Proteínas hidrolisadas de soro de leite com propriedades bioativas associadas à redução de fatores de risco de doenças na infância
Harriman Aley Morais (UFMG, 25 de Junho, 2013)
Abstract: Dentre as doenças crônicas não transmissíveis, a obesidade cresce de forma epidêmica em todo o mundo, atingindo todas as faixas etárias e, comumente, está associada à hipertensão arterial sistêmica e ao estresse oxidativo. O tratamento da obesidade engloba mudanças no estilo de vida e nos hábitos alimentares e, neste caso, oferecer produtos alimentícios atraentes para o público infanto-juvenil é um desafio. Neste trabalho, foram empregadas a pancreatina e as proteases de Bacillus licheniformis, de Aspergillus oryzae e de Aspergillus sojae, na obtenção de proteínas hidrolisadas do soro de leite com elevado teor de oligopeptídeos e com propriedades anti-hipertensiva e antioxidante, que poderiam ser usadas no desenvolviemento de fórmulas infantis para o tratamento da obesidade. A caracterização destes hidrolisados proteicos foi baseada na determinação do grau de hidrólise (GH), por diferentes metodologias (teor de proteína solúvel; titulação com formol; derivatização com ortoftalaldeído OPA; osmometria), e na análise do perfil peptídico por cromatografia líquida de alta performance de exclusão molecular, seguida da quantificação dos peptídeos e aminoácidos livres pelo método rápido da Área Corrigida da Fração. Além disso, estabeleceu-se a correlação entre estes parâmetros (grau de hidrólise x perfil peptídico), bem como a avaliação in vitro das propriedades anti-hipertensiva e antioxidante dos hidrolisados. Nas condições hidrolíticas estudadas, verificou-se que o emprego da protease de Bacillus licheniformis (E:S de 8:100) e da pancreatina (E:S de 2:100, 3:100, 4:100 e 8:100) permitiu a obtenção dos hidrolisados com as maiores somas dos teores de di- e tripeptídeos e de aminoácidos livres (9,99% e 11,28%, em média, respectivamente) e com os menores teores de grandes peptídeos (44,61% e 44,13%, em média, respectivamente). Com relação ao GH, os maiores valores foram obtidos para a pancreatina (36,41%) e para as proteases de Bacillus licheniformis (44,70%) e de Aspergillus oryzae (32,79%), determinados pelo método do teor de proteína solúvel, enquanto que para a protease de Aspergillus sojae este resultado foi observado com o método da derivatização com OPA (20,17%). Em vários casos, detectou-se a correlação positiva de forte intensidade (r > 0,7) e significativa (p < 0,05), entre os métodos de determinação do GH, cuja intensidade da relação variou em função do método e do tipo de enzima empregados. Além disso, em vários casos, verificou-se que os resultados do GH correlacionaram-se significativamente e de forma positiva com os teores de di- e tripeptídeos, e de forma negativa com o teor de grandes peptídeos. Neste estudo, vinte e quatro hidrolisados foram preparados e suas atividades inibitórias (AI) da enzima conversora de angiotensina (ECA) foram avaliadas in vitro, resultando em taxas de inibição variando de 2,02 a 96,66%, sendo que onze apresentaram AI considerada muito alta (> 80%). Os hidrolisados obtidos pela ação da protease de Bacillus licheniformis apresentaram os maiores valores de AI (média de 85,96%) quando comparados com o emprego de outras enzimas, em todos as relações enzima:substrato testadas. A hidrólise enzimática das proteínas do soro de leite também levou a grande variabilidade dos resultados obtidos para a atividade antioxidante (3,79% a 90,76%). Os hidrolisados obtidos pela ação da protease de Aspergillus sojae apresentaram os maiores valores de atividade antioxidante, pelos métodos do DPPH (59,70%) e da desoxirribose (58,77%), na maioria das relações E:S estudadas. Para o método do pirogalol, os maiores valores (48,70 a 90,76%) foram encontrados quando a hidrólise foi promovida pela ação da protease de Bacillus licheniformis, em todas as relações E:S. Assim, pode-se concluir que na presente pesquisa foi possível otimizar as condições hidrolíticas para a obtenção de hidrolisados de concentrado proteico de soro de leite, com elevado valor nutricional e com propriedades anti-hipertensivas e antioxidantes.
