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Daniel Amarante Dias
1 Aula 3 Reação de VDRL em amostras de líquor A realização do VDRL em amostras de líquor é uma ferramenta fundamental para o diagnóstico da sífilis congênita ou da neurossífilis. Para analisar amostras de líquor, o preparo do antígeno sofre algumas modificações, conforme você verá nesta aula. Mas, antes, fique atento às orientações a seguir. Somente o VDRL pode ser utilizado para testar amostras de líquor. Não teste amostras de líquor com conjuntos diagnósticos que não tenham sido padronizados para a utilização nesse tipo de amostra. Antes de realizar o teste, certifique-se de que o kit de que você dispõe permite testar amostras de líquor. Leia as instruções do fabricante do produto antes de iniciar o teste. Cuidados com a amostra de líquor para fazer o VDRL A amostra de líquor deve ser centrifugada, a fim de sedimentar e remover hemácias ou contaminações bacterianas que podem estar presentes e causar interferência no teste.! A amostra de líquor não precisa ser inativada para a realização do VDRL. Amostras de líquor turvas após a centrifugação, ou com hemólise, não são adequadas para o teste VDRL. Nesses casos, solicite uma nova amostra. Se não for possível obter nova amostra, e se houver concordância do médico que estiver assistindo o indivíduo, pode-se fazer um teste treponêmico. No entanto, se esse teste for reagente, deve-se obrigatoriamente fazer o VDRL para o acompanhamento do tratamento. 1
2 Procedimentos do VDRL em amostras de líquor 1. Preparo da suspensão antigênica modificada para uso em amostras de líquor Materiais necessários: Suspensão antigênica de VDRL preparada conforme está detalhado na ação 3 e validada de acordo com a ação 6, na aula 2. Solução de NaCl 10% (10 g de NaCl em 100 ml de água destilada). Erlenmeyer de 25 ml com tampa de vidro esmerilhado. Pipetas de volume ajustável entre 1,0 ml e 5,0 ml ou pipetas de vidro de 2 ml. Pera ou macrocontrolador de pipetagem para pipetas de vidro. Recipiente para descarte de ponteiras ou recipiente com água e sabão neutro para colocar as pipetas de vidro utilizadas. Cronômetro. Caneta para escrever em vidro. Protocolo de trabalho. Como fazer? a) Misture, em um Erlenmeyer, uma parte de solução de NaCl 10% com uma parte da suspensão antigênica do VDRL previamente preparada e validada para utilização com amostras de soro. b) Para testar entre uma e cinco amostras de líquor, misture 1,5 ml de NaCl 10% com 1,5 ml da suspensão antigênica. c) Homogeneize a mistura por meio de suaves movimentos de rotação. Deixe a mistura descansar ao menos 5 minutos antes do uso. d) Identifique o Erlenmeyer: Suspensão antigênica para VDRL em líquor, horário e data do preparo. f) Utilize a suspensão em até 2 horas após o preparo. Depois desse período, se houver necessidade de testar outras amostras de líquor, prepare uma nova suspensão antigênica. 2
3 2. O teste de VDRL qualitativo em amostras de líquor Materiais necessários: Suspensão antigênica modificada. Solução salina (NaCl 0,9%). Seringa de vidro de 1 ml com agulha de calibre 22 G calibrada para 50 gotas com 0,5 ml da suspensão antigênica ou pipeta de 10 µl. Lâmina de vidro escavada com círculos côncavos de 14 mm de diâmetro e 1,75 mm de profundidade (lâminas de Kline). Agitador orbital, tipo Kline, ajustado para 180 ±2 rpm. Microscópio óptico comum (objetiva 10X e ocular 10X). Pipetas de volume ajustável entre 50 µl e 200 µl. Ponteiras descartáveis para volumes entre 50 µl e 200 µl. Caixa para descarte de