Introdução à técnica de CRISPR | Sociedade Brasileira de Genética
Introdução à técnica de CRISPR
Editora: SBG
ISBN: 978-85-89265-24-9
Edição: 1°.
Tiago Campos Pereira (organizador)
CRISPR é uma técnica de biologia molecular que em poucos anos se tornou protagonista de um avanço surpreendente na genética. Por meio dela é possível: inativar genes (knockout), integrar tasngenes em regiões específicas do genoma (knock-in), mapear genes nos cromossos, regular positiva ou negativamente a expressão gênica (CRISPRa e CRISPRi), rastrear RNAs na célula (RNA tracking), visualizar regiões no genoma (DNA labeling), substituir sequências alélicas (allelic replacement), deletar genes, entre muitos outros. Cada uma dessas diversas abordagens pode ser convertida em aplicações na pesquisa básica (dessecção genética), médica (estudo e combate de doenças), na agricultura (geração de cultivares com novas propriedades), veterinária (animais resilientes a doenças) e indústria (produção de biomoléculas).
Esta obra vislumbra o universo de CRISPR e propicia uma perspectiva especilamente ampla, abordando: introdução (histórico, função biológica e evolução do sistema CRISPR); mecanismo básico de ação da técnica (Cas9, gRNA, PAM, efeitos gerais da clivagem do alvo, vias de HDR e NHEJ); sua versatilidade (edição do DNA, regulação da expressão gênica, marcação de DNA, clivagem de RNA, mapeamento de genes, RNA tracking); aplicações; comparação com outras técnicas de nocauteamento (RNAi, gene targeting, ZFNs e TALENs); variantes naturais e artificiais de Cas9 e gRNAs (Cas9 clássica, nickases, Cas9 de alta precisão, dead Cas9 e Cpf1); formas de obtenção de Cas9 e gRNAs (vetores, mRNAs, proteínas, desenho de gRNAs e bibliotecas); controles experimentais; ensaios moleculares para confirmação da edição genética: efeito mosaico; métodos para o uso de CRISPR em diversos modelos (bactérias, leveduras, fungos, plantas, animais e células humanas); otimizações da técnica (inibição de NHEJ, multiplexing, Mutagenic Chain Reaction, espécies transgênicas para Cas9); questões éticas, legais, ambientais, de pioneirismo e além.
CRISPR emerge nesta década como um bisturi molecular: uma ferramenta que permite realizar incisões precisas no genoma, resultando na edição, regulação e mapeamento de genes e transcritos de uma maneira simples, direta, rápida e a baixo custo. CRISP e técnicas associadas possibilitam estudar o genoma e o transcriptoma de uma maneira inesperadamente singela, expandindo assim as fronteiras de nosso conhecimento sobre genes.