BDPI USP - Detalhe do registro: Clonagem de epítopos do HIV1 e do HRSV em vetores de expressão eucariótico e bacteriano, para imunização de camundongos
Arcieri, L. E. F.
Tamura, R. E.
Kosaka, I. M.
USP affiliated authors: VENTURA, ARMANDO MORAIS - ICB
Abstract: A subunidade B da toxina colérica (Ctb) é um conhecido imunógeno, podendo ser utilizada como um sistema de entrega de epítopos. Atuando como adjuvante, maximiza a resposta imune dirigida contra estes. Objetivo: desenvolver vetores bacterianos e eucarióticos capazes de expressar a Ctb fusionada ao domínio C4 da proteína gp120 do vírus HIV, ou a um peptídeo da proteína G (GM) do vírus HRSV, para possibilitar estudos de imunização. Métodos e Resultados: Os genes dos epítopos foram amplificados por PCR e clonados em vetores pCR-4-TOPO, utilizando primers que permitiriam a posterior subclonagem no vetor bacteriano pAE-ctxB. Neste passo, os epítopos de interesse são fusionados ao gene da Ctb já presente no vetor. A seguir, as seqüências resultantes foram amplificadas por PCR e clonadas no vetor pCR-4-TOPO, sendo posteriormente subclonadas no vetor eucariótico pShuttle. As subclonagens do epítopo C4 no vetor pAE-ctxB e pShuttle mostraram-se bem sucedidas quando analisadas por digestão e seqüênciamento. O mesmo ocorreu para a subclonagem do peptídeo mutado (GM) no vetor pAE-ctxB. Conclusões: Concluímos a construção dos vetores bacterianos pAE-ctxB-C4 e pAE-ctxB-GM e do vetor eucariótico, pShuttle-ctxb-C4. O processo de purificação das proteínas expressas pelos vetores bacterianos já foi iniciado. As proteínas assim produzidas junto com o vetor pShuttle-ctxB-C4 serão utilizados em testes de imunização de camundongos
Human respiratory syncytial virus N, P and M protein interactions in HEK-293T cells
Clonagem do gene L do vírus respiratório sincicial humano: perspectivas de estudos com a polimerase viral
Cloning of respiratory syncitial virus genes F and G in a mammalian expression vector
Definition of HRSV matrix protein domains
Cloningu of the human respiratory syncytial virus SH gene in expression vectors
Expressão das proteínas N e P do vírus respiratório sincicial humano (HRSV): estudos de interação com proteínas celulares e de imunização de camundongos