Dissertações Defendidas - 2017 - Programa de Pós-Graduação Stricto Sensu em Patologia Ambiental e Experimental - Programas de Mestrado e Doutorado - UNIP - Universidade Paulista
Resumo: Estudos prévios mostraram que as avermectinas, um grupo de antiparasitários, promovem efeitos sexualmente dimórficos em ratos. O objetivo deste trabalho foi investigar os efeitos sexualmente dimórficos da administração de ivermectina na idade juvenil em ratos expostos ou não ao estresse, em modelos animais de ansiedade, motores e exploratórios. Métodos: Ratos Wistar machos e fêmeas com 29 e 44 dias de idade foram tratados com 0,2 ou 1,0 mg/kg de ivermectina. Aos 45 dias de idade, metade destes ratos foi observada no campo aberto e labirinto em cruz elevada. A outra metade dos ratos foi submetida a 1 h de estresse pelo sistema "Metrô de Nova York" e observada nos mesmos modelos comportamentais. Na sequência, o sangue foi coletado e os níveis plasmáticos de corticosterona avaliados. Resultados: Nos ratos não estressados do grupo controle e tratados com 0,2 mg/kg de ivermectina foi observado que fêmeas apresentaram maior atividade no campo aberto e no labirinto em cruz elevada que os machos, mas na dose de 1,0 mg/kg não foi observada diferença significativa entre os sexos nos dois comportamentos; somente após o tratamento com 1,0 mg/kg os níveis de corticosterona foram maiores em fêmeas do que em machos. A exposição ao estresse impediu a expressão do dimorfismo sexual em todos os grupos no labirinto em cruz elevado e nos níveis de corticosterona plasmática. Conclusões: A administração da maior dose de ivermectina no período juvenil prejudica o dimorfismo sexual no campo aberto e labirinto em cruz elevada. Atribuiu-se este dado ao aumento dos níveis de corticosterona nas fêmeas que levou a redução das respostas nos dois modelos comportamentais. O estresse modifica apenas o dimorfismo sexual no labirinto em cruz elevado, principalmente por reduzir as respostas em fêmeas. Estes dados sugerem que fêmeas são mais sensíveis aos efeitos da ivermectina, particularmente em comportamentos ligados à ansiedade.
Resumo: Encephalitozoon cuniculi é um fungo que age como um patógeno intracelular e infecta diferentes tipos celulares. Nos coelhos e animais imunossuprimidos de outras espécies, incluindo humanos, ele parasita tecidos nervosos e causa uma síndrome neurológica muito característica, sendo esta infecção uma preocupação zoonótica. O objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade de macrófagos infectados com E. cuniculi após o tratamento com altas diluições de Phosphorus in vitro. Para isso, culturas de macrófagos RAW 264.7 e E. cuniculi expostas a diferentes diluições de Phosphorus foram analisadas de acordo com os seguintes parâmetros: fagocitose, atividade lisossomal, produção de citocinas/quimiocinas e análise ultraestrutural. A solução controle foi o veículo usado para produzir a matriz dos medicamentos testados (30% de álcool diluído 1:100 em água, sendo 0,06% a concentração final de álcool). As avaliações foram realizadas 01 e 24 horas pós-infecção. Fagocitose e atividade lisossomal foram avaliadas usando, respectivamente, os métodos de coloração calcofluor e laranja de acridina, seguida de análise automática de imagem (Ofline Metamorph®). A produção de citocinas foi avaliada usando o sistema MAGPIX-LUMINEX. Os experimentos foram realizados em triplicata. O próprio veículo pôde aumentar a produção de IL-6, TNF alfa e MCP1 (p<0,04), reduzindo o número de parasitas fagocitados (p<0,001). Um aumento transitório de RANTES foi visto após 1 hora do tratamento com Phosphorus 200cH, seguido do aumento da atividade lisossomal na primeira e 24 horas do tratamento (p<0,002). As características ultraestruturais dos parasitas internalizados após o tratamento com Phosphorus 200cH mostraram evidências de uma atividade mais intensa de digestão do parasita em relação a células tratadas apenas com o veículo. Os resultados mostram que o tratamento dos macrófagos infectados com Phosphorus 200cH causa mudanças significantes na sua atividade, sugerindo mais mecanismos para entender a melhora clínica de animais doentes, vista após o tratamento com este medicamento.
Resumo: Malassezia (M.) sp. é um gênero amplo de fungos que faz parte da microbiota da pele em muitos animais, incluindo o homem. Estudos têm demonstrado que Malassezia são capazes de modular a produção de citocinas pro e anti-inflamatória por queratinócitos e monócitos humanos. Encephalitozoon (E.) cuniculi são fungos intracelulares obrigatórios que determinam doenças emergentes em humanos e outros animais, com relevância econômica. Ante essa capacidade imunomoduladora, foi objetivo deste estudo avaliar a atividade do extrato de M. pachydermatis na resposta de macrófagos ante a infecção pelo E. cuniculi. Para tanto, uma suspensão de M. pachydermatis foi submetida à fervura por 30 minutos, filtrada e utilizada como extrato para estimular macrófagos da linhagem Raw 264.7. Posteriormente, os macrófagos foram infectados com esporos de E. cuniculi (2:1) e avaliados aos 15, 30, 60 minutos e 48 horas. Foi dosada nas culturas de macrófagos a quantidade de peróxido de hidrogênio. O sobrenadante foi submetido à análise de óxido nítrico. Com a coloração de Calcoflúor foi realizada a contagem de esporos de E. cuniculi fagocitados e determinados o índice fagocítico (IF) e capacidade fagocítica (CF). Foi avaliada a atividade microbicida e fagocítica pela microscopia eletrônica de transmissão (MET). Os macrófagos não tratados tiveram CF, IF e quantidades de esporos fagocitados maiores que os tratados, porém pela MET observou-se que nos macrófagos tratados a atividade microbicida foi mais rápida, já que nos vacúolos fagocíticos havia poucos esporos em diferentes graus de degeneração e pouca quantidade de material amorfo. Os macrófagos tratados tiveram maior produção de peróxido de hidrogênio e apresentaram aumento na secreção das citocinas, excetuando-se o TNF-α que teve diminuição em 15 minutos. Em conjunto, esses resultados demonstraram que o tratamento com o extrato de M. pachydermatis foi capaz de aumentar a atividade microbicida e fagocítica de macrófagos infectados com E. cuniculi.