URI: http://hdl.handle.net/1843/BUBD-AY6FV4
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Diagnóstico de sepse neonatal tardia associada ao cateter venoso central em unidade neonatal segundo critérios nacionais e internacionais
Caroliny Alves Pessoa (UFMG, 9 de Março, 2018)
Abstract: Objetivo: Investigar os critérios diagnósticos das infecções tardias associadas ao cateter venoso central (CVC) em uma Unidade Neonatal de um Hospital Universitário de Minas Gerais. Método - Estudo prospectivo, de coorte, onde foram coletados os dados clínicos e laboratoriais dos recém-nascidos com suspeita de sepse neonatal tardia associada ao CVC, internados na Unidade Neonatal do Hospital das Clínicas da Universidade Federal de Minas Gerais no período de dezembro de 2015 a maio de 2017. Foram incluídos todos os recém nascidos submetidos ao cateterismo central e excluídos aqueles nos quais o cateter foi inserido em ambiente externo à Unidade. O diagnóstico de sepse neonatal tardia associada ao cateter venoso central seguiu os critérios da ANVISA (2013) e do CDC/NHSN (2016). Para ambos os critérios, foram ajustados modelos univariados e as variáveis cujo valor-p foi que 0,20 foram incluídas para análise no modelo multivariado. Na análise multivariada do critério ANVISA, foram feitos ajustes separados sendo o grupo 1 constituído de sinais clínicos, o grupo 2, do conjunto de exames laboratoriais e no grupo 3, foram incluídas as variáveis de ajuste dos grupos 1 e 2. Para ambos os critérios, foram mantidas no modelo final, as variávels com valor-p 0,05. A qualidade de ajuste dos modelos foi verificada pelo teste de Hosmer & Lemeshow e a análise estatística foi realizada no SPSS versão 20.0. Resultados: Dos 191 recém nascidos com CVC avaliados, 92 RN tiveram suspeita de sepse neonatal tardia. Segundo critérios da ANVISA, 47 RN apresentaram um episódio de sepse neonatal tardia associada ao CVC e três apresentaram dois episódios cada totalizando 53 episódios (33 infecções primárias de corrente sanguínea laboratorial e 20 infecções primárias de corrente sanguínea clínica). Pelo critério do CDC/NHSN, 20 episódios foram classificados como sepse neonatal tardia associada ao cateter venoso central. Segundo os critérios da ANVISA, os dados clínicos candidatos ao modelo multivariado foram instabilidade térmica, intolerância à glicose, instabilidade hemodinâmica e intolerância alimentar. E para as variáveis laboratoriais, permaneceram proteína C reativa, contagem de plaquetas, relação neutrófilos imaturos/neutrófilos totais e neutropenia. Nos grupos dos dados clínicos e dos dados laboratoriais as variáveis associadas significativamente com sepse neonatal tardia foram instabilidade hemodinâmica (p=0,004), proteína C reativa (p=0,047) e relação neutrófilos imaturos/neutrófilos totais (p=0,011). Após reajuste da análise, a proteína C reativa (p=0,047) e a relação neutrófilos imaturos/neutrófilos totais (p=0,011) permaneceram no modelo. Segundo os critérios do CDC/NHSN, as variáveis candidatas ao modelo multivariado foram hipotermia (p=0,018) e hipertermia (p=0,012). Após ajuste de forma multivariada, hipotermia (p=0,008) e hipertermia (p=0,006) foram significativas ao nível de 0,05. Conclusão Instabilidade hemodinâmica, PCR e relação I/T apresentaram significância no diagnóstico de sepse neonatal tardia associada ao cateter venoso central segundo critério da ANVISA, e hipotermia e hipertermia segundo critério do CDC/NHSN.
URI: http://hdl.handle.net/1843/BUBD-AYEJAJ
1___dissertacao_para_cd_23_de_marco.pdf (1.353Mb)
Mortalidade por asma em crianças e adolescentes no Brasil ao longo de 20 anos (1996-2015)
Raquel Pitchon dos Reis (UFMG, 16 de Fevereiro, 2018)
Abstract: OBJETIVO: avaliar os óbitos por asma e a tendência temporal da taxa de mortalidade específica por asma em crianças e adolescentes até 19 anos de idade no Brasil segundo sexo, faixa etária, região geográfica do país e local do óbito. MÉTODOS: estudo ecológico de séries temporais em que foram avaliados os óbitos por asma ocorridos no Brasil entre 1996 e 2015, na população até 19 anos de idade. Os dados foram coletados no Departamento de Informática do Sistema Único de Saúde do Brasil, Ministério da Saúde do Brasil. Foram analisadas a taxa de mortalidade específica por asma (TMA) e a sua tendência temporal pelo teste de regressão linear. As variáveis intervenientes foram faixa etária, sexo, local de ocorrência do óbito (hospitalar ou fora do ambiente hospitalar) e região geográfica do país. RESULTADOS: no Brasil ocorreram 5.014 óbitos por asma em crianças e adolescentes até 19 anos de idade ao longo dos 20 anos avaliados, a maioria (68,1%) registrada em menores de cinco anos. Observou-se