ReP USP - Detalhe do registro: Efeito da insulina na expressão de iNOS, COX-2 e ativação de NF-kB em macrófagos alveolares estimulados por LPS
Abstract: Objetivos: O desenvolvimento do choque séptico é conseqüência comum de infecções por bactérias Gram-negativas. Mediadores liberados por macrófagos no pulmão ativados por produtos bacterianos como lipopolissacárides (LPS) contribuem para os sintomas da sepsis. Em trabalho anterior, mostramos que a insulina diminui a produção de TNF-alpha induzida por LPS em macrófagos alveolares (MAs). Neste estudo, nós investigamos o efeito da insulina sobre a ativação do Fator Nuclear kappa B (NF-kB) e a produção de óxido nítrico (NO) e prostaglandina (PG)-E2 estimuladas por LPS, bem como sobre a expressão da óxido nítrico sintase induzível (iNOS) e ciclooxigenase (COX)-2 de MAs. Métodos e Resultados: MAs de ratos machos da linhagem Wistar com 8 semanas de idade (n=6), peso entre 200-220g, foram estimulados com LPS (100 ng/mL) por 30 minutos. A insulina (1 mU/mL) foi adicionada 10 minutos antes do LPS. A expressão das enzimas, ativação de p65NF-kB e fosforilação do Inibidor de kappa B (I-kB)alpha foram detectados por immunobloting, a concentração de NO pela reação de Griess e de PGE2 por imunoensaio enzimático. O LPS induziu a expressão de iNOS e COX2 e a produção de NO e PGE2, além da ativação de p65NF-kB e fosforilação de I-kBalpha citoplasmática. A administração de insulina antes do LPS suprimiu a expressão de iNOS e COX-2, diminuiu a produção de NO e PGE2, além de inibir a ativação de p65NF-kB nuclear. A insulina também foi capaz de diminuir a fosforilação deI-kBalpha citoplasmático. ) Conclusão: Estes dados mostram que, em MAs estimulados por LPS, a insulina é capaz de inibir a translocação nuclear de NF-kB, provavelmente por bloquear a degradação de I-kBalpha e, assim, suprimir a produção de NO e PGE2 - dois mediadores que contribuem para o choque séptico.