Pantheon: Clonagem da celobiose desidrogenase 1 de neurospora crassa na levedura Pichia pastoris
Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/11422/15157
Title: Clonagem da celobiose desidrogenase 1 de neurospora crassa na levedura Pichia pastoris
Author(s)/Inventor(s): Costa, Lucas Jorge Marianno
Advisor: Medeiros, Marcelo Neves de
Abstract: A celobiose desidrogenase (CDH) é uma oxidoredutase extracelular produzida por fungos lignocelulolíticos e com dois domínios distintos. Um grande domínio catalítico desidrogenase (DH) contendo FAD como cofator e um pequeno domínio citocromo (CYT) contendo o cofator heme-b, conectados por uma sequência linker. Em virtude das suas propriedades catalíticas tanto em solução quanto imobilizadas em superfícies condutoras, as CDHs têm um grande potencial para o desenvolvimento de biossensores e células de biocombustíveis por causa das suas habilidades de transferência direta de elétrons (DET) quando imobilizada, além do emprego em biorremediação de compostos aromáticos e deslignificação de biomassa celulósica através da ação redutora quando em solução. A expressão heteróloga da CDH utilizando a levedura Pichia pastoris é uma alternativa para a produção em larga escala. No entanto a alta taxa de glicosilação deste hospedeiro pode impactar nas propriedades cinéticas da CDH, inclusive na DET. Portanto, o objetivo do trabalho foi produzir heterologamente a CDH recombinante selvagem, para avaliar futuramente o seu desempenho. Para isto, o fragmento sintético de DNA que compõe a sequência da CDH de Neurospora crassa (NcCDH) foi adquirido comercialmente. As construções NcCDH wt (selvagem) e o vetor pPICZαC foram então clonadas em vetor de expressão induzida por metanol e transformadas em P. pastoris. Os resultados sugerem a transformação bem sucedida da Pichia pastoris X-33 com o vetor de expressão modulável por metanol contendo o gene da CDH1. O trabalho de expressão heteróloga está em andamento com uma estratégia para aprimorar o processo de fermentação e de purificação, desta forma, irá melhorar bastante o rendimento geral na obtenção das proteínas recombinantes de interesse no futuro.
Subject CNPq: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOQUIMICA
Citation: COSTA, Lucas Jorge Marianno. Clonagem da celobiose desidrogenase 1 de Neurospora crassa na levedura Pichia pastoris. Trabalho de Conclusão de Curso (Licenciatura em Ciências Biológicas) - Instituto de Biologia, Universidade Federal do Rio de Janeiro, Rio de Janeiro, 2019.