Bolsa 12/13520-0 - Ciências Biológicas - BV FAPESP
Mapeamento estrutural do transcritoma da Archaea Halófila Halobacterium salinarum NRC-1 utilizando metodologias de footprinting
Processo: 12/13520-0
Um dos pilares centrais nos processos de expressão gênica, o RNA apresenta diversas conformações tridimensionais que estão diretamente relacionadas a suas funções informacionais, catalíticas e regulatórias. Porém, as informações estruturais relacionadas a esta classe de moléculas ainda são limitadas. O crescente relato de novos RNAs não-codificantes de função ainda desconhecida demanda a identificação de seus alvos e mecanismos de ação, no qual o conhecimento sobre a estrutura é um aspecto chave. Neste projeto, propõe-se o mapeamento estrutural do transcritoma de H.salinarum NRC-1. Este organismo tem se mostrado um interessante modelo para estudos de regulação gênica e a recente descoberta de diversos ncRNAs indica a importância do estudo dessas moléculas do ponto de vista estrutural e funcional. Para mapear a sua estrutura, utilizaremos a metodologia de footprinting que consiste em mensurar a reatividade das bases presentes em uma molécula de RNA a diversos agentes químicos ou enzimáticos e, através das reatividades relativas, características estruturais podem ser deduzidas. Serão testadas as metodologias de footprinting baseadas em hidrólise por radicais hidroxila, modificação por DMS e tratamentos com nucleases. Para o mapeamento em larga escala, utilizaremos a metodologia Parallel Analysis of RNA structures (PARS) que consiste em footprinting enzimático seguido de sequenciamento em larga escala, o que permite a análise de milhares de RNAs simultaneamente. Os resultados experimentais serão comparados com predições in silico. Desta forma pretende-se contribuir para a resolução da estrutura de RNAs não-codificantes presentes na Archaea halófila Halobacterium salinarum - NRC-1 visando futuros estudos mecanísticos e funcionais.