendidos no Hospital Universitário de Brasília-D.F. e 2 amostras da UNIFESP, totalizando 97 amostras. Das 65 amostras na forma de imprint de pacientes .com diagnóstico clínico de L T A atendidos no HC-FMRP/USP, no Hospital Universitário de Brasília-D.F. e na UNIFESP, 54 (83%) amostrasforam positivas na PCR. A partir do resultado da identificação por PCR-RFLP, com as enzimas Hae III e Bsr I, das 54 amostras forma de imprint pudemos demonstrar que 39 (72,2%) foram de L. (V:) braziliensis; quatro (7,4%) foram identificadas como L. (L.) amazonensis. Das 97 amostras na forma de imprint 32 foram coletadas de pacientes com diagnóstico ou suspeita clínica de outras doenças de pele clinicamente semelhantes à LTA, atendidos no HC-FMRP/USP, foram coletadas nas formas de imprint e biópsia. Destes pacientes, 18 apresentaram PCR negativa para leishmaniose e 14 amostras cujos diagnóstico clínicos foram: Bazin, hanseníase, paracoccidioidomicose, ectima, úlcera indefinida, farmacodermia e histoplasmose, apresentaram PCR-RFLP positiva todas identificadas como L. (V) braziliensis. Ressalta-se a facilidade no envio e conservação de amostras na forma de imprint, destacando sua utilidade em pesquisas de campo e localidades distantes de um centro especializado. Para o cálculo do custo da PCR-RFLP como método diagnóstico para LTA realizou-se pesquisa de preços (em moeda corrente) de equipamentos, materiais de consumo e materiais permanentes. Ainda devem-se levar em consideração os custos diretos e indiretos, fixos e variáveis, e gastos com mão-de-obra, que influenciam diretamente o custo final do procedimento laboratorial. Quanto ao custo do exame pôde-se demonstrar que existe a possibilidade de que um laboratório de rotina de médioporte, equipado com materiais, instalações e equipamentos básicos, possa realizar o referido teste molecular, ficando este calculado em U
Imprint of skim samples collected on filter paper substitutes skin biopsy for etiological diagnosis of american tegumentary leishmaniasis by polymerase chain reaction