Auxílio à pesquisa 10/00986-5 - Medula espinhal, Sinapses - BV FAPESP
Processo: 10/00986-5
Assunto(s): Medula espinhal Sinapses
A impossibilidade de reparo eficiente de lesões no SNC é um importante problema médico. Diferentes modelos experimentais de lesão axonal têm sido propostos com a finalidade de investigar a neuroproteção/degeneração e a plasticidade sináptica em motoneurônios, bem como testar o potencial de diferentes tratamentos. Neste contexto, a avulsão de raízes motoras tem se mostrado um modelo experimental reprodutível de degeneração de neurônios motores em ratos, ocorrendo morte de cerca de 80% dos motoneurônios duas semanas após a lesão. No entanto, os motoneurônios que sobrevivem a avulsão têm potencial regenerativo após o reimplante de raízes nervosas, podendo servir como um modelo de regeneração no sistema nervoso central (SNC). Contudo, na maioria das vezes, o reimplante das raízes não é suficiente para se obter um retorno funcional, uma vez que a lesão causa grande perda neuronal. Há, portanto, necessidade do desenvolvimento de estratégias para diminuição da morte neuronal pós-lesão e direcionamento dos neuritos para seu alvo correto. O emprego de selante de fibrina pode auxiliar nesse processo, porém ainda são necessários estudos acerca de suas interações com células do sistema nervoso e neuritos em crescimento. O selante de fibrina derivado de serinoprotease do veneno de serpente e criopreciptado animal não utiliza sangue humano em sua constituição. Por ter ação "drug delivery", sua aplicação possibilita sua associação com células tronco mononucleares de medula óssea (CTMMO), tendo-se em vista que recentes estudos mostraram resultados promissores em relação ao implante de células tronco para tratamento de doenças e lesões do SNC, atribuindo-se tal melhora funcional à produção de fatores tróficos. Esse trabalho visa contribuir para o futuro emprego clínico desta abordagem terapêutica, preenchendo uma importante lacuna nos procedimentos reparativos após a avulsão. Neste sentido, investigaremos a eficácia do selante de fibrina juntamente com o efeito neuroprotetor de CTMMO de animais Lewis-GFP, após avulsão e reimplante de raízes motoras. Os animais serão divididos nos seguintes grupos experimentais: Grupo 1- será injetado DMEM (meio de cultura) na interface da substância branca e cinzenta, na região da lâmina IX e as raízes (L4, L5 e L6) serão reimplantadas com selante; Grupo 2- CTMMO serão injetadas na interface da substância branca e cinzenta, na região da lâmina IX e as raízes serão reimplantadas com selante; Grupo 3- a reimplantação será apenas com selante, sem a utilização de células tronco; Grupo 4- as raízes avulsionadas serão reimplantadas com selante de fibrina associado às CTMMO; Grupo 5- será realizada a avulsão e as raízes não serão reimplantadas. Serão utilizadas técnicas de citometria de fluxo e imunocitoquímica para caracterização das CTMMO; microscopia eletrônica de transmissão para análise da plasticidade sináptica; imunoistoquímica e RT-PCR para verificação da gliose reativa e determinação da produção local de fatores tróficos in vivo pelas CTMMO. A microscopia de luz será empregada para a investigação da sobrevivência neuronal e testes motores serão realizados para o cálculo do índice funcional do nervo isquiático. (AU)