significativa redução da TMA entre 1996 e 2015, com coeficiente = - 0,018 (IC 95% -0,021; -0,016), correspondendo à redução geral de 59,8%. A taxa de mortalidade padronizada para a idade oscilou entre 0,57/100.000 em 1997 e 0,21/100.000 em 2014. Em geral, a TMA foi mais elevada no Nordeste. Considerando p<0,05, em menores de um ano e naqueles entre cinco e nove anos houve predominância de óbitos do sexo masculino 59,1 e 53,9%, respectivamente. Entre 10 e 19 anos, o predomínio foi do sexo feminino (53,7%). Quanto ao local dos óbitos, 79,4% ocorreram em ambiente hospitalar. As mortes fora do ambiente hospitalar foram significativamente mais frequentes entre adolescentes, 26,4%, quando comparadas com outros grupos etários. Não houve diferença da tendência temporal entre os sexos nem decréscimo significativo dos óbitos documentados fora do ambiente hospitalar. CONCLUSÕES: houve redução da tendência temporal da mortalidade por asma em crianças e adolescentes nos 20 anos avaliados. As taxas de mortalidade variaram nas diversas regiões geográficas do país, sendo, em geral, mais elevadas na região Nordeste, refletindo provavelmente iniquidades sociais, econômicas e na área da saúde. A maioria dos óbitos ocorreu em menores de cinco anos. As dificuldades de diagnóstico da doença nessa faixa etária associaram-se à triste realidade de vulnerabilidade, em países e regiões de baixa renda, onde esse grupo representa maior proporção da mortalidade na infância, indicando a necessidade de mais atenção e prioridade para ações de saúde. Na adolescência, ressaltam-se óbitos fora do ambiente hospitalar, sinalizando a possibilidade de subdiagnóstico e subtratamento. As mortes por asma são eventos raros, mas inaceitáveis, considerando-se o caráter tratável da doença e os fatores evitáveis na maioria dos desfechos fatais. O conhecimento sobre a tendência temporal da mortalidade é instrumento de vida e colabora para a detecção precoce de epidemias de mortes e para o planejamento de políticas públicas de saúde com o objetivo de melhorar a qualidade da assistência aos pacientes.
URI: http://hdl.handle.net/1843/BUBD-AXKM7K
tese_mestrado_r ... e_2018_impress_o_final.pdf (1.567Mb)
Análise quantitativa de aminoácidos por HPLC em sangue e urina coletados em papel-filtro no período neonatal: validação de método, estabelecimento de valores de referência e aplicação prática em erros inatos do metabolismo
Daniela Magalhaes Nolasco (UFMG, 27 de Junho, 2017)
Abstract: INTRODUÇÃO: Erros inatos do metabolismo constituem um grupo diversificado de doenças individualmente raras, mas que agrupados correspondem a 10% das doenças genéticas já descritas. Ocorrem por um defeito enzimático específico que leva à interrupção de uma via metabólica. Dentre eles se encontram as aminoacidopatias. As análises quantitativas de aminoácidos no sangue e na urina são exames especialmente indicados para diagnóstico e acompanhamento de pacientes com aminoacidopatias e a técnica de cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) é a mais utilizada para essa detecção. A coleta de amostras em papel filtro vem crescendo exponencialmente e são muitas as vantagens atribuídas a amostras biológicas processadas desta forma. OBJETIVOS: Validar um método de análise quantitativa de aminoácidos por HPLC em sangue e urina coletados em papel-filtro e estabelecer valores de referência no período neonatal. METODOLOGIA: Amostras de sangue coletado por punção venosa aplicado em papel-filtro (n=58) e urina coletada em papel-filtro colocado na fralda (n=45), de um grupo de recém-nascidos saudáveis, com idades entre dois e nove dias. Prétratamento e extração das amostras segundo metodologia descrita por Yamaguchi (1997). Separação dos aminoácidos por HPLC, modelo Alliance HT Waters e2795, coluna de fase reversa C18. RESULTADOS: A separação cromatográfica dos aminoácidos foi adequada. O método demonstrou linearidade, limites de detecção e quantificação, repetibilidade e recuperação satisfatórios. Foi detectado efeito de matriz para todos os aminoácidos. Os valores de referência para os aminoácidos aspartato, serina, glutamato, glicina, histidina, arginina, treonina, alanina, prolina, cistina, tirosina, valina, metionina, lisina, isoleucina, leucina e fenilalanina foram definidos. CONCLUSÕES: Este trabalho descreveu um método simples, rápido e eficaz para análise simultânea de 17 aminoácidos em sangue e urina coletados em papel filtro em uma única corrida e os valores de referência foram estabelecidos e validados. Esse método pode ser utilizado em laboratórios de rotina e é uma ferramenta ideal para a área pediátrica, onde obter um grande volume de amostra nem sempre é possível.
