ReP USP - Detalhe do registro: Topografia e densidade dos cones L e M em retina de tartaguga através de técnicas de imunocitoquímica
Oliveira Bonci, D. M.
Souza, J. M. de
Abstract: Objetivo: Mapeamento e quantificação de cones duplos, vermelhos simples e verdes simples na retina da tartaruga através de anticorpo anti-opsina R/G (JH 492). Métodos e Resultados: Retinas aplanadas da tartaruga Trachemys scripta elegans foram fixadas em PFA 4% durante uma hora, lavadas em tampão fosfato 0,1M, pH 7,4 durante duas horas e incubadas com anticorpo anti-opsina (rb a-JH 492, 1:5000) durante cinco dias, a 40C. A revelação foi feita com CY3 acoplado a streptavidina (1:200) durante duas horas em temperatura ambiente. Imagens em Microscópio Confocal Zeiss 410 foram obtidas de todas as regiões da retina na altura dos segmentos externos dos fotorreceptores e na altura da membrana limitante externa, em 60 áreas de 77209 mm2. A contagem das células foi feita no programa NIH Scion Image 2.0 e os mapas com curvas de isodensidade no programa Delta Graph 4.0. Verificou-se nas células marcadas uma variação de 36 a 69% com densidade média de 5469 células por mm2.A maior densidade observada foi na região central, junto à estria visual, com um pico de até 12330 células por mm2, havendo um decréscimo gradual em direção às regiões dorsal e ventral, com densidade média de 4731 células por mm2 na região dorsal e 5246 células por mm2 na região ventral. A proporção de cones duplos relativa ao número total de fotorreceptores varia entre 14,23 e 27,15% sendo menor na região central, junto à estria visual. A densidade de fotorreceptoresL e M, excluindo-se os cones duplos é de 3481 células por mm2 com porcentagem de 34,40. Conclusões: O método usado para esta quantificação mostrou-se eficaz, com os resultados acompanhando os obtidos por outros métodos. A existência de biotina endógena na retina permitiu quantificar o número total de fotorreceptores e de cones duplos. Estes números serão confirmados com novas contagens e complementados com os números a serem obtidos para cones azuis