Auxílio à pesquisa 09/00904-1 - Membrana eritrocítica, Estrutura terciária de proteína - BV FAPESP
Detergent resistant membranes (DRM) de eritrócitos: indução por diferentes agentes, efeito da diminuição de colesterol, variação de temperatura, força iônica e anestésicos locais
Processo: 09/00904-1
Assunto(s): Membrana eritrocítica Estrutura terciária de proteína Ressonância paramagnética eletrônica Eletroforese Eritrócitos Colesterol
A separação lateral de fases, que forma domínios (lipid rafts) de composição diferenciada onde proteínas específicas se inserem para manter sua funcionalidade, é um fenômeno das biomembranas que tem sido associado a processos de fusão, comunicação intercelular, transdução de sinal e propagação do estímulo nervoso. A membrana do eritrócito é um ótimo modelo para o estudo dos lipid rafts. Operacionalmente, as propriedades destes domínios, bem como seu papel fisiológico têm sido estudados através do preparo de frações ricas em colesterol/esfingolipídios e proteínas específicas, as DRMs (Detergent Resistant Membranes), obtidas com uso de detergentes, em temperaturas baixas. Nosso grupo de pesquisa, Biomembranas IB/Unicamp, em colaboração com o grupo do Dr. Giampaolo Minetti (Universita Degli Studi di Pavia, Itália) demonstrou, pela primeira vez na literatura, o preparo e caracterização de DRMs de eritrócito obtidas com uso do detergente C12E8 (Domingues et al, 2009). Com a presente solicitação objetivamos adquirir equipamentos e reagentes necessários para dar continuidade a esta linha de pesquisa, de forma independente. Pretendemos avaliar: i) a capacidade de outros detergentes não-iônicos (Brij, Tween,...) de induzir a formação dessas frações resistentes de membrana e compará-las com as obtidas com Triton X-100 e C12E8 e ii) alterações nos protocolos de preparo das DRMs, como variação da temperatura, depleção de colesterol da membrana e possível efeito de anestésicos locais na formação e composição lipídica e proteica desses domínios de membrana. (AU)
DOMINGUES, CLEYTON C.; CIANA, ANNARITA; BUTTAFAVA, ARMANDO; CASADEI, BRUNA RENATA; BALDUINI, CESARE; DE PAULA, ENEIDA; MINETTI, GIAMPAOLO. Effect of Cholesterol Depletion and Temperature on the Isolation of Detergent-Resistant Membranes from Human Erythrocytes. Journal of Membrane Biology, v. 234, n. 3, p. 195-205, APR 2010. Citações Web of Science: 18.