Bolsa 09/11276-1 - Biologia do desenvolvimento, Rhynchosciara - BV FAPESP
Caracterizacao de uma putativa quinase dependente de ciclina e analise de sua pos...
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Clonagem e caracterizacao do gene hmg-d de rhynchosciara americana.
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Perfil de expressao genica durante o desenvolvimento ovariano de rhynchosciara ame...
Caracterização do putativo gene CDK7 e seu possível papel nos endociclos e desenvolvimento larval de Rhynchosciara americana
Processo: 09/11276-1
Beneficiário: Adam Arai Martens
Assunto(s): Biologia do desenvolvimento Rhynchosciara
O presente trabalho tem como objetivo caracterizar um gene de uma putativa quinase dependente de ciclina e analisar sua possível atuação nos endociclos presentes nos diferentes tecidos de Rhynchosciara americana. Interessantemente, um transcrito correspondente a este gene foi identificado em uma biblioteca de cDNA de glândulas salivares, a qual foi construída com mRNAs presentes durante o período em que ocorre o último ciclo replicativo da politenização e inicio da amplificação gênica de diferentes pufes de DNA. Entretanto, foram identificadas somente duas mensagens de CDKs (CDK7 e Cdc2) e uma mensagem de ciclina, sendo que sua atuação em processos de endoreplicação ainda não está muito clara, bem como a ausência de outros componentes do endociclo, tornando a caracterização e estudo do gene e seu papel extremamente interessante. A fim de caracterizar o putativo gene Cdk7, pretende-se clonar as porções 5' e 3' de seu mensageiro através de RACE e utilizar o cDNA completo como sonda para uma varredura de uma biblioteca genômica construída em fagos. O clone genômico será utilizado para localização cromossômica deste gene por meio de hibridização in situ fluorescente (FISH) e para seqüenciamento. O perfil de expressão será traçado por RT-PCR em tempo real em glândula salivar e outros tecidos em diferentes fases do desenvolvimento e complementado por western blots, com uso de anticorpo específico contra CDK7 de Rhynchosciara. A análise de imunoblots de eletroforese 2D de extratos celulares seria utilizada para determinar outras informações sobre CDK7, tais como possíveis isoformas e modificações pós-traducionais em diferentes tecidos ou fases do desenvolvimento.