URI: http://hdl.handle.net/1843/BUBD-AXSGEW
disserta__o_mestrado_daniela_nolasco.pdf (2.117Mb)
Modelos de predição em anomalias congênitas dos rins e do trato urinário: necessidade de cirurgia e progressão para doença renal crônica
Mariana Affonso Vasconcelos (UFMG, 15 de Setembro, 2016)
Abstract: INTRODUÇÃO: As anomalias congênitas dos rins e do trato urinário (Congenital Anomalies of the Kidney and the Urinary Tract - CAKUT) compreendem um grupo heterogêneo de doenças que variam entre alterações dos rins, ureteres, uretra e/ou bexiga. O diagnóstico precoce das uropatias reveste-se de especial importância devido a sua natureza progressiva e seu potencial de irreversibilidade. OBJETIVOS: Os objetivos desta tese consistem em uma análise mais abrangente sobre a abordagem cirúrgica de pacientes com CAKUT (estudo1) e uma mais específica que consiste em avaliar a evolução de doença renal crônica (DRC) moderada ou grave em pacientes com válvula de uretra posterior (VUP) (estudo 2). No primeiro estudo, foi desenvolvido um modelo de predição para a necessidade de cirurgia em pacientes com CAKUT e, no segundo estudo, um modelo de predição para evolução para DRC moderada em pacientes com VUP. ESTUDO 1 - PACIENTES E MÉTODOS: Estudo de coorte retrospectiva de 694 lactentes com CAKUT admitidos na unidade de nefrologia pediátrica do HC/UFMG de 1987 a 2013. O desfecho primário foi intervenção cirúrgica. A idade mediana de admissão foi de 2 meses e 65% eram do sexo masculino. Considerando as características do paciente à admissão: gênero, idade, creatinina sérica, ritmo de filtração glomerular estimado RFGe, oligohidrâmnio, presença de outras anomalias do trato urinário associadas com dilatação da pelve renal (megaureter, megabexiga), lateralidade da dilatação anteroposterior (DAP) da pelve renal (unilateral ou bilateral), presença de lesões renais na cintilografia estática (DMSA), magnitude da dilatação anteroposterior (DAP) da pelve renal e período de admissão (antes de 2000). Um modelo de predição foi desenvolvido utilizando o modelo de taxas de falhas proporcionais de Cox e a seleção de backward. A validação interna foi obtida através da técnica de bootstrap. RESULTADOS: Um total de 164 pacientes (23%) foram submetidos à cirurgia com uma idade média de 7.8 meses. Os preditores inclusos no modelo foram RFGe, presença de outras anormalidades associadas a DAP da pelve renal, presença de lesões renais no DMSA, a magnitude da DAP da pelve renal e o período de admissão. O otimismo do modelo foi de 0.84. CONCLUSÃO: O nosso modelo de predição para necessidade de cirurgia em pacientes com CAKUT pode contribuir para identificar pacientes de alto risco para intervenção cirúrgica. Mais estudos serão necessários para validar o modelo em amostras independentes de pacientes com CAKUT. ESTUDO 2 PACIENTES E MÉTODOS: Neste estudo de coorte retrospectiva, 173 pacientes com VUP foram sistematicamente acompanhados na unidade de nefrologia pediátrica do HC/UFMG. Os desfechos primários deste estudo foram DRC estágio 3 ou maior e DRC terminal. As covariáveis estudadas foram período de admissão (1970-1989 x 1990-2015), apresentação clínica (pré-natal e pós-natal), presença de refluxo vesicoureteral (RVU), lateralidade do RVU (unilateral ou bilateral), creatinina à admissão, RFGe à admissão, nadir de creatinina (menor valor da creatinina durante o primeiro ano após a intervenção cirúrgica), episódios de infecção do trato urinário e intervenção cirúrgica primária. Duas variáveis tempo dependentes foram incluídas na análise: proteinúria e hipertensão arterial sistêmica (HAS). A análise de sobrevida foi realizada através do modelo de taxas de falhas proporcionais de Cox com covariáveis tempo-dependentes. RESULTADOS: Depois de um tempo médio de 83 meses, 65 crianças desenvolveram (37.6%) desenvolveram DRC estágio 3 e 39% (22.5%) atingiram estágio 5. Quatorze pacientes evoluíram para óbito durante o acompanhamento. Trinta e seis pacientes (20.8%) apresentaram HAS e 78 (45%) apresentaram proteinúria durante o acompanhamento. Após o ajuste pelo modelo de Cox variável dependente, creatinina a admissão, nadir de creatinina, hipertensão e proteinúria permaneceram como preditores independentes para DRC maior ou igual ao estágio 3 e DRC terminal. CONCLUSÃO: Nossos achados sugerem que a identificação precoce dos fatores de risco passíveis de intervenção clínica podem contribuir para amenizar a progressão da disfunção renal.