ponteiras. Recipiente de vidro para descontaminação de produtos biológicos, contendo solução aquosa de hipoclorito de sódio (uma parte de água sanitária comercial mais quatro partes de água) ou contendo álcool 70% (peso a peso p/p). Caneta para escrever em vidro. Cronômetro. Protocolo de trabalho.! Para calibrar a agulha utilizada para pipetar a suspensão antigênica do VDRL no líquor você deve seguir os mesmos procedimentos detalhados anteriormente na ação 4 (aula 2) para o VDRL. Observe ainda que: o calibre da agulha é de 22 G; a agulha estará calibrada se você contar 50 gotas (±1) para cada 0,5 ml de suspensão antigênica modificada, correspondente a 10 µl por gota. 3
4 Como fazer? Organize seu protocolo de trabalho. Confira os procedimentos do VDRL qualitativo em amostras de liquor no passo a passo a seguir Pipete 50 µl do líquor em uma demarcação da lâmina escavada de Kline. Cuidadosamente, faça a homogeneização da suspensão antigênica modificada. Pipete 10 µl da suspensão antigênica modificada na demarcação da lâmina que contém o líquor. Coloque a lâmina no agitador orbital durante 8 minutos, com agitação de 180 rpm. Faça a leitura da reação em microscópio óptico, com objetiva de 10X e ocular de 10X, imediatamente após o término da agitação. Se não for observada floculação na amostra, a reação é negativa e o laudo pode ser emitido. Caso haja floculação na amostra de líquor puro, a reação é positiva. Neste caso, para determinar o título é necessário fazer a reação quantitativa por meio da diluição seriada do líquor em solução salina. 4
5 Reação de VDRL quantitativa no líquor Faça seu protocolo de trabalho e confira os procedimentos do VDRL quantitativo em amostras de liquor no passo a passo a seguir Faça diluições seriadas do líquor seguindo os mesmos procedimentos apresentados na ação 8 da aula 2. Use a suspensão antigênica modificada para fazer o VDRL quantitativo em líquor. Utilize 10 µl de suspensão antigênica modificada. A reação deverá ser agitada, por 8 minutos, a 180 rpm. A reação estará finalizada quando for possível estabelecer a última diluição do líquor que ainda apresentar reatividade. Esta corresponderá ao título que será reportado como o resultado final do teste. Diferenças entre VDRL no soro e VDRL no líquor VDRL no soro VDRL no líquor Modificação da suspensão antigênica Não Sim Estabilidade da suspensão antigênica 8 horas 2 horas Volume da suspensão antigênica 17µl 10µl Tempo de agitação da reação 4 minutos 8 minutos Tipo de lâmina Plana Escavada Quadro 1 VDRL no soro e no líquor! Os testes de floculação só devem ser realizados em ambientes com temperatura ambiente entre 23ºC e 29ºC. Temperaturas fora dessa faixa desestabilizam a reação, o que pode gerar resultados falso-positivos ou falso-negativos. 5
6 Referências LARSEN, S.A., POPE, V., JOHNSON, R.E., KENNEDY, JR., E.J. A Manual of Tests for Syphilis. Washington: APHA, 1998, 361p. 9ª edição LARSEN S.A., STEINER, B.M., RUDOLPH, A.H. Laboratory Diagnosis and Interpretation of Tests for Syphilis. Clin. Microbiol. Rev., Washington, v.8, n.1, p.1-21, BERRY, C.D.; HOOTEN, T.M.; COLLIER, A.C.; LUKEHART, A.S. Neurologic relapse after benzathine penicillin therapy for secondary syphilis in a patient with HIV infection. N Engl J Med.1987; 316: CENTERS FOR DISEASES CONTROL AND PREVENTION (CDC). Recommendations for Partner Services Programs for HIV infection, Syphilis, Gonorrhea and Chlamydia infections. Morbid Morttal Wkly Rep, Recomm Rep. 57(RR-9): 1-